Ⅴ型腺病毒纤维蛋白基因真核表达质粒的构建及表达

目的 :构建腺病毒纤维蛋白基因的真核表达质粒 ,并检测其在真核细胞中的表达 ,为腺病毒靶向性载体构建创造条件。方法 :采用限制性内切酶技术 ,酶切腺病毒骨架质粒pAdEasy 1,经多次亚克隆 ,最后完成克隆纤维蛋白基因并构建其真核表达质粒。用脂质体法将构建好的真核表达质粒瞬时转染COS 7细胞 ,于转染后 72h ,用Westernblot法检测所表达的蛋白。结果 :克隆成功纤维蛋白基因 ,并构建纤维蛋白基因真核表达质粒pcDNA/Fiber,经限制性内切酶酶切鉴定及测序证实了其正确性。Westernblot结果显示 ,新表达蛋白在变性条件下大小为 6 2kD ,而在非变性条件下为 186kD。结论 :纤维蛋白基因真核表达质粒能在真核细胞中表达 ,产物具有三聚体结构 ,可用于腺病毒靶向性载体的构建。