术前血清V-set和免疫球蛋白结构域4以及长链非编码核糖核酸SBF2反义RNA1与肾结石患者经皮肾镜取石术后急性肾损伤的关系

目的探讨术前血清V-set和免疫球蛋白结构域4(VSIG4)以及长链非编码核糖核酸(LncRNA)SBF2反义RNA1(SBF2-AS1)与肾结石患者经皮肾镜取石术后急性肾损伤(AKI)的关系。方法选择2020年1月—2022年12月本院收治的109例肾结石患者为研究对象。术前检测患者血清VSIG4水平以及LncRNA SBF2-AS1表达,术后记录AKI发生情况。采用多因素Logistic回归模型分析肾结石患者经皮肾镜取石术后发生AKI的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析VSIG4、LncRNA SBF2-AS1预测肾结石患者经皮肾镜取石术后发生AKI的价值。结果本研究中,术后发生AKI者16例。AKI组血清VSIG4水平低于非AKI组,LncRNA SBF2-AS1表达高于非AKI组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,术前高尿酸水平、术前高LncRNA SBF2-AS1表达、较长的手术时间、术中低血压是肾结石患者经皮肾镜取石术后发生AKI的危险因素(P<0.05),术前高VSIG4水平是保护因素(P<0.05)。术前血清VSIG4、LncRNA SBF2-AS1水平预测肾结石患者经皮肾镜术后发生AKI的曲线下面积分别为0.854、0.705,二者联合预测的曲线下面积为0.948,大于各指标单独预测(Z=1.995、2.958,P<0.05)。结论肾结石患者术前血清VSIG4水平降低、LncRNA SBF2-AS1表达增高与经皮肾镜取石术后AKI的发生有关,联合检测术前VSIG4、LncRNA SBF2-AS1可预测术后AKI的发生风险。

含V-set免疫球蛋白域蛋白4与肾脏相关疾病的研究进展

含V-set免疫球蛋白域蛋白4(VSIG4)是免疫球蛋白超家族成员之一,属于B7家族相关蛋白,为Ⅰ型跨膜蛋白,特异表达于静息的组织巨噬细胞,主要抑制M1型巨噬细胞的极化和T细胞的增殖与活化。VSIG4参与了多种肾脏疾病的发生发展,VSIG4的表达对肾脏疾病的诊断、治疗和预后起到关键作用,为进一步了解VSIG4与肾脏相关疾病的关系,本文综述了近几年VSIG4在肾脏相关疾病的研究,以期为临床提供一定的参考。

特应性皮炎患者血清C型凝集素结构域家族4成员G水平及其意义

目的探究特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)患者血清C型凝集素结构域家族4成员G(C-type lectin domain family 4 member G,CLEC4G)水平及其临床价值。方法收集60例AD患者(观察组)和29例对照者(对照组)血液样本,检测样本中CLEC4G、白细胞介素-33(interleukin-33,IL-33)、总免疫球蛋白E(total IgE,tIgE)、特异性免疫球蛋白E(specific IgE,sIgE)及嗜酸性粒细胞水平;分析CLEC4G水平与AD患者临床资料及IL-33间的相关性;采用logistic回归分析CLEC4G、IL-33等指标评估AD发病的风险。结果与对照组相比,观察组患者血清CLEC4G水平显著降低[(359.4±57.3)pg/mL vs(521.8±48.1)pg/mL];CLEC4G水平在儿童期、青少年与成年期及男、女性AD患者中均差异无统计学意义(P>0.05);与tIgE≤100 kU/L组相比,CLEC4G水平在100~200 kU/L组、tIgE≥200 kU/L组患者中显著降低,但在100~200 kU/L组、tIgE≥200 kU/L组间无显著差异;血清CLEC4G水平只在AD病情中度组中显著降低,在其他组间差异无统计学意义(P>0.05);IL-33在观察组患者血清中水平升高,但CLEC4G与IL-33间无显著相关性(r=0.090,P=0.495);年龄小于14岁、IL-33是AD发病的危险因子,OR值分别为2.756、1.241,95%CI分别为1.076~7.060、1.030~1.495;而CLEC4G为AD发病的保护因子(OR=0.890,95%CI:0.809~0.979)。结论CLEC4G可能是独立于IL-33介导AD发病的保护因子。

阻断TIM-4分子对M1/M2型巨噬细胞极化及同种异体免疫排斥反应的影响

目的:运用特异性单克隆抗体阻断抗原T细胞免疫球蛋白及黏蛋白结构域蛋白-4(T-cell immunoglobulin and mucin domain containing protein-4,TIM-4),探讨其对巨噬细胞(M1/M2)极化及同种异体免疫排斥反应的影响。方法:构建同种异体免疫排斥模型,将BALB/c小鼠脾细胞悬液注入C57BL/6小鼠腹腔,分为同型对照组(n=6)和抗TIM-4组(n=6);分别腹腔注射同型对照免疫球蛋白和抗TIM-4单克隆抗体,300μg/只;第5天,重复注射1次;第10天,处死两组小鼠,采用流式细胞术检测受体鼠脾和腹腔中M1和M2型巨噬细胞百分比;用实时荧光定量PCR法检测受体鼠脾和腹腔细胞中微小RNA-21(miR-21)、IL-10、p40、p35和EB病毒诱导基因3(Epstein-Barr virus-induced gene-3,EBi-3)等mRNA表达水平。结果:在脾细胞中,与同型对照组相比,抗TIM-4组M1和M2型巨噬细胞百分比、miR-21和p40 mRNA表达水平无明显变化(P均>0.05),但IL-10和p35 mRNA表达水平明显升高(P均<0.05),EBi-3 mRNA表达水平明显下降(P<0.05);在腹腔中,与同型对照组相比,抗TIM-4组M1型巨噬细胞百分比和p35 mRNA表达水平无明显变化(P均>0.05),而M2型巨噬细胞百分比、IL-10、p40和EBi-3 mRNA表达水平均显著升高(P均<0.05),miR-21表达水平显著降低(P<0.05)。结论:阻断TIM-4分子促进小鼠腹腔M2增殖分化,上调脾和腹腔细胞中抑炎因子和促炎因子mRNA表达,减轻同种异体免疫排斥反应。

程序性死亡分子-1＋T细胞免疫球蛋白黏蛋白结构域相关分子-3＋细胞在结直肠癌患者外周血及组织CD4＋T淋巴细胞中的比例及临床意义

目的探讨程序性死亡分子-1（PD-1）＋T细胞免疫球蛋白黏蛋白结构域相关分子-3（Tim-3）＋细胞在结直肠癌（CRC）患者外周血和组织CD4＋T淋巴细胞中的比例及其与CRC疾病进展的关系。方法连续采样的方法，收集2012年1月至2013年1月于我院收治的58例确诊CRC患者的外周血标本（CRC组），并同时收集其中7例Ⅲ期患者的肿瘤组织和癌旁组织标本，密度梯度离心法分离获得单个核细胞，采用流式细胞学方法检测PD-1＋Tim-3＋细胞在CD4＋T淋巴细胞中的比例。结果PD-1＋Tim-3＋细胞在CRC组外周血CD4＋T淋巴细胞中的比例明显高于其在20例对照组外周血中的比例（2.1%比1.2%，P=0.012）。PD-1＋Tim-3＋细胞在Ⅲ/Ⅳ期CRC患者外周血CD4＋T淋巴细胞中的比例明显高于其在Ⅰ/Ⅱ期CRC患者（3.5%比1.9%，P=0.024）及对照组中的比例（3.5%比1.2%，P=0.002）。PD-1＋Tim-3＋细胞在CRC肿瘤组织CD4＋T淋巴细胞中的比例明显高于其在癌旁组织（21.58%比5.66%，P=0.002）及外周血（21.58%比2.44%，P=0.001）中的比例。CD4＋PD-1＋Tim-3＋T淋巴细胞分泌干扰素-γ（IFN-γ）的能力低于其他各亚群。结论CRC患者外周血及肿瘤组织CD4＋T淋巴细胞中比例升高的PD-1＋Tim-3＋细胞亚群与T细胞功能耗竭有关，可能是CD4＋T细胞参与肿瘤细胞免疫逃逸，促进CRC病情进展的机制之一。

免疫检查点分子在复发性流产中的研究进展

复发性流产近年来发病率呈升高趋势,其病因复杂,约40%~50%的患者流产没有明确病因,尚无令人满意的治疗方案,严重影响育龄期患者的身心健康,如何改善这部分患者的妊娠结局是目前生殖医学领域急需解决的一大问题。免疫检查点分子是抑制免疫效应细胞的调节分子,已在肿瘤学、免疫学等领域得到了广泛的研究。近期研究表明免疫检查点分子在母胎界面免疫耐受中起重要作用,其异常表达可能通过调节母胎界面免疫细胞功能,进而参与复发性流产的发病。本文就目前研究较深入的免疫检查点分子对复发性流产的影响及干预免疫检查点分子对复发性流产妊娠结局的影响进行综述,已期为下一步病因相关的基础研究和治疗相关的临床应用提供新的思路。

传染性单核细胞增多症患儿外周血B淋巴细胞中免疫抑制因子的表达及意义

目的观察4种免疫抑制因子〔程序性死亡受体-1(PD-1)、程序性死亡受体-1配体(PD-L1)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)、含T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域蛋白(TIGIT)〕在传染性单核细胞增多症(IM)B淋巴细胞上的表达水平及临床意义。方法以2017年4月—9月湖南省儿童医院收治的IM患者为研究对象(IM组),急性期59例,恢复期34例,20例健康体检儿童为正常对照组。采用流式细胞术分别检测PD-1、PD-L1、CTLA-4、TIGIT在各组B淋巴细胞上的表达水平及急性期表达量与血浆/血清EBV-DNA含量的相关性。结果与正常对照组比较,IM急性期组患者的PD-1、PD-L1、CTLA-4、TIGIT在B细胞上均显著升高〔PD-1:5.22(3.15)%比0.76(0.86)%,PD-L1:7.80(5.29)%比0.87(0.09)%,CTLA-4:4.23(6.21)%比0.52(0.28)%,TIGIT:9.78(5.72)%比2.23(1.05)%,均P<0.05〕。IM恢复期组PD-L1、TIGIT在B细胞上的表达较正常对照组明显升高〔PD-L1:4.43(6.27)%比0.87(0.09)%,TIGIT:6.03(5.46)%比2.23(1.05)%,均P<0.05〕,但其升高程度明显低于急性期组(均P<0.05)。对急性期59例患者抽血查EBV-DNA检测结果为(8.44±2.04)×10~5拷贝/mL。相关性分析显示,IM患者急性期TIGIT在B细胞上表达水平与EBV-DNA含量呈正相关(r=0.371,P=0.006);而其余3个指标则无相关性,PD-1:r=0.049,P=0.723;PD-L1:r=0.068,P=0.625;CTLA-4:r=0.662,P=0.659。结论PD-1、PD-L1、CTLA-4、TIGIT在IM急性期表达上调,随着疾病恢复而表达有所下降,提示在IM发病中有一定作用;同时急性期TIGIT表达水平与血浆/血清EBV-DNA含量高低有关。

非小细胞肺癌患者外周血及肿瘤组织中CD4^+T淋巴细胞上Tim-3的表达及其对巨噬细胞活性的影响

目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血及肿瘤组织中CD4^+T淋巴细胞上T细胞免疫球蛋白黏蛋白结构域分子3(Tim-3)的表达及其临床意义。方法收集西南医科大学附属医院2017年1月至2018年6月收治住院的64例NSCLC患者外周血、肺癌组织和癌旁正常肺组织标本,同时选取40例健康人群作为对照。采用流式法检测Tim-3和程序性死亡蛋白配体(PD-1)在CD4^+T细胞上的表达,实时荧光定量PCR(qPCR)测定巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶1(Arg1)mRNA的水平,分析Tim-3和PD-1与巨噬细胞活性的关系。结果肺癌患者外周血中CD4^+T淋巴细胞上Tim-3、PD-1表达分别为4.96%和24.13%,均显著高于健康对照人群的2.05%及10.25%(P<0.05);且肺癌患者外周血CD4^+T淋巴细胞上Tim-3^+PD-1^+的表达水平为4.36%,也明显高于健康对照组的2.63%(P<0.05)。肺癌组织中CD4^+T淋巴细胞上Tim-3、PD-1表达及Tim-3^+PD-1^+共表达均显著高于癌旁正常组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。与癌旁正常组织比较,肺癌组织中iNOS mRNA略有降低,而Arg1 mRNA水平则显著升高,且肺组织中Tim-3、PD-1表达和Tim-3^+PD-1^+共表达与巨噬细胞活性iNOS/Arg1比值均呈负相关(P<0.05)。结论NSCLC患者外血周及肿瘤组织中CD4^+T淋巴细胞上Tim-3和PD-1表达上调,促使M1型巨噬细胞转变为M2型,具有负性免疫调节作用。

用于肿瘤治疗的免疫检查点及其抑制剂研究进展

肿瘤免疫检查点的发现为肿瘤免疫治疗提供了全新的思路。除了传统免疫检查点细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)、程序性死亡蛋白1(PD-1)之外,T细胞免疫球蛋白和黏蛋白3(TIM-3)、淋巴细胞活化基因3(LAG-3/CD223)、具有免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域的T细胞免疫球蛋白(TIGIT)、B、T淋巴细胞衰减因子(BTLA)、含免疫球蛋白V结构域T细胞活化抑制因子(VISTA)等新型免疫检查点也逐渐被发现,极大的丰富了肿瘤免疫治疗的选择维度。与之相关的免疫检查点抑制剂如CTLA4抑制剂伊匹单抗(ipilimumab)和替西木单抗(tremelimumab), PD-1/PD-1配体1(PD-L1)抑制剂纳武单抗(nivolumab)、帕姆单抗(pembrolizumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)等相继问世,其在黑素瘤、非小细胞肺癌、消化道肿瘤等实体瘤的治疗方面获得了极大的成功。然而,免疫相关不良事件、耐药性等问题也应该引起足够的重视。本文主要对免疫检查点、免疫检查点抑制剂及其在恶性肿瘤中的应用等方面的研究进展进行综合评述。

三阴性乳腺癌患者外周血及肿瘤组织中CD4^+ T淋巴细胞上Tim-3和PD-1的表达及其临床意义

目的探讨三阴性乳腺癌(BC)患者外周血、肿瘤组织和癌旁组织中CD4^+T淋巴细胞上Tim-3和PD-1的表达与BC疾病进展的关系。方法收集郑州大学附属肿瘤医院乳腺外科2013年1月至2014年1月收治的52例BC患者全血标本,并同时收集其中7例Ⅲ期患者的肿瘤组织和癌旁组织标本,采用密度梯度离心法分离获得组织中的淋巴细胞,采用流式细胞学方法检测CD4^+T淋巴细胞上Tim-3和PD-1的表达水平。结果 52例BC患者外周血CD4^+T淋巴细胞上Tim-3、PD-1和Tim-3^+PD-1^+的表达水平明显高于其在22例健康人外周血中的表达水平(Tim-3∶2.74%比1.7%,P=0.026 4;PD-1∶17.15%比11.8%,P=0.000 6;Tim-3^+PD-1^+∶2.23%比1.13%,P=0.006 6)。Ⅲ/Ⅳ期BC患者外周血CD4^+T细胞上Tim-3^+PD-1^+的表达水平明显高于Ⅰ/Ⅱ期BC患者(3.23%比1.66%,P=0.021 6)及健康人。BC患者肿瘤组织中CD4^+细胞表面Tim-3,PD-1和Tim-3^+PD-1^+的表达水平高于癌旁组织和外周血。结论 BC患者外周血及肿瘤组织中CD4^+T细胞上抑制性受体Tim-3和PD-1的表达水平升高,可能是CD4^+T细胞参与肿瘤细胞免疫逃逸,促进BC病情进展的机制之一。

过表达VSIG4对小鼠体内日本血吸虫生殖系统发育的影响

目的观察过表达VSIG4(仅表达于组织驻留型巨噬细胞的免疫球蛋白超家族补体受体)的小鼠体内日本血吸虫生殖系统的发育情况,探讨宿主VSIG4基因表达水平对日本血吸虫雌雄虫生殖系统发育及虫卵产生的影响。方法将20只小鼠随机分为对照组和过表达VSIG4组,分别尾静脉注射空载腺相关病毒和过表达VSIG4的腺相关病毒,1周后将两组小鼠感染日本血吸虫尾蚴。感染6周后收集两组小鼠体内的日本血吸虫成虫,并采用明矾洋红染色法对虫体生殖系统进行染色,在光学显微镜和激光共聚焦显微镜下观察日本血吸虫生殖器官的变化,包括雌虫的卵巢大小、卵母细胞及子宫内虫卵的数量,雄虫的睾丸数量与大小、精母细胞。结果与对照组相比,过表达VSIG4组小鼠体内的虫体数量显著下降[分别为(18.8±11.3)条、(13.2±2.27)条],且过表达VSIG4组小鼠中每克肝脏虫卵沉积数量显著降低[分别为(26448±7736)个、(45618±3764)个](均P<0.05)。过表达VSIG4组雌虫子宫内虫卵数量明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),子宫内虫卵排列也较为稀疏,卵巢内多为界限模糊的未成熟卵母细胞。与对照组相比,过表达VSIG4组小鼠体内的日本血吸虫雄虫的睾丸面积减少(P<0.05),精囊缩小,精子数量减少。结论证实VSIG4的表达可能抑制日本血吸虫雌雄虫的生殖系统发育,从而显著影响雌虫子宫内虫卵数量,减少了肝脏沉积虫卵数量。

基于VSIG4/NLRP3炎症复合通路探讨异甘草素对中性粒细胞性哮喘小鼠气道炎症的影响

目的探讨异甘草素对中性粒细胞性哮喘小鼠气道炎症的影响及其可能的作用机制。方法用卵清蛋白建立中性粒细胞性哮喘小鼠模型。将Balb/c小鼠随机分为对照组(给予等量的0.9%NaCl处理)、模型组(卵清蛋白建模)、地塞米松组(腹腔注射4 mg·kg^(-1)的地塞米松)、低剂量实验组(腹腔注射100 mg·kg^(-1)的异甘草素)、高剂量实验组(腹腔注射200 mg·kg^(-1)的异甘草素),每组11只。在最后1次雾化激发后的24 h内,检测各组小鼠气道阻力后处死小鼠取支气管肺泡灌洗液及肺组织。用细胞计数板进行总细胞计数;用瑞氏-吉姆萨染色法进行细胞分类计数;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测支气管肺泡灌洗液炎性因子水平;用蛋白质印迹法检测肺组织蛋白表达水平。结果对照组、模型组、地塞米松组、低剂量实验组、高剂量实验组的气道阻力值分别为(0.84±0.08)、(3.34±0.34)、(1.23±0.15)、(2.47±0.19)和(1.54±0.18)cmH_(2)O·s^(-1),白细胞总数分别为(15.03±0.11)、(331.20±26.64)、(38.73±3.28)、(180.35±16.89)和(82.74±10.51)×10^(4)·mL^(-1),白细胞介素17(IL-17)水平分别为(4.79±0.58)、(19.21±2.39)、(6.35±0.81)、(15.96±1.10)和(9.04±0.65)pg·mL^(-1),含V型集和免疫球蛋白结构域4(VSIG4)蛋白表达水平分别为0.67±0.04、0.24±0.04、0.59±0.06、0.37±0.04和0.53±0.05,NOD样受体家族热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)蛋白表达水平分别为0.24±0.02、0.74±0.07、0.35±0.04、0.65±0.08和0.44±0.03。模型组的上述指标与对照组比较,地塞米松组、低剂量实验组、高剂量实验组的上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论异甘草素可能通过调节VSIG4/NLRP3复合炎性通路,降低气道阻力、抑制炎性介质的释放改善中性粒细胞哮喘小鼠气道炎性。

系统性红斑狼疮患者尿液Gal-3BP,VSIG4表达水平与疾病活动度及肾损伤的相关性研究

目的探讨尿半乳糖凝集素-3结合蛋白(galectin-3 binding protein,Gal-3BP)及V-set包含免疫球蛋白域4(V-set containing immunoglobulin domain 4,VSIG4)水平在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者尿液中的表达及其与疾病活动和肾损伤的关系。方法选取儋州市人民医院收治的SLE患者105例(SLE组)和体检正常者50例(对照组)作为研究对象。105例SLE患者根据SLE疾病活动度指数(SLEDAI)评分分为轻度活动度组(SLEDAI评分≤9分,n=51)、中度活动度组(14分≥SLEDAI≥10分,n=29)和重度活动度组(SLEDAI评分≥15分,n=25)。按肾功能受损程度分为肾功能正常组、肾功能轻度受损组和肾功能中重度受损组。采用酶联免疫吸附法检测尿液Gal-3BP,VSIG4表达水平,应用多元Logistic回归分析影响SLE患者发生肾损伤的危险因素,绘制ROC曲线分析尿Gal-3BP及VSIG4水平预测SLE患者发生肾损伤的价值。结果SLE组尿Gal-3BP(251.38±46.75 ng/ml)及VSIG4(13.40±4.27 ng/ml)水平均明显高于对照组(117.50±18.24 ng/ml,2.73±0.85ng/ml),差异具有统计学意义(t=19.315,15.681,均P<0.001)。SLE患者活动度越高,尿Gal-3BP及VSIG4水平越高,重度活动度组>中度活动度组>轻度活动度组,差异具有统计学意义(F=23.416,17.380,均P<0.001)。肾功能中重度受损组和轻度受损组尿Gal-3BP及VSIG4水平明显高于肾功能正常组(t=24.580,18.163;20.864,15.947),且中重度受损组尿Gal-3BP及VSIG4水平明显高于轻度受损组(t=19.837,11.215),差异具有统计学意义(均P<0.001)。多元Logistic回归分析显示,尿Gal-3BP(OR=3.472,95%CI:2.685~11.463)及VSIG4(OR=2.376,95%CI:1.842~9.105)水平升高是影响SLE患者发生肾损伤的危险因素(均P<0.05)。ROC曲线分析显示,Gal-3BP及VSIG4二项联合预测SLE患者发生肾损伤的曲线下面积(95%置信区间)[AUC(95%CI)]最大[0.909(0.846~0.973)],其准确度为88.6%。相关分析显示,SLE患者尿Gal-3BP与VSIG4水平呈正相关(r=0.813,P<0.05),尿Gal-3BP及VSIG4水平与SCr,BUN,24h尿蛋白、抗dsDNA抗体及SLEDAI评分均呈正相关(r=0.358~0.702,均P<0.05),而与血红蛋白、eGFR均呈负相关(r=-0.479~-0.670,均P<0.05)。结论尿Gal-3BP及VSIG4水平在SLE患者中明显升高,其高表达与疾病活动和肾损伤有关,二项联合预测SLE患者发生肾损伤有较好的价值。