大鼠发热过程中脑腹中膈区TRPV1及AVPV1受体的表达

目的 观察在脂多糖致大鼠发热过程中脑腹中膈区（VSA）瞬时受体电位香草酸受体1（TRPV1）及精氨酸加压素（AVP）V1受体表达水平的变化.方法 实验动物随机分为4组：正常对照（N）组、Capsazepine（C）组、脂多糖（L）组和Capsazepine＋脂多糖（C＋L）组.连续观察体温变化;对不同实验条件下VSA中TRPV1的表达采用Western blot方法检测,AVPV1受体mRNA水平变化采用RT-PCR方法检测.结果 L组和C＋L组体温显著增高,C＋L组210～510 min期间体温明显高于L组（P＜0.01）.TRPV1的表达水平显示致热后逐渐增多,L组最高值为基础状态的2.2倍.C＋L组为1.72倍.同样,AVPV1受体mRNA表达水平出现相似的变化趋势,L组AVPV1受体mRNA表达最大量为基础状态的2.4倍.C＋L组为1.95倍.结论 LPS致大鼠发热时,体温升高到一定程度可诱导腹中膈区TRPV1的表达,并伴有AVPV1受体mRNA表达水平升高,此变化有利于AVP发挥对体温的负调节作用.

ADGRV1多态性与子宫颈癌关联性研究

目的探讨粘附G蛋白偶联受体V1(ADGRV1)基因多态性与子宫颈癌易感性之间是否存在关联性。方法采取病例对照(1∶1)匹配研究法,分析ADGRV1基因多态性与子宫颈癌易感性是否有关,同时对子宫颈癌患者ADGRV1基因的rs59661306位点基因分布在不同病理特征间作对比。结果ADGRV1基因的rs59661306位点携带GA及GG基因型的个体比携带AA基因型的个体患子宫颈癌的风险显著增大,相应的OR(95%CI)为4.20(1.64~10.72)和3.22(1.23~8.38)。ADGRV1基因的rs59661306位点基因分布在高危人乳头瘤病毒(HPV)感染、肿瘤家族史者、鳞状细胞癌抗原(SCC)不同值中的差异有统计学意义(P<0.05),在淋巴结转移、病理类型、临床分期等临床病理特征中差异无统计学意义。在ADGRV1基因的rs59661306位点携带GA及GG基因型比携带AA基因型的个体更易伴高危HPV感染,相应的OR(95%CI)为13.70(2.32~80.80)和17.53(2.76~111.30)。携带AA基因型的子宫颈癌个体不易伴有家族性肿瘤史。结论ADGRV1基因的rs59661306位点基因多态性与子宫颈癌发病风险有一定相关性,在部分高危环境因素中促使子宫颈癌发生。

精氨酸加压素V_1受体阻断剂对氧化震颤素引起低温反应的影响

目的本研究旨在探讨内源性精氨酸加压素(AVP)是否参与M胆碱激动剂氧化震颤素(OXO)引起的低温反应。方法用无线遥测技术测量大鼠的体温和活动变化,观察腹腔注射AVPV1受体阻断剂对OXO引起的体温和活动变化的影响。结果给大鼠皮下注射OXO能引起明显的低温反应,大约4h后恢复到对照水平。腹腔注射AVPV1阻断剂可以明显阻断OXO的低温效应。结论AVPV1受体阻断剂可以阻断OXO引起的低温作用,提示OXO引起的降温效应可能是通过AVP的释放所致。

大鼠运动病敏感性性别差异与血浆和垂体中AVP水平及垂体V1b受体表达水平的关系

目的:观察不同性别大鼠旋转前后不同时间点血浆和垂体精氨酸加压素(AVP)的含量以及垂体AVP-V1b受体阳性神经元数目和受体表达量,探讨AVP与运动病性别差异间的联系,为进一步认识运动病的发病机制提供实验依据。方法:采用条件性厌食症作为运动病模型。98只SD大鼠,雌雄各半,分别用放射免疫分析法、免疫组化及Western-blot法测定血浆、垂体AVP含量和垂体V1b受体表达水平。结果:旋转刺激后雌性大鼠糖精水(0.15%)饮用量的减少程度高于雄性大鼠。雌性大鼠血浆AVP含量在基础状态下高于雄性大鼠,旋转刺激后下降,而雄性大鼠无显著性变化。雌性大鼠垂体AVP含量在基础状态下也高于雄性大鼠,旋转刺激后8 h下降,24 h降低有显著性;雄性大鼠旋转后8 h垂体AVP含量较旋转前明显下降,但降幅不及雌性大鼠,旋转后24 h已近恢复。与应激反应密切相关的垂体V1b受体表达为阳性的神经元数目及V1b受体表达水平,在基础状态下,雌性大鼠显著高于雄性;旋转刺激后,雌性大鼠V1b受体表达为阳性的神经元数目和表达水平均明显降低,而雄性大鼠则无显著性改变。结论:运动病诱发刺激后,雌雄性大鼠血浆和垂体中AVP含量及垂体V1b受体表达均有差异,提示AVP的内分泌状态与运动病敏感性性别差异可能有某种关联。

大鼠运动病敏感性性别差异与相关脑区AVP及其V1b受体表达的关系

目的:检测不同性别大鼠旋转刺激后脑内相关区域精氨酸加压素(AVP)含量及V1b受体表达的变化,探讨AVP及受体参与运动病的可能机制。方法:给予SD大鼠30 min绕水平轴的旋转刺激,然后采用放免法检测相关脑区AVP含量,并通过荧光免疫组化方法测定相应脑区V1b受体的表达情况。结果:①在雌性大鼠,旋转刺激组各脑区AVP含量无显著性改变;对于雄性大鼠,对照组各检测脑区AVP含量高于雌性,旋转刺激组小脑、延髓内AVP含量的变化无显著性意义,但前脑、间脑、脑桥内AVP含量较对照组明显降低(P<0.05)。②雌性大鼠视上核AVP的V1b受体表达阳性神经元数量旋转刺激组显著低于对照组(P<0.05),而前庭核、最后区V1b受体表达阳性神经元数量明显多于对照组(P<0.05);在雄性大鼠,旋转刺激组视上核与前庭核V1b受体表达阳性神经元数量无显著性改变,而最后区V1b受体表达阳性神经元数量有所增加(P<0.05),但增加幅度没有雌性大鼠明显。结论:前脑、间脑、脑桥内AVP含量与前庭核和最后区V1b受体表达及对旋转刺激反应的差异可能与运动病敏感性性别差异有关,并且前庭核、最后区可能是AVP-V1受体拮抗剂抗运动病作用的靶点。

V_(1a)受体拮抗剂对脑出血大鼠水孔蛋白-4表达的影响及血脑屏障通透性的研究

目的研究血管加压素1a受体(V1aR)拮抗剂对脑出血(in tracerebra l hem orrhage,ICH)后水孔蛋白-4(aquaporin-4,AQP 4)表达及血脑屏障(BBB)通透性的影响。方法运用立体定向技术,尾动脉采血制作大鼠脑出血模型。模型制作成功后,治疗组侧脑室注射V1aR拮抗剂,对照组仅注射等量人工脑脊液。采用免疫组化技术对血肿周围组织AQP 4蛋白进行检测。通过检测渗出到脑血管外的伊文斯蓝(Evans B lue,EB)的含量来定量观察BBB的通透性。结果脑出血后6h尾壳核血肿周围组织AQP 4蛋白表达开始增高,在脑出血1d达高峰(P<0.01),持续到3d以后逐渐下降,到7d仍高于正常水平。而用V1aR拮抗剂脑室注射后,AQP 4蛋白表达在各时间点表达明显降低。BBB通透性在脑出血后6h开始升高,1d达高峰(P<0.01),3d后回落,侧脑室注入V1aR拮抗剂后,BBB通透性与对照组比较明显下降(P<0.05)。结论V1aR拮抗剂能抑制AQP 4蛋白的表达,保护BBB,减轻脑出血后脑水肿。

瞬时受体电位通道蛋白A1和V1在正常小鼠耳蜗中的定位表达

目的研究瞬时受体电位通道蛋白A1(TRPA1)和V1(TRPV1)在正常小鼠耳蜗中的定位与表达。方法选择12只健康成年BALB/c小鼠,应用免疫荧光染色方法和蛋白质印迹技术检测TRPA1和TRPV1在耳蜗中的定位与表达,同时结合电生理指标听脑干反应(auditory brainstem response,ABR)测试小鼠的听力。结果 TRPA1和TRPV1在小鼠耳蜗螺旋器的内、外毛细胞、螺旋神经节细胞和血管纹边缘细胞等都有表达,且主要定位于细胞膜;蛋白质印迹检测结果亦显示小鼠耳蜗中有TRPA1和TRPV1的表达。结论 TRPA1和TRPV1在正常BALB/c小鼠耳蜗的多种细胞中均有表达,这为深入研究二者在内耳听觉生理和病理生理中的作用奠定基础。

TRPV1对慢性压迫背根节神经元自发放电的作用

目的:研究瞬时受体电位V1受体(TRPV1)对受压迫背根节(DRG)神经元自发放电的影响.方法:在麻醉消毒手术条件下,经大鼠L5椎间孔插入长4mm直径0.5～0.8mm不锈钢丝,以形成对大鼠DRG及其神经根的稳定慢性压迫.观察模型动物的行为学特征,引导损伤侧背根A类单纤维自发放电,观察分析TRPV1受体拮抗剂Capsazepin作用下,自发放电频率的变化及特征.结果:模型动物表现出明显的疼痛行为.术后24h其损伤侧后肢每分承重分散时间延长为(10.5±2.1)s/min(P<0.05).大部分慢性压迫模型(32/35)表现为自发放电阳性,按其特征分为周期放电(14例)、非周期放电(18例).在Capsazepin(3μmol/L)浸浴作用下,受损DRG神经元自发放电频率明显下降,周期放电频率由(27.7±2.2)Hz下降至(15.5±2.0)Hz(n=4,P<0.05);非周期放电的放电频率由(34.7±7.4)Hz下降至(17.2±5.2)Hz(n=10,P<0.05).结论:阻断TRPV1后,由DRG慢性压迫诱发的自发放电被部分抑制.TRPV1可能参与受损DRG神经元自发放电的产生,介导了神经病理痛信号的产生和传导.

瞬时受体电位A1/V1通道联动在慢性咳嗽中的作用机制探讨

咳嗽临床常见,特别是胸部影像检查无明显异常的慢性咳嗽,在我国专科门诊中,慢性咳嗽患者约占三分之一以上^([1]),全球患病率约为9.6%^([2])。其病因繁多,诊疗程序较复杂,临床疗效欠佳,反复发作的咳嗽给患者的工作、生活甚至心理上带来严重困扰,引起了国内外的广泛关注。

N-乙酰半胱氨酸对支气管哮喘大鼠CXCL8-CXCR1/2及TRPV1神经元敏感性的影响

目的探究N-乙酰半胱氨酸对支气管哮喘大鼠CXC趋化因子配体(CXCL)8-CXC趋化因子受体(CXCR)1/2及瞬时受体电位通道蛋白(TRP)V1神经元敏感性的影响。方法选取80只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常(NO)组、模型(MO)组、N-乙酰半胱氨酸(NAC)组、急支糖浆(ES)组,每组20只,对MO组、NAC组、ES组进行支气管哮喘建模,建模成功后,NAC组、ES组每天分别于腹腔内注射2 ml N-乙酰半胱氨酸注射液、急支糖浆灌胃10 g/kg剂量,NO组、MO组同期灌胃同体积生理盐水,通过苏木素-伊红(HE)染色法检测肺组织病理形态、酶联免疫吸附试验(ELISA)、实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹检测血清及肺组织中CXCL8、CXCR1、CXCR2、TRPV1含量、mRNA及蛋白表达,并分析N-乙酰半胱氨酸对支气管哮喘大鼠CXCL8-CXCR1/2及TRPV1神经元敏感性。结果与NO组相比,MO组咳嗽次数明显增加(P<0.05),而NAC组、ES组与MO组相比,其咳嗽次数明显降低(P<0.05),且NAC组比ES组降低明显(P<0.05);与NO组相比,MO组细支气管管腔、肺泡腔内可见渗出液、脱落的上皮细胞等,远端肺泡可见局部肺不张及周围肺大泡,且肺间质明显增厚,炎性细胞浸润明显,而与MO组比较,ES组、NAC组症状明显减少,部分肺间质的组织结构趋向正常,部分肺泡轻度扩张,且NAC组比ES组明显降低(P<0.05);与NO组对比,MO组CXCL8、CXCR1、CXCR2、TRPV1含量、mRNA及蛋白表达均明显升高(P<0.05),NAC组、ES组与MO组相比均显著降低(P<0.05),且NAC组比ES组明显降低(P<0.05)。结论N-乙酰半胱氨酸可以显著降低咳嗽次数,减少支气管哮喘症状,可使CXCL8-CXCR1/2及TRPV1神经元敏感性显著降低。

大鼠脑出血后V_(1α)R和AQP4表达升高与脑水肿的形成相关

目的研究精氨酸加压素1α受体(V1αR)和水通道蛋白4(AQP4)在SD大鼠脑出血(ICH)脑组织中的表达变化及两者在脑水肿形成中的作用。方法将自体血注入大鼠尾状核建立脑出血模型,分别于术后6、12、24和48 h运用干湿重法、免疫荧光和Western blot检测脑含水量(BWC)、V1αR和AQP4蛋白的表达。结果脑出血后6 h,V1αR和AQP4的表达开始增加,至48 h达到高峰,分别为21.88±0.44和23.16±0.67,显著高于假手术组(14.32±0.55和13.90±0.40),与脑含水量呈正相关(P<0.05)。结论 V1αR介导的AQP4表达升高是脑出血后脑水肿形成的主要原因。

TRPA1/TRPV1在心血管疾病中的作用

目前,心血管疾病是导致我国居民死亡人数最多的疾病。高血压、动脉粥样硬化、代谢紊乱和衰老等危险因素相互促进,在心血管疾病发生发展中起着重要作用。TRP蛋白是一个四聚体结构,由S1~S6的6次跨膜结构域组成,其C端和N端均位于细胞膜内。依据TRP序列同源性可将哺乳动物中的TRP离子通道分为7个亚家族即TRPC、TRPM、TRPV、TRPA、TRPML、TRPP和TRPN。TRP家族至少有28个成员,参与多种细胞功能,包括感知觉和信号转导[1]。Ca^2+是平滑肌收缩的主要调节因子,也起到细胞内第二信使和必要的辅助因子酶活性作用。TRP通道的特定生理作用是调控细胞内Ca^2+浓度和分布,直接影响多种细胞功能,参与调节细胞收缩、舒张、增殖、分化和细胞凋亡等过程,在多种心血管疾病的病理生理学中发挥重要作用。

TRPV1激活对内毒素血症小鼠肺组织炎症损伤的影响及机制

目的:探讨用辣椒素(CAP)激活瞬时受体电位阳离子通道V亚族成员1(TRPV1)对内毒素血症所致肺损伤在炎症反应产生的影响及相关机制。方法:SPF级ICR小鼠108只随机分为6组:正常对照组、CAP对照组、抗辣椒碱(CAPZ)对照组、内毒素血症组、CAP干预组和CAPZ干预组。脂多糖(LPS)经腹腔注射,CAP及CAPZ均在LPS注射前30 min经皮下注射。分别在LPS注射后3 h、8 h和16 h取肺组织,ELISA法检测肺组织TNF-α、IL-6、IL-10、P物质(SP)和降血钙素基因相关肽(CGRP),Western blotting法检测肺组织Toll样受体4(TLR4)和核内NF-κB的表达水平,光镜下观察肺组织病理学改变。结果:内毒素血症组小鼠3 h、8 h和16 h肺组织TNF-α、IL-6和IL-10水平较正常对照组均显著升高(P<0.05);CAP干预组各时点肺组织TNF-α和IL-6水平较内毒素血症组显著降低(P<0.05),而IL-10均明显升高(P<0.05);CAPZ干预组3 h、8 h和16 h肺组织TNF-α和IL-6较内毒素血症组显著升高(P<0.05),而IL-10水平均显著降低(P<0.05)。内毒素血症组和CAP对照组各时间点SP和CGRP较正常对照组均显著升高(P<0.05),CAP对照组SP和CGRP水平明显低于内毒素血症组(P<0.05);与同时点内毒素血症组相比,CAP干预组SP和CGRP显著升高(P<0.05),而CAPZ干预组显著降低(P<0.05)。内毒素血症组小鼠肺组织TLR4和核内NF-κB表达较正常对照组显著升高(P<0.05);与内毒素血症组相比,CAP干预组和CAPZ干预组小鼠肺组织TLR4表达均无显著差异(P>0.05),而CAP干预组核内NF-κB表达显著降低(P<0.05),CAPZ干预组核内NF-κB表达显著升高(P<0.05)。光镜下,CAP对照组和CAPZ对照组较正常对照组病理学变化不明显,内毒素血症组肺组织在8 h和16 h损害明显,CAP干预组较内毒素血症组损害减轻,CAPZ干预组较内毒素血症组肺组织损害加重。结论:TRPV1激活后能显著降低内毒素血症小鼠肺组织TNF-α、IL-6和核内NF-κB水平,升高IL-10水平,提高肺组织SP和CGRP表达,减轻肺组织炎症损伤程度,但不改变肺组织TLR4水平。

TRPV1和TRPA1在大鼠睾丸痛模型背根神经节中的表达

目的:探讨瞬时受体电位通道蛋白V1(TRPV1)和瞬时受体电位通道蛋白A1(TRPA1)在睾丸痛大鼠模型的表达及作用机制。方法:通过睾丸内注射2%醋酸的方法建立睾丸痛大鼠模型;造模后通过行为学实验检测大鼠自发痛计数与阴囊部热痛阈;RT-q PCR、Western印迹、免疫荧光检测T_(13)~L_1节段背根神经节(DRG)TRPV1和TRPA1的表达。结果:建模后大鼠自发痛计数较对照组明显增多[(22.63±3.42)次vs(0.13±0.35)次,P<0.01],热痛阈值下降,其下降峰值在注射后第4小时(4.85±1.00 s),与对照组(12.75±1.50 s)相比差异有统计学意义(P<0.01)。TRPV1和TRPA1均表达在DRG内神经元的胞膜上,与对照组相比,模型组大鼠DRG内TRPV1的mRNA水平上升至对照组的(1.77±0.34)倍,TRPA1的mRNA水平上升至对照组的(1.75±0.30)倍,且两种蛋白均表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TRPV1和TRPA1可能通过在DRG内表达上调,参与了睾丸痛大鼠模型的痛觉产生与外周痛敏的形成。

子宫内膜异位症模型大鼠背根神经节神经元中TRPV1、TRPA1表达及其意义

目的:探讨子宫内膜异位症模型大鼠背根神经节(DRG)神经元中瞬时受体电位通道蛋白V1(TRPV1)、瞬时受体电位通道蛋白A1(TRPA1)表达及其意义。方法:选取雌性、成熟未交配Sprague-Dawley健康大鼠40只,分为模型组和假手术组,模型组采用自体移植方法建立子宫内膜异位症大鼠模型,假手术组仅做开腹手术。分别检测DRG中TRPV1、TRPA1表达情况,并使用TRPV1、TRPA1拮抗剂处理两组大鼠,观察其热板法痛阈、甩尾潜伏期变化。结果:模型组大鼠TRPV1、TRPA1表达阳性率明显高于假手术组(P<0.05)。术前,两组大鼠热板法痛阈、甩尾潜伏期相近(P﹥0.05)。术后,模型组大鼠热板法痛阈、甩尾潜伏期较术前明显减小(P<0.05),模型组大鼠热板法痛阈、甩尾潜伏期明显小于假手术组(P<0.05)。使用TRPV1、TRPA1拮抗剂前,两组大鼠热板法痛阈、甩尾潜伏期相近(P>0.05)。使用TRPV1、TRPA1拮抗剂后,两组大鼠热板法痛阈、甩尾潜伏期相近(P>0.05),模型组大鼠使用TRPV1、TRPA1拮抗剂前后,热板法痛阈、甩尾潜伏期无明显变化(P>0.05)。结论:TRPV1、TRPA1在子宫内膜异位症模型大鼠中高表达,使用TRPV1、TRPA1拮抗剂降低子宫内膜异位症模型大鼠TRPV1、TRPA1表达,降低大鼠对痛觉的敏感性。

普瑞巴林可通过抑制TRPV1以缓解神经病理性疼痛

目的探讨普瑞巴林(pregabalin,PGB)缓解神经病理性疼痛的潜在机制。方法构建常用的神经病理性疼痛模型——大鼠慢性坐骨神经缩窄损伤模型(chronic constriction injury,CCI),给予PGB或瞬时阳离子通道亚家族V成员1蛋白受体(the transient receptor potential cation channel subfamily V member 1,TRPV1)的抑制剂辣椒平(capsazepine,CPZ)或TRPV1的激动剂辣椒素(capsaicine,CP)以观察PGB的镇痛效果。运用免疫组化和免疫印迹法检测与疼痛正相关的TRPV1蛋白在CCI大鼠脊髓中的表达。结果PGB和TRPV1的抑制剂CPZ都能有效地提高CCI大鼠模型的痛阈(P<0.05),CPZ+PGB和CPZ的镇痛作用差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化和免疫印迹结果均显示PGB可减低CCI模型大鼠脊髓中TRPV1蛋白的表达。同时给予PGB和TRPV1激动剂CP干预CCI大鼠后,CCI+PGB+CP组痛阈低于CCI+PGB组(P<0.05),且与CCI组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论PGB可通过抑制TRPV1蛋白的表达而缓解神经病理性疼痛。

TRPV1在正常BALB/c小鼠耳蜗中的定位表达

目的研究瞬时受体电位通道蛋白V1(TRPV1)在正常小鼠耳蜗中的定位观察。方法选择10只健康成年BALB/c小鼠,应用免疫荧光染色方法观察TRPV1在耳蜗中的定位与表达,同时结合电生理指标听脑干反应(auditory brainstem response,ABR)测试小鼠的听力。结果 TRPV1在小鼠耳蜗螺旋器的内、外毛细胞、螺旋神经节细胞和血管纹边缘细胞等都有表达,且主要定位于细胞膜;蛋白质印迹检测结果亦显示小鼠耳蜗中有TRPV1的表达。结论 TRPV1在正常BALB/c小鼠耳蜗的多种细胞中均有表达,这为深入TRPV1在内耳听觉生理和病理生理中的作用奠定基础。

自动痔疮套扎术对直肠内脱垂合并便秘患者肠黏膜屏障功能及黏膜TRPV1、5-HT表达的影响

目的研究自动痔疮套扎术(RPH)对直肠内脱垂(IRP)合并便秘患者肠黏膜屏障功能及黏膜瞬时受体电位通道V1(TRPV1)、5-羟色胺(5-HT)表达的影响。方法前瞻性选取2018年2月至2020年3月西南大学附属医院收治的IRP合并便秘患者98例为病例组,均接受RPH治疗。分析临床疗效、并发症发生率及半年复发情况;比较术前和术后外周血中二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸及细菌内毒素水平,胃肠道生活质量评分(GIQLI)及Wexner便秘评分(WC)评分,以及直肠黏膜TRPV1、5-HT阳性表达水平。结果临床治疗总有效率为80.61%(79/98);术前及术后血清DAO、D-乳酸及细菌内毒素水平比较无显著差异(P>0.05);与术前比较,术后肠黏膜TRPV1、5-HT阳性表达水平显著下降(P<0.05);与术前比较,术后GIQLI评分、WC评分显著上升(P<0.05);总并发症发生率为5.10%(5/98),随访半年,无复发病例。结论RPH治疗IRP合并便秘疗效确切,对肠黏膜屏障功能损伤较小,能促进黏膜TRPV1、5-HT正常表达,改善患者胃肠道生质量和便秘情况,且术后并发症少,病情不易复发。

TRPV1在哮喘发病机制中作用的研究进展

哮喘(asthma)是临床常见的呼吸系统疾病之一。目前全世界约有3亿哮喘患者[1],且有证据表明,该病在世界范围内的患病率和死亡率均在逐年上升,预计到2025年,哮喘患者会增加到4亿,同时每年会有约25万人死于哮喘[2]。我国哮喘的患病率约为4.2%,目前全国有超过4570万的哮喘患者,这表明哮喘已成为严重威胁公众健康的疾患[3]。