百合VAL2基因的克隆与表达分析

以东方百合‘索邦’为材料,克隆获得VAL2基因(以下称LoVAL2)。序列分析显示,LoVAL2编码序列长度为2 793 bp,共编码930个氨基酸;预测LoVAL2蛋白具有5个结构域:PHD-L、B3、CW、ZnF-like和EAR结构域。系统进化分析显示,LoVAL2与天门冬亲缘关系较近,与玉米、铁皮石斛等亲缘关系次之,与拟南芥亲缘关系较远。荧光定量表达分析显示,LoVAL2在茎生根、嫩茎、成熟叶、嫩叶及花部组织中均有表达;LoVAL2在雌蕊和雄蕊中的表达于5 mm花蕾中呈现较高水平,随着花蕾发育表达水平下调,之后在雌、雄蕊中的表达水平又分别于20 mm、25 mm花蕾中显著上调,表明LoVAL2基因可能参与雌、雄蕊的早期以及后续发育;亚细胞定位发现LoVAL2在烟草表皮细胞中定位于细胞核,符合转录因子的核定位特征。

人胰高血糖素样肽-1类似物基因克隆及真核表达载体构建

目的利用pIRES2-EGFP作为载体,构建人胰高血糖素样肽-1类似物基因(2×Val2-hGLP-1)重组表达载体。方法化学合成14个2×Val2-hGLP-1寡核苷酸片段,退火拼接成完整的2×Val2-hGLP-1类似物基因。退火片段克隆至pBSSK(+/-)载体中,经双酶切和测序鉴定,将目的片段插入pIRES2-EGFP中,构建pIRES2-EGFP/2×Val2-hGLP-1基因表达载体。重组载体经脂质体转染HEK-293A细胞后,Westernblot分析目的蛋白表达。结果双酶切鉴定和测序分析均证实,已成功构建pIRES2-EGFP/2×Val2-hGLP-1基因治疗载体。重组载体转染HEK-293A细胞,观察到绿色荧光蛋白表达,其转染效率达80%以上。Westernblot分析,检测到目的蛋白表达。结论pIRES2-EGFP/2×Val2-hGLP-1表达载体的成功构建,为Val2-hGLP-1基因功能研究及基因治疗提供了工具。