1株产VB_(12)球形赖氨酸芽孢杆菌C5.1的分离、全基因组测序及分析

为深入探究球形赖氨酸芽孢杆菌C5.1(Lysinibacillus sphaericus C5.1)菌株产VB_(12)的作用机制,利用PacBio Sequel和Illumina NovaSeq PE150相结合的方法对C5.1菌株进行全基因组测序,并对测序数据进行拼接、基因预测及功能注释。结果表明,C5.1菌株基因组为一个环状DNA,不含质粒,大小为4690817 bp,GC含量为37.21%,预测得到4756个编码基因,111个tRNA基因和34个rRNA基因。通过基因本体论、直系同源集、京都基因与基因组百科全书和转运蛋白分类数据库对C5.1菌株基因组进行注释分析,分别匹配到3095、3182、4374个和397个基因。进一步分析发现C5.1菌株基因组中包含从尿卟啉原Ⅲ逐步转化合成VB_(12)的关键酶。本研究为解析C5.1菌株在臭腐乳发酵过程中的代谢机理提供遗传信息基础,也为今后开展发酵食品中VB_(12)的生物合成机制研究提供理论支撑。

不同碳源对E.adhaerens产维生素B_(12)发酵代谢动力学分析

考察了Ensifer adhaerens(E.adhaerens)在不同碳源(麦芽糖、蔗糖、葡萄糖和果糖)条件下的生理代谢特性,并利用Logistic和Luedeking-Piret模型分析了黏着剑菌发酵过程生长动力学及产物合成动力学特性变化。结果表明,蔗糖能够显著促进E.adhaerens的生长和合成代谢,补料批培养条件下发酵单位分别比葡萄糖、麦芽糖、果糖组高出53%、40%、103%;发酵代谢动力学分析表明,不同碳源条件下,E.adhaerens生产维生素B_(12)(VB_(12))呈现部分生长偶联型;蔗糖为最优碳源,最大比生长速率和最高发酵单位分别为0.054 h^(-1)和115 mg/L。E.adhaerens发酵过程中,蔗糖能够被逐渐分解为葡萄糖和果糖,维持合适的葡萄糖生成速率,用于提供足够的能量和前体用于菌体生长和VB_(12)合成,有效缓解了高质量浓度葡萄糖对菌体生长和产物合成的抑制。

微生物法检测VB_(12)的影响因素分析及优化方向进展

微生物法在VB_(12)检测中有非常广泛的应用,具有特异性好、灵敏度高等优势,但该方法也存在操作步骤复杂、对实验人员要求较高、不稳定因素较多等缺点。为解决传统微生物方法中存在的问题,对微生物法中的关键步骤进行了分析,并阐述了目前其优化方向的研究进展,以期为微生物法的改进提供参考。

酚醛型吸附树脂吸附VB_(12)的热力学研究

研究了酚醛型吸附树脂JDW 2对VB12的吸附。在304～322K和研究的浓度范围内,JDW 2对VB12吸附平衡数据符合Freundlich吸附等温方程。Freundlich吸附等温线和等量吸附焓表明:JDW 2对VB12吸附是吸热过程。测试了VB12在JDW 2上的吸附焓、自由能和吸附熵,并对吸附行为作了合理解释。

超滤膜分离对VB_(12)吸附过程的影响

用超滤膜处理VB12发酵滤液,可以改善吸附过程的原料质量.选用截留分子量为1万的超滤膜处理VB12发酵滤液,可以在保证总收率不降低的前提下,使吸附过程高单位的纯度提高50 3%,收率提高12 5%,吸附过程的各项消耗均有不同程度的降低.

饲粮氰钴素(VB_(12))及叶酸(VB_(11))水平对蛋鸡生产性能及血液生化指标的影响

选择 33周龄健康的海兰褐壳蛋鸡 12 0只,随机分成 3个处理(即VB12 及VB11添加水平分别为:A组:0,0;B组:0 0 1, 5;C组:0 10,5 0 0mg/kg)。每个处理 4个重复,每个重复 10只鸡,4周的试验结果表明:叶酸及氰钴素的水平对蛋鸡生产性能及蛋壳质量无显著影响(P >0 0 5 ),但对蛋鸡的血红蛋白含量有影响,C组与A组相比,差异显著(P <0 0 5)。

乙醇溶剂制备的银纳米簇作为荧光探针用于VB_(12)检测

本文利用多巴胺(DA)作为模板,NaBH_(4)作为还原剂,合成制备了水溶性的银纳米簇(Ag NCs)。研究结果表明,乙醇溶剂对Ag NCs的荧光有显著的增强作用,因此用乙醇为溶剂代替水合成发光效率高的DA保护的Ag NCs(DA@Ag NCs),此纳米簇对维生素B_(12)(VB_(12))具有特异性识别能力。分别研究了乙醇和VB_(12)引发的DA@Ag NCs的荧光增强和猝灭机理,建立了VB_(12)的荧光检测新方法,其线性范围为5~80μmoL。该荧光探针对VB_(12)具有好的灵敏度和选择性,在VB_(12)检测中具有广阔的应用前景。

直接提取微生物法测定保健食品中VB_(12)

基于微生物检测VB12的原理,建立了一种直接提取微生物法测定保健食品中VB12含量的方法。保健食品样品经过乙醇水溶液超声提取,适当稀释后加入VB12测定培养基,灭菌后加入菌悬液,在36℃培养22h后在550nm处测定吸光值,根据吸光值定量测定VB12含量。试验结果表明,该方法测定保健食品中VB12含量,标准曲线相关系数R2为0.997,呈良好线性;重复性试验相对标准偏差在1.48%-3.09%,重现性良好;加标回收试验回收率在98.7%-101%,满足试验要求。与国标前处理方法相比,两种方法所测保健食品VB12含量差异不显著(P>0.05),且该法简化了操作步骤,提高了保健食品VB12检测灵敏度,为保健食品中VB12测定微生物法在常规实验室的建立和推广提供了参考。

Hp相关性慢性萎缩性胃炎患者应用叶酸、VB_(12)联合治疗的效果观察

目的:探讨叶酸联合VB_(12)应用于Hp相关性慢性萎缩性胃炎(CAG)治疗的效果。方法:选取我院2018-04~2020-04收治的CAG Hp相关性患者102例进行研究。随机数字表法将其平均分为两组,各51例。对照组:四联疗法治疗。观察组:联合VB_(12)、叶酸治疗。观察两组患者TNF-α、IL-1、IL-8、hs-CRP等炎性因子及E-Cad、MMP-9、Cyclin E等肿瘤因子水平变化情况。结果:观察组IL-8、TNF-α、hs-CRP及IL-1等炎性因子水平、MMP-9、Cyclin E均低于干预前和对照组,差异显著(P<0.05);E-Cad高于干预前和对照组,差异显著(P<0.05)。结论:四联疗法基础上联合叶酸、VB_(12)治疗HP相关性CAG,效果较好,能够有效改善患者的炎性因子和肿瘤因子水平。

基于尿卟啉原Ⅲ代谢增强的VB_(12)发酵培养基优化

基于VB_(12)代谢过程能量流、物质流分析,针对性地增强了尿卟啉原III代谢流向,并结合科研院所的研究成果对主要易得的关键代谢物质进行配方优化,利用Design-Expert软件进行方案设计及数据分析,得出谷氨酸和小肽蛋白为重要模型项,之后结合成本核算得出现阶段最优配方解,成功在小试实验中使发酵单位提高了16.3%,之后成功进行了中试放大实验,连续3批放大实验中的平均单位较该中试罐1~6月份同罐批平均单位提高了6.39%。

催化动力学光度法测定维生素B_（12）中钴的含量

通过钴（Ⅱ）催化Ｈ２Ｏ２氧化茜素红褪色反应体系的新催化光度法。本法灵敏度高，选择性好除Ａｇ＾＋，Ｍｎ＾２＋外其余共存离子基本无干扰，精密度高，用于药物维生素Ｂ１２中钴（Ⅱ）的含量测定，结果满意。

具有不同孔结构的沥青基球状活性炭对肌酐及维生素B_(12)吸附性能的研究

主要研究了 3种具有不同孔结构的沥青基球状活性炭对肌酐及VB12 的吸附性能 ,并与BET比表面积及孔结构进行了关联。结果表明 ,具有微孔结构的沥青基球状活性炭对小分子肌酐的吸附性能较好 ;具有中孔结构的沥青基球状活性炭对中分子物质VB12 具有较好的吸附性能 ;而中孔与微孔并存的沥青基球状活性炭对肌酐及VB12 都有较好的吸附性能。

抗坏血酸包裹的铜纳米簇作为荧光探针定量测定维生素B_(12)

以抗坏血酸(AA)为模板和还原剂,通过“一锅法”在水溶液中合成低毒性的青色荧光铜纳米簇(AA@CuNCs)。实验表明,制备的水溶性AA@CuNCs外观呈球形,有良好的分散性,粒径约为1.6 nm。维生素B_(12)(VB_(12))能高效猝灭AA@CuNCs的荧光,猝灭机理为静态猝灭和内滤效应。在10-60μmol/L与100-120μmol/L浓度范围内,VB_(12)浓度与AA@CuNCs的相对荧光强度(F_(0)/F)呈较好的线性关系,检出限低至0.07μmol/L。此外,该荧光探针可以有效地应用于实际样品中VB_(12)的检测,并可将其应用于细胞成像。

高通量筛选高产维生素B_(12)的诱变菌株--黏着剑菌

维生素B_(12)(钴胺素)具有重要的生理学功能,广泛应用于制药、食品等行业,黏着剑菌(Ensifer adhaerens)是常用生产菌株之一。为进一步提高E.adhaerens生产维生素B_(12)的能力,采用常压室温等离子体(atmospheric and room temperature plasma,ARTP)诱变处理E.adhaerens,并从中筛选出高产维生素B_(12)的诱变菌株。确定了ARTP诱变处理的时间为80 s,输出功率为100 W。应用流式细胞仪、酶标仪、移液工作站等仪器对诱变菌株进行分选、检测。经过2轮ARTP诱变处理、初筛与复筛之后,最终筛选得到1株高产维生素B_(12)的突变菌株46H-1,摇瓶发酵至7.5 d,维生素B_(12)的产量达到110.25 mg/L,相比于原始菌株提高了24.8%,并且通过了遗传稳定性验证。该文所建立的高通量筛选方法能够快速、高效地筛选到高产菌株,有效降低生产成本。

维生素B_(12)缺乏的预防治疗

目的:探讨 VB_(12)缺乏的预防、治疗及其医疗保健作用;方法:查阅资料对 VB_(12)缺乏的症状、因素、预防及医疗保健作用,作一初步总结;结果:VB_(12)的缺乏可造成许多疾病,对人类健康和疾病有很大影响;结论:VB_(12)的缺乏可预防和治疗,而且 VB_(12)具有广泛的医疗保健作用。

新显色剂1-[2,3,5-三氮唑偶氮]-2-萘酚的合成及其与钴(Ⅱ)的分光光度研究

合成了新显色剂 1 - [2 ,3,5-三氮唑偶氮 ]- 2 -萘酚 (简称 TZAN ) ,并研究了其性质及与钴显色反应的条件 ,测定了试剂有关参数。在 p H6.0 8的 HAc-Na Ac介质中 ,试剂与钴形成红色络合物 ,其最大吸收波长为 578.2 nm,摩尔络合比 Co2 +∶ R=1∶ 2 ,用双波长测定 ,表观摩尔吸光系数为 3.1 5× 1 0 4 L /mol·cm,钴量在 0～ 1 .0 μg/m L

艳山姜挥发油纳米乳的制备及其体内分布情况考察

目的:制备包载艳山姜挥发油(EOFAZ)的口服纳米乳,考察其体外促吸收效果和体内分布情况。方法:将醋柴胡多糖(VBCP)和牛血清白蛋白(BSA)通过Maillard反应进行偶联,制备多糖-蛋白偶联物VBCP-BSA。以VBCP-BSA为乳化剂,维生素B12(VB_(12))为吸收促进剂,中链甘油三酯与EOFAZ混合作为油相,通过高能外力乳化法制备负载EOFAZ的纳米乳,对该纳米乳的粒径及粒径分布、表面Zeta电位、EOFAZ含量、外观形态等进行表征,并利用荧光素示踪法考察荧光素标记的EOFAZ纳米乳在体外的吸收效果及体内的分布情况。结果:VBCP与BSA通过Maillard反应48 h后形成偶联物VBCP-BSA,并具有较高的接枝度。以VBCP-BSA为乳化剂,制备得到均一的粉色纳米乳液EOFAZ@VBCP-BSA/VB_(12)。该纳米乳的粒径<100 nm,粒径分布均匀,表面弱负电荷,呈圆球形,对EOFAZ的包封率>80%,其具有良好的体外吸收效果,口服后能增强肝脏蓄积。结论:设计的蛋白多糖纳米乳能够有效负载EOFAZ,促进口服吸收,增强肝脏分布,可为口服EOFAZ保肝制剂的开发提供实验依据。

维生素B_(12)和叶酸联合四联疗法治疗Hp相关性CAG的疗效及其对E-Cad和MMP-9的影响分析

目的探究维生素B_(12)(VB_(12))和叶酸联合四联疗法治疗幽门螺杆菌(Hp)相关性慢性萎缩性胃炎(CAG)的疗效及其对E-钙黏着蛋白(E-Cad)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的影响。方法选取鞍山市中心医院2018年12月—2020年12月收治的Hp相关性CAG患者120例,采取随机数字表法分为对照组与观察组各60例,对照组给予常规四联疗法,观察组在对照组治疗方案基础上加用VB_(12)和叶酸治疗,对比两组临床疗效及治疗前后胃黏膜镜下检查结果评分、病理检查评分、炎性因子及E-Cad、MMP-9水平。结果临床总有效率观察组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后观察组胃黏膜镜下检查结果评分及病理检查评分均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后观察组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素8(IL-8)及超敏C反应蛋白(hs-CRP)表达水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后观察组E-Cad表达水平高于对照组,MMP-9表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论对于Hp相关性CAG的治疗,在常规四联疗法基础上加用VB_(12)和叶酸能够提高疗效,进一步改善患者临床症状及体征,减轻炎症反应,调节E-Cad、MMP-9表达水平,具有一定的使用推广价值。