新趋化因子VCC-1小干扰RNA真核表达载体的构建及鉴定

目的构建对VCC-1基因有特异性抑制作用的小干扰RNA(siRNA)表达载体。方法根据VCC-1 mRNA序列,按照siRNA设计原则设计4条特异性的寡核苷酸序列及阴性对照,分别克隆到pGPU6/GFP/Neo载体中。酶切鉴定和测序验证阳性克隆。用脂质体转染SMMC7721细胞,以RT-PCR分析其对VCC-1 mRNA表达的影响。结果经酶切、测序鉴定均证实重组质粒构建成功。pGPU6/GFP/Neo-siRNA、B、C、D载体均能抑制SMMC7721细胞VCC-1基因mRNA的表达,其中重组质粒C抑制作用最强。结论成功构建了靶向人VCC-1的小干扰RNA表达载体,为进一步研究VCC-1的功能奠定了基础。

siRNA沉默新趋化因子VCC-1抑制SMMC7721肝癌细胞体外克隆形成能力和体内成瘤性

目的:探讨siRNA靶向抑制VCC-1表达对人肝癌细胞株SMMC27721成瘤性的影响。方法:用软琼脂克隆形成实验、裸鼠成瘤实验等研究siRNA靶向抑制VCC-1表达对SMMC7721细胞克隆形成能力及裸鼠成瘤性的影响。结果:软琼脂克隆形成实验结果显示siRNA靶向抑制VCC-1表达可显著降低SMMC7721肝癌细胞的克隆形成能力(P<0.01);裸鼠成瘤实验显示注射shVCC1-1组肝癌细胞的裸鼠,比注射干扰阴性对照shNC组肝癌细胞及未处理对照组肝癌细胞的裸鼠的瘤体生长速度慢,瘤体重量轻、体积小(P<0.01)。结论:siRNA抑制VCC-1在SMMC7721中的表达,在一定程度上可以抑制其体外克隆形成能力及体内成瘤性。

siRNA介导的新趋化因子VCC-1沉默对人SMMC7721肝癌细胞生长的影响

目的探讨siRNA靶向抑制VCC-1表达对人肝癌细胞株SMMC7721生长的影响。方法采用脂质体法将siRNA质粒导入SMMC7721细胞,建立VEGF相关的趋化因子1(VCC-1)基因表达沉默的肝癌细胞系,用Western blot检测细胞中VCC-1的表达水平,用MTT法、软琼脂克隆形成实验等研究siRNA靶向抑制VCC-1表达对SMMC7721细胞生长的影响。结果Western blot结果显示RNA干扰组(shVCC1-1组)细胞VCC-1蛋白表达水平明显低于对照组(P<0.01),MTT法结果显示shVCC1-1组细胞增殖速度、克隆形成率均低于对照组(P<0.05)。结论 siRNA靶向抑制VCC-1表达可以抑制人SMMC7721肝癌细胞增殖能力及克隆形成能力。

VCC-1慢病毒表达载体的构建及其对胶质瘤细胞增殖的影响

目的:构建小趋化因子VCC-1的慢病毒表达载体并研究其对人胶质瘤细胞株U251增殖的影响。方法:以人结肠癌细胞为模板扩增VCC-1基因,并连入pMX载体,挑取测序正确的克隆在293T细胞中表达,并用realtime-PCR和Western blot进行验证。结果:成功构建了人VCC-1的慢病毒表达载体,并感染了星形胶质瘤细胞系U251。结论:证明了VCC-1基因在胶质瘤细胞的增殖过程中起促进作用,并为后续研究VCC-1和胶质瘤形成发展和浸润的机制提供了良好的基础。

VCC-1在肝癌患者血、尿和癌组织中的表达及其意义

目的检测VCC-1及VEGF在原发性肝癌患者血、尿和癌组织中的表达情况,并探讨它们在乙肝相关性肝癌发生、发展中的作用及临床意义。方法应用ELISA法检测40例原发性肝癌血、尿标本中VCC-1及VEGF术前及术后第1、5、7天的浓度,并同时检测40例正常人和13例因乙肝后肝硬化、门静脉高压、脾功能亢进行脾切除+贲门周围血管离断+肝活检患者术前血、尿标本中VCC-1及VEGF的浓度。应用免疫组化的方法检测40例肝癌术后癌组织及癌旁组织和13例肝硬化活检组织中VCC-1及VGGF的表达情况。结果肝癌组术前血、尿中VCC-1和血清中VEGF的浓度高于正常对照组和肝硬化组(P<0.05),肝硬化组与正常组血、尿VCC-1及血清中VEGF无明显差异(P>0.05)。肝癌组术后1、5、7天血、尿中VCC-1及血清VEGF浓度明显高于术前。肝癌组织VCC-1、VEGF免疫组化阳性率高于癌旁组和肝硬化组织(P<0.05),癌旁组织和肝硬化组织之间无明显差异。肝癌组织中VCC-1的阳性表达与肿瘤存在脉管癌栓、TNM分期具正相关性(P<0.05);肝癌组织中VEGF的阳性表达与肝癌的TNM分期及肿瘤直径具有相关性。结论肝癌患者血、尿及癌组织中VCC-1表达增高,且与VEGF的表达具有正相关,提示VCC-1可能参于肝癌的进展及转移。

趋化因子VCC-1在肝细胞癌中的表达及其意义

目的 研究趋化因子VCC-1在肝细胞癌中的表达及其临床意义.方法 采用RT-PCR法检测8种肝细胞癌细胞株、10例正常肝脏组织标本、42例肝癌组织及癌旁组织中的VCC-1的mRNA表达情况,并结合临床资料探讨VCC-1的临床意义.结果 肝细胞癌细胞株中,SUN398的VCC-1表达量最高,Hep3B和Huh7几乎不表达,SUN387、SUN449、SUN423、HepG2、PLC5的表达介于两者之间.42例肝癌患者标本中,癌组织及癌旁组织同时存在表达,癌组织高于癌旁组织26例（61％,14.9±7.6倍）,癌旁组织高于癌组织16例（39％,6.9±5.4倍）.癌组织表达上调（P＜0.01）.VCC-1的表达水平与肿瘤分化程度、直径有关（P＜0.05）.在10例正常肝脏标本中,8例无表达,2例微表达,其表达水平低于癌细胞株、肝癌组织及癌旁组织（P＜0.01）,而复发的3例标本均有癌组织高表达（20.1±2.3倍）.有癌栓的8例标本中,5例出现癌组织VCC-1高表达（17.3±4.5倍）,3例低表达.结论 VCC-1表达升高可能与肝细胞癌的发生发展有关,并有可能成为肝细胞癌的治疗靶点.

VCC－1真核表达载体的构建及肝癌细胞SMMC7721稳定转染株的建立及鉴定

目的:构建pcDNA3.1(-)/VCC-1真核表达载体并将其稳定转染到肝癌细胞系SMMC-7721中。方法:以SMMC-7721细胞总RNA为模板,通过RT-PCR扩增VCC-1基因编码区cDNA,并将扩增的cDNA片段与pMD19-T载体连接后亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)中。重组子经酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染技术将其导入到人肝癌细胞系SMMC-7721,经G418筛选并建立稳定的转染细胞株,应用RT-PCR及Western blot检测转染前后该细胞株VCC-1基因的表达。结果:pcDNA3.1(-)/VCC-1经酶切鉴定及DNA测序证实序列完全正确,真核表达载体构建成功;经RT-PCR及West-ern blot检测,重组质粒转染株的VCC-1基因的表达水平高于对照组,证实VCC-1基因稳定转染到SMMC-7721细胞中并得到表达。结论:成功地建立了人基因VCC-1的肝癌细胞SMMC-7721稳定转染株,为进一步研究VCC-1的功能奠定了基础。