黄芩苷对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化及VE-钙黏蛋白表达水平的影响

目的探讨在动脉粥样硬化模型(AS)发生发展过程中VE-钙黏蛋白表达变化的意义及黄芩苷抗AS作用的可能机制。方法建立小鼠ApoE-/-AS模型,20只雄性ApoE-/-小鼠随机分为AS模型组及黄芩苷治疗组,每组10只;雄性C57BL/6小鼠10只为正常对照组。建模成功后,黄芩苷治疗组小鼠给予黄芩苷50 mg/(kg·d)灌胃,AS模型组及正常对照组给予生理盐水灌胃,连续灌胃4周。12周后处死动物,检测血清炎症指标,以及主动脉核因子-κB(NF-κB)、VE-钙黏蛋白的表达水平。结果模型成功后,小鼠主动脉NF-κB、VE-钙黏蛋白阳性表达及炎症因子水平与正常对照组比较明显升高(P<0.01或P<0.05),黄芩苷处理后,治疗组的小鼠主动脉NF-κB、VE-钙黏蛋白表达及炎症因子水平显著降低(P<0.01或P<0.05),VE-钙黏蛋白表达与NF-κB阳性表达及炎症因子水平呈正相关(r=0.77)。结论黄芩苷对AS有保护作用,其机制可能是通过降低NF-κB的转录活性、下调炎症因子以及VE-钙黏蛋白的表达,从而减轻内皮细胞损伤实现的。

血管生成素1对大鼠脉络膜新生血管的治疗作用及其初步机制

目的 探究血管生成素1(Ang1)对大鼠脉络膜新生血管(CNV)的治疗作用及其可能机制。方法 选取30只6~8周龄挪威(BN)大鼠,雌雄不限,随机分为正常组、模型组、Ang1治疗组,每组10只。正常组不做处理;其余两组采用多波长氪激光对BN大鼠双眼进行CNV造模,于造模后14 d进行眼底荧光素血管造影检查。造模成功后1 d,Ang1治疗组玻璃体腔注射200μg/L的Ang1 20μl,其余两组注射等量生理盐水;注药后10 d进行眼底荧光素血管造影检查,使用FITC标记葡聚糖(FITC-dextran)心脏灌注法进行脉络膜铺片测量CNV面积,采用苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠视网膜-脉络膜结构变化;取大鼠视网膜-脉络膜-巩膜复合体,采用Western blotting检测Ang1、Rap1、小分子G蛋白Rap1(GAPRap1)、血管内皮-钙黏蛋白(VE-cadherin)的表达情况。取对数生长期大鼠脉络膜血管内皮细胞(RCVECs),用血管内皮生长因子(VEGF)刺激培养24 h后,分为阴性对照组(siRNA-NC组)、GAPRap1小干扰RNA组(GAPRap1-siRNA组)、GAPRap1-siRNA+Ang1组。GAPRap1-siRNA组及GAPRap1-siRNA+Ang1组转染GAPRap1-siRNA试剂,siRNA-NC组细胞转染siRNA-NC试剂,转染6 h后,在GAPRap1-siRNA+Ang1组中加入200μg/L Ang1,继续培养24 h后提取细胞蛋白,采用Western blotting检测细胞中GAPRap1、Rap1、VE-cadherin的表达情况,免疫荧光染色检测转染后细胞中VE-cadherin的表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠新生血管渗漏面积、脉络膜损伤程度明显升高,脉络膜中GAPRap1、VE-cadherin蛋白表达明显降低(P<0.05),Rap1蛋白表达无明显变化(P>0.05);与模型组比较,Ang1治疗组大鼠新生血管渗漏面积、脉络膜损伤程度明显降低,脉络膜与细胞中GAPRap1、VE-cadherin蛋白表达明显升高(均为P<0.01),Rap1蛋白表达无明显变化(P>0.05)。脉络膜组织中,Ang1蛋白在Ang1治疗组的表达明显高于其余两组(P<0.01)。细胞实验中,GAPRap1-siRNA组GAPRap1与VE-cadherin的表达水平较GAPRap1-siRNA+Ang1组及siRNA NC组明显降低(P<0.01),而Rap1表达无明显变化(P>0.05)。免疫荧光染色检测结果显示,GAPRap1-siRNA组VE-cadherin表达水平较GAPRap1-siRNA+Ang1组及siRNA NC组明显降低(P<0.001)。结论 Ang1可减少大鼠CNV的渗漏,对CNV生长具有一定抑制作用,其机制可能与通过GAPRap1-VEcadherin途径加强细胞黏附作用有关。

高迁移率族蛋白1对系统性红斑狼疮肾损伤肾小球内皮细胞通透性影响

目的 分析高迁移率族蛋白1(HMGB1)对系统性红斑狼疮(SLE)肾损伤肾小球内皮细胞(HRGEC)通透性的影响。方法 选取自2020年1月至2022年3月于河北医科大学第二医院行血浆置换术治疗的50例SLE患者为研究对象。根据有无蛋白尿将患者分为A组(无蛋白尿,n=27)和B组(有蛋白尿,n=23)。另选取同期于我院体检的50例健康者纳入健康组。采用酶联免疫吸附法检测各组血浆HMGB1、内皮素-1、溶性血管细胞黏附分子(sVCAM-1)水平。将HRGEC分为control组与狼疮性肾炎(LN)组,control组以健康者血浆刺激细胞,LN组以SLE肾损伤血浆刺激细胞。CCK8检测细胞活力,跨膜电阻法和FITC-BSA法检测HRGEC单层的通透性,免疫荧光方法检测血管内皮细胞钙黏蛋白(VE-cadherin)的表达。将HRGEC细胞分为control组、LN组、LN+HMGB1中和抗体(LN+H ab)组、LN+对照IgG抗体(LN+IgG ab)组,比较各组HRGEC单层的通透性,细胞间VE-cadherin表达。结果 A组和B组血浆中HMGB1、内皮素-1、sVCAM-1水平均明显高于健康组,且B组高于A组,差异均有统计学意义(P<0.05)。CCK8结果显示,随着血浆刺激浓度的增加,control组细胞活力无明显改变(P>0.05);当刺激浓度为10%、15%、20%时,LN组细胞活力明显下降(P<0.05)。HMGB1中和抗体预处理后:与control组比较,LN组的跨膜电阻(TEER)值明显下降、荧光通透率明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);与LN组比较,LN+H ab组TEER值明显升高、荧光通透率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);LN+H ab组细胞间VE-cadherin的表达较LN组有所增加,提示细胞间紧密连接有所改善。结论 SLE患者血清中HMGB1水平明显升高,且存在肾损伤者更为明显,HMGB1中和抗体能够部分逆转HRGEC单层的通透性,改善细胞间的紧密连接,HMGB1可能参与了SLE的HRGEC损伤。

Tumstatin活性片段-T7肽抑制血管生成的实验研究

目的:探讨肿瘤抑素(Tumstatin)的活性片段T7肽在体外对血管生成的影响及相关机制。方法:选取人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作为研究对象,在模拟肿瘤缺氧微环境的缺氧培养箱内进行相关实验。分为缺氧对照组、缺氧+T7肽(1.0μmol/L)处理组、缺氧+T7肽(2.0μmol/L)处理组。体外小管形成实验观察T7肽在缺氧环境下对血管生成的影响;CCK-8法检测T7肽对HUVECs活力的影响;Annexin V-FITC法检测细胞凋亡情况;Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白的表达变化;免疫荧光及Western blot检测HUVECs中VE-钙黏蛋白表达变化。结果 :在缺氧环境下,T7肽可明显抑制体外血管生成(P<0.05),并显著降低HUVECs活力,促进其凋亡(P<0.05);T7肽可诱导促凋亡蛋白BAX表达增加(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低(P<0.01);T7肽可降低HUVECs内VE-钙黏蛋白的表达(P<0.05)。结论:T7肽可通过抑制内皮细胞活力、促进内皮细胞凋亡及降低VE-钙黏蛋白表达发挥其抗血管生成的作用。