周期加载对VEC-304细胞株迁移、增殖分布的影响

在弹性膜上接种VEC-304,融合生长后擦去周边细胞形成一规则圆斑,使用弹性膜周期加载装置,对生长在弹性膜上的VEC-304圆斑施以15%拉伸应变,经显微镜观察,计算机图像处理了解细胞增殖、迁移时间过程及增殖细胞在应变场中的分布,细胞银染了解细胞形态及细胞连接情况,免疫荧光染色观察增殖细胞的分裂极。结果发现:(1)随加载时间延长圆斑沿与应变垂直向伸展成椭圆形,24h两径出现明显差异;(2)随时间增加圆斑面积扩大,但实验组沿与加载垂直方向的增大较沿加载方向为大;(3)细胞有丝分裂器(中心粒)位于细胞短轴即加载方向;(4)加载后细胞较对照组排列紧密,细胞间距更小,且出现较为明显的重叠生长现象。VEC-304在应变场中的运动迁移、增殖具有方向依赖性,周期加载可以促进细胞间连接。

脂脉宁对H_2O_2诱导VEC-304细胞表达NF-kB及HSP-70的影响

目的探讨脂脉宁对过氧化氢(H2O2)诱导血管内皮(VEC)-304细胞NF-kB及HSP-70表达的影响。方法将VEC-304细胞分4组:对照组、H2O2组、试验1组(脂脉宁大剂量)、试验2组(小剂量)。采用免疫组化、Western blot分析法,观察H2O2诱导VEC-304细胞的NF-kB及HSP70蛋白的表达。结果H2O2组NF-kB、HSP-70的表达比对照组均明显上调;而试验1、2组细胞NF-kB、HSP-70的表达均明显较H2O2组下调;1组与2组比,NF-kB的下调更明显。结论H2O2可诱导VEC-304细胞NF-kB、HSP-70高表达,而脂脉宁可使其表达下调。

基于“雅解理论”探讨雅解益栽(心)方药物血清对CSE诱导VEC-304细胞损伤的影响

目的:观察香烟提取物(CSE)诱导血管内皮(VEC)-304的存活率、细胞增殖抑制率的变化,测定细胞裂解液的抗氧化能力,检测细胞相关凋亡蛋白的表达,探讨雅解益栽(心)方药物血清对CSE诱导的VEC-304细胞损伤的影响。方法:采用CSE复制VEC-304细胞损伤模型,雅解益栽(心)方含药血清倍比稀释后分为3个剂量干预组(体积分数10%),采用MTT、TUNEL、DNA ladder、免疫组化以及Western Blot等方法,检测雅解益栽(心)方药物血清对CSE诱导的(VEC)-304细胞损伤的影响。结果:CSE可诱导细胞凋亡,其机制与其引发细胞氧化应激反应有关;诱发细胞Caspase-3、Bax、NF-κb表达上调,Bcl-2、p53下调,而致细胞凋亡。雅解益栽(心)方干预组细胞SOD、GSH-px、GSH含量比空白对照组高,MDA及NOS比空白对照组低;而Caspase-3、Bax、NF-κb表达下调,Bcl-2、p53表达上调。并有一定的量效依赖关系。结论:CSE能诱导VEC-304细胞凋亡,雅解益栽(心)方药物血清有明显的抗氧化作用,能抑制细胞凋亡,从而具有解烟毒作用。

脂脉宁对香烟提取物诱导血管内皮-304细胞损伤的保护作用

目的观察脂脉宁药物血清对香烟提取物(CSE)诱导的血管内皮(VEC)-304细胞损伤的影响。方法将培养细胞分为CSE组、空白组、脂脉宁大剂量组、脂脉宁小剂量组。采用MTT、免疫组化和TUNEL等方法,观察各组细胞存活率和凋亡率、相关凋亡蛋白表达及氧化反应指标的变化。结果 CSE组存活率最低,凋亡率最高,Wp53、p21、Bax、Caspase-3表达均明显升高,Bcl-2、mp53表达降低,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)活性、谷胱甘肽(GSH)含量均降低,丙二醛(MDA)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性升高,与空白组比较差异有统计学意义;脂脉宁大、小剂量组存活率明显升高,凋亡率降低,Wp53、p21、Bax、Caspase-3表达下调,Bcl-2、mp53表达上调;SOD、GSH-Px、T-AOC活性及GSH含量均升高,MDA含量及NOS活性降低,而脂脉宁大剂量组更明显。结论 CSE诱导的VEC-304细胞凋亡与其过氧化反应密切相关,脂脉宁有抑制细胞凋亡及抗氧化作用。

黄芪注射液对高糖所致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的研究黄芪对高糖所诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用。方法采用人脐静脉血管内皮细胞株EVC-304,在培养液中加入不同浓度的黄芪,孵育24h,高糖诱导损伤,再培养4h后,终止培养。观察细胞形态学变化并检测细胞活力、蛋白质含量,检测VEGFmRNA及蛋白的表达。结果正常对照组及黄芪各剂量组细胞活力、蛋白质含量均高于高糖损伤对照组,差异有显著性(P<0.05)。高糖明显抑制VEGF的活性和表达,黄芪则有明显的修复作用。结论黄芪可以减轻高糖对血管内皮细胞的损伤,具有一定保护作用。

低频超声联合微泡剂对血管内皮细胞的生物学效应

目的:研究低频超声联合微泡剂对血管内皮细胞VEC-304的作用,为超声治疗的临床应用提供实验依据。方法:将细胞分为空白对照(A)组;单纯微泡剂(B)组;单纯超声(C)组,因给予不同时间的超声辐照又分为C1组(60 s)、C2组(90 s)、C3组(120 s)和C4组(150 s);超声联合微泡剂(D)组,因加入微泡剂后立即给予不同时间的超声辐照又分为D1组(60 s)、D2组(90 s)、D3组(120 s)和D4组(150 s)。MTT法观察细胞增殖的抑制作用,分光光度法检测细胞培养液中活性氧(ROS)和超氧化物歧化酶(SOD)活力的变化,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡。结果:超声联合微泡剂能够显著抑制细胞增殖;C3、D3组培养液中ROS活力显著高于A、B两组(P<0.01),SOD活力显著低于A、B两组(P<0.01),且D3组效应比C3组更为明显;C3、D3组细胞凋亡率明显高于A、B组(P<0.01),D3组高于C3组(P<0.05)。结论:低频超声联合微泡剂可能是通过增加细胞外ROS的活力来诱导对细胞的损伤和凋亡。

黄芪注射液对高糖所致血管内皮细胞损伤的保护作用

背景与目的:研究黄芪注射液对50%葡萄糖所诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用。材料与方法:采用血管内皮细胞VEC-304,分为正常对照组、葡萄糖损伤对照组和加入3个不同黄芪浓度的实验组(100mg/ml、200mg/ml、300mg/ml),各组细胞孵育24h后,除正常对照组外其余各组加入50%葡萄糖(终浓度为30mg/L)诱导损伤,继续培养4h。在倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化并采用MTT光吸收法检测细胞活力、采用考马斯亮蓝法检测蛋白质含量,用RT-PCR法和免疫细胞化学方法检测血管内皮生长因子(VEGF mRNA)及蛋白的表达。结果:正常对照组及黄芪注射液各剂量组细胞活力、蛋白质含量均高于50%葡萄糖损伤对照组,其差异均具有统计学意义(P均<0.05)。显示高糖明显抑制VEGF的活性和表达,而黄芪则具有明显的对高糖损伤的修复作用。