重组腺病毒Ad-huVEGF_(121)的制备

目的 :构建能够用于骨缺血研究的能表达huVEGF12 1的重组腺病毒载体。方法 :将huVEGF12 1克隆至穿梭质粒 ,线性化后转染含骨架质粒的BJ5 183菌 ,构建重组腺病毒质粒。酶切及PCR法鉴定 ;将其线性化后转染 2 93细胞 ,通过观察绿色荧光监测病毒产生 ,免疫组化检测VEGF12 1表达。结果 :成功的将hu -VEGF12 1克隆至穿梭质粒pTrack -CMV ,正确构建了重组腺病毒质粒 ,感染 2 93细胞得到大量病毒。结论 :成功构建了huVEGF12 1重组腺病毒 ,为缺血性骨病的进一步研究奠定了基础。

构建携带VEGF_(121)-FLAG和hrGFP-1基因腺病毒表达载体在骨髓基质干细胞中的表达(英文)

背景:血管内皮生长因子具有促进血管生成的作用,在骨缺损的治疗研究中运用较多,但其异构体VEGF121的研究较少。目的:构建携带VEGF121-FLAG和hrGFP-1基因的腺病毒表达载体并观测其在骨髓基质干细胞中的表达。方法:以pTG19T-VEGF121为模板利用PCR技术突变VEGF121基因以去除VEGF121基因中终止密码子,之后在基因序列前后分别加入NotⅠ和XhoⅠ酶切位点,并将得到的基因亚克隆至pMD19-T质粒上,双酶切pMD19-T-VEGF121和pShuttle-CMV-IRES-hrGFP-1质粒,凝胶回收小片段和大片段,后进行连接反应,完成穿梭质粒的构建。重组病毒物理滴度测定后感染骨髓基质干细胞,在荧光显微镜下观察荧光强度。结果与结论:经酶切鉴定及基因测序证实重组腺病毒质粒构建成功,荧光显微镜下观察表明,感染重组腺病毒的骨髓基质干细胞有明显的绿色荧光表达。可见构建的携带VEGF121-FLAG和hrGFP-1基因的腺病毒表达载体可在真核细胞表达,有可能用于缺血性疾患的基因治疗。

重组腺病毒介导VEGF_(121) cDNA体外转移与表达

构建携带VEGF12 1cDNA重组复制缺陷型腺病毒表达载体 ,制备重组腺病毒 ,该腺病毒能介导VEGF12 1cDNA基因促进人脐静脉血管内皮细胞增殖 ,促进毛细血管管腔样结构形成 .ELISA检测表明VEGF12 1cDNA基因表达产物分泌至培液上清 ,并显示强烈血管通透作用 .为进一步利用重组腺病毒介导VEGF12

血管内皮细胞生长因子_(121)(VEGF_(121))在胃癌中的表达及其临床意义

目的 探讨VEGF12 1血管生成因子在胃癌中的表达与胃癌微血管密度及胃癌临床病理特征的关系。方法 采用免疫组织化学方法对 5 9例胃癌、2 5例胃慢性良性病变、15例癌旁正常胃黏膜组织检测VEGF12 1阳性表达及微血管密度 (CD34标记 )。结果 (1)胃癌中VEGF12 1阳性表达率为 79 6 6 % (4 7/5 9) ,高于胃慢性良性病变和癌旁正常组织 (P <0 0 5 ) ;胃癌微血管密度 (MVD)高于胃慢性良性病变和癌旁正常组织 (P <0 0 5 )。 (2 )胃癌中VEGF12 1阳性表达率在不同浸润深度组和有无远处转移组有显著性差异 (P <0 0 5 )。胃癌中微血管数量增加 ,形态结构异常 (P <0 0 5 )。结论 VEGF12 1在胃癌中高表达 ,并与胃癌的浸润转移一致。检测VEGF12 1在胃癌中的表达对判断胃癌的恶性程度有价值。

VEGF_(121)-KLAK融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达及纯化

目的:在大肠杆菌中高效表达并纯化VEGF121与两性分子KLAK的融合蛋白,为进一步研究其抗肿瘤血管形成作用奠定基础。方法:用RT-PCR法扩增目的基因,插入表达载体pET28a后,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白,对产物进行SDS-PAGE及Western印迹分析。结果:克隆出目的基因,构建了融合蛋白表达载体,诱导表达后经SDS-PAGE检测表明获得了目的条带。结论:在大肠杆菌中高效表达并纯化了融合蛋白VEGF121-KLAK。

胃肠激素与肿瘤——血管内皮生长因子及其受体在胃癌组织的mRNA表达

目前恶性肿瘤细胞的急剧、持续增殖是由于肿瘤组织内血管的不断再生,血管内皮生长因子(vas-cular endothelial growth factor,VEGF)是一种主要的血管发生蛋白质,与肿瘤血管内皮细胞的分裂、增殖密切相关,本研究目的为观察VEGF及其受体在胃癌组织的基因表达变化。

人血管内皮生长因子基因转染原代成人皮肤成纤维细胞研究

目的 将人血管内皮生长因子 (hVEGF)基因导入原代离体成人皮肤成纤维细胞 ,验证转基因细胞分泌hVEGF情况 ,探讨成人自体细胞基因修饰后移植的可行性。方法 采用酶消化法获取成纤维细胞 ,以杜氏改良培养基 (DMEM )传代培养。以脂质体转染法将pcDNA3 .1(+ ) /hVEGF12 1导入成纤维细胞 ,培养 48h后取细胞作逆转录 多聚酶链式反应 (RT PCR) ,上清行酶联免疫吸附反应 (ELISA)检测、MTT测定和Mile’s实验。结果 转基因细胞经RT PCR扩增出一条约 44 4bp条带 ,ELISA显示转基因细胞培养上清VEGF浓度约 (12 .3 2± 0 .3 9) μg/L ,MTT显示上清明显促内皮细胞增殖 ,Mile’s实验显示上清明显增加毛细血管通透性。结论 质粒 pcDNA3 .1(+ ) /hVEGF12 1成功转染成人皮肤成纤维细胞 ,转基因细胞能表达分泌有生物活性的VEGF12 1蛋白。

改性聚二甲基硅氧烷(iPDMS)蛋白芯片在肿瘤相关抗原自身抗体筛查中的应用

肿瘤标记的快速筛查是临床早期诊断的难题。利用化学发光蛋白质芯片技术,对低丰度的肿瘤相关抗原的自身抗体进行高灵敏度的筛选,是一种有益的尝试。本研究首先将带烯烃末端的、引发聚合反应的表面引发剂加入到常规聚二甲基硅氧烷材料中,再通过热交联反应固定到聚二甲基硅氧烷的三维结构中,形成改性聚二甲基硅氧烷(iPDMS)。为了使iPDMS材料具有抗蛋白质非特异性吸附的特性,在活性引发位点处通过表面引发的原子转移自由基聚合反应合成poly(OEGMA)高分子刷。最后将20种肿瘤相关的抗原利用高通量喷点打印技术打印到芯片的特定区域,并组装成iPDMS芯片的48孔检测微孔板。对临床上常见的8种肿瘤患者血清进行分析,发现VEGFR1和VEGF121自身抗体对常见的8种肿瘤具有检测价值,有望成为肿瘤快速筛查的检测指标。