反义VEGF基因及内皮抑素基因转染对人巨细胞肺癌生物学行为的影响

目的 探讨反义VEGF基因和内皮抑素基因联合转染在抑制肿瘤血管生成和肿瘤生长转移中的作用。方法 反义VEGF12 1cDNA脂质体法转染人肺巨细胞癌细胞 (PG AS VEGF) ,先行转基因细胞裸鼠异种移植 ,之后电脉冲介导PsectagA 内皮抑素基因转染 ,观察反义VEGF基因和内皮抑素转染对肿瘤血管生成和肿瘤生长转移的调节作用。结果 肿瘤内微血管密度在PG AS VEGF、转染空载体组分别为 40 .6 7± 9.35和5 8.34± 10 .5 2 (P <0 .0 5 ) ;裸鼠体内接种PG AS VEGF细胞后 18天 ,PG AS VEGF、转染空载体组肿瘤体积分别为 (0 .9779± 0 .2 42 1)和 (1.5 2 10± 0 .415 0 )cm3(P <0 .0 5 ) ;PG AS VEGF、转染空载体组淋巴结转移率分别为16 .7% (2 /12 )和 5 0 % (6 /12 ) (P <0 .0 5 )。在肿瘤局部行PsectagA 内皮抑素基因转染的PG AS VEGF瘤 ,当肿瘤生长到 2 1天时 ,肿瘤生长受到明显抑制 ,PsectagA 内皮抑素基因转染组与PsectagA空载体转染组肿瘤体积分别为 (1.5 889± 1.1396 )和 (3 .398± 2 .6 42 )cm3(P <0 .0 5 ) ;两者肿瘤淋巴结转移率分别为 12 .5 % (1/8)和 75 %(6 /8) (P <0 .0 5 )。结论 内皮抑素基因转染对反义VEGF基因转染的PG细胞裸鼠体内生长和淋巴结自发性转移有协同抑制作用。

反义VEGF基因转染对HEP-2细胞生物学行为的影响

目的观察反义VEGF基因转染对HEP-2细胞生物学行为的影响。方法克隆人VEGF基因,将VEGF-cDNA反向克隆到真核表达载体pcDNA3,构建反义VEGF表达载体pcDNA3-VEGF(-);利用阳离子脂质体载体,稳定转染人喉癌Hep-2细胞,并通过流式细胞仪检测,观察转染细胞细胞周期的改变,在透射电镜下观察转染细胞超微结构的改变;将转染细胞注入裸鼠皮下,观察肿瘤生长情况。结果成功克隆了人VEGF基因,并构建了携带反义VEGF基因的真核表达载体pcDNA3-VEGF(-);将其稳定转染人喉癌Hep-2细胞,获得了稳定表达反义VEGF的细胞系,与正常Hep-2细胞相比,该细胞系细胞周期及超微结构均无明显改变;将转染细胞注入裸鼠皮下,与对照组相比,肿瘤的生长速度明显减缓。结论反义VEGF基因转染可以有效地抑制喉癌的生长。

VEGF_(165)转染大鼠血管内皮细胞对新生血管形成影响的实验研究

目的探讨血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因与增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)共表达载体转染大鼠血管内皮细胞,植入大鼠体内,观察诱导新生血管情况,为移植组织诱导新生血管形成奠定基础。方法对质粒pIRES2-EGFP/VEGF165进行扩增、纯化,以脂质体法转染大鼠血管内皮细胞并植入肾被膜下。采用荧光显微镜检测增强绿色荧光蛋白在内皮细胞中的表达,用流式细胞仪检测转染效率。用RT-PCR检测VEGF mRNA的表达,免疫组化检测VEGF在内皮细胞中的表达。切取移植肾脏组织标本,HE染色观察组织形态学变化。结果荧光显微镜观察到实验组内皮细胞有特异性的EGFP表达,流式细胞仪分析转染效率为13.06%。实验组血管内皮细胞胞核和胞浆中均有VEGF表达。RT-PCR显示实验组大鼠血管内皮细胞中有人源化VEGF165基因在mRNA水平表达。移植后14d,实验组大鼠肾被膜下可见成团的新生毛细血管网形成,而对照组及空白转染组尽管血管内皮细胞仍存活,但未形成明显血窦。结论转染VEGF是促进内皮细胞早期(14d内)形成新生血管的有效途径。

腺病毒介导VEGF基因在人骨髓基质干细胞中的表达

[目的]体外培养人骨髓基质干细胞(hBMSc),将VEGF165基因腺病毒载体共转染hBMSc,观察其表达。[方法]共转染实验分为3组:VEGF165和eGFP转染组、空腺病毒载体转染组和未转染组。取重组腺病毒Ad-VEGF165(MOI=20pfu/cell)感染hBMSe。荧光显微镜下观察eGFP的表达,判断感染效率及细胞生长情况,RT-PCR检测,ELISA和Western blot检测分别用于观察基因转染的表达。[结果]MOI=20pfu的转染率已达80%以上,取此值为转染滴度。提取出的总RNA质量较好。以双链cDNA为模板扩增VEGF165基因,产物经1%琼脂糖凝胶电泳,均可见到549bp(GAPDH)2条带。转染组可见VEGF165表达,空载体组和空白对照组未检测到VEGF165表达。ELISA结果显示基因转染组与转染空载体组和未转染组结果差异呈显著性(P<0.05)。Western blot显示:转染组在50KD处出现特征性条带,而空载体组和空白对照组未见条带。[结论]外源性VEGF基因在人骨髓基质干细胞(hBMSc)内获得稳定表达,在本实验条件下培养的hBMSc具有典型成骨细胞的形态学特征和较强的生物学活性,向成骨细胞方向分化效率较高,细胞数量可以满足骨组织工程研究的要求。

VEGF_(121)在哺乳动物细胞中的稳定表达

目的探讨pcDNA3.1-VEGF121质粒对哺乳动物细胞的表达和转染。方法将pcDNA3.1-VEGF121质粒用电转的方法导入CHO细胞中,G418筛选细胞克隆;通过RT-PCR,ELISA,Western-blot在转录水平和蛋白质水平上检测VEGF121在转基因CHO细胞中的表达;通过内皮细胞增殖实验和血管通透性实验检测所表达的VEGF121的生物学活性。结果获得有G418抗性的CHO细胞克隆;RT-PCR扩增出一条大小约450bp的特异性泳带,测序结果与VEGF121mRNA一致;ELISA显示细胞培养上清的VEGF浓度约为8～22ng/ml;Western-Blot检测到大小为17KD的特异性蛋白质条带;内皮细胞增殖实验显示细胞培养上清具有促内皮细胞增殖作用;血管通透性实验显示细胞培养上清明显增加毛细血管通透性。结论pcDNA3.1-VEGF121质粒真核表达系统能在哺乳动物细胞中表达具有良好生物学活性的VEGF121蛋白。

PEG-PEI共聚物介导VEGF165基因转染及对内皮细胞生长的影响

为了考察PEG-PEI共聚物作为基因载体介导VEGF165基因的能力,合成不同接枝量的PEG-PEI共聚物,考察共聚物的细胞毒性,同时采用PCR技术获得上下游含有HindⅢ和BamHⅠ酶切位点的目的基因VEGF165,与pEGFP-C1构建重组质粒pEGFP-VEGF165,将PEG-PEI作为基因载体,与pEGFP-VEGF165通过自组装成DNA复合物,使其转染脐静脉内皮细胞(HUVEc),测定发荧光细胞百分数获得转染率,利用ELISA、RT-PCR检测VEGF的表达,用MTT法考察VEGF165转染HUVEc后对内皮细胞生长的影响.结果显示,形成PEG-PEI共聚物后可显著降低PEI的细胞毒性.作为基因载体介导pEGFP-VEGF165转染HUVEc后,在荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白表达,转染率与接枝PEG的量及N/P有关,PEG-PEI(5-25-1)在N/P=30时转染率达到最大值,比PEI显著提高.转染后血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达及mRNA水平均有显著提高,且可有效地刺激内皮细胞增殖.研究表明,PEG-PEI共聚物可做为基因载体,有效地介导pEGFP-VEGF165基因的传递.

大鼠VEGF腺病毒基因转染系统的构建及鉴定

目的探讨构建携带大鼠血管内皮细胞生长因子(VEGF)的重组腺病毒载体方法,为后续的基因转染研究作准备。方法采用RT-PCR扩增的方法获取鼠源性的VEGF,并克隆入穿梭质粒pDC316。构建的质粒pDC316-VEGF经酶切及测序鉴定正确后,通过lipofectamine2000的介导与腺病毒包装质粒pBHGE3共转染至人胚肾细胞HEK293,经同源重组后获得携带鼠VEGF的重组腺病毒VDC316-VEGF。应用PCR鉴定重组腺病毒,空斑传代纯化病毒并反复冻融扩增病毒。以50%组织培养感染剂量法(TCID50)测定病毒滴度。结果PCR鉴定证实重组腺病毒含有鼠VEGF,病毒滴度为3×109pfu/mL。结论成功构建的携带大鼠VEGF的重组腺病毒载体能在HEK293细胞内扩增获得足够高的病毒滴度,可作为后续基因治疗研究工作中可靠的基因转染工具。

VEGF-C反义寡核苷酸对卵巢癌细胞SKOV3的黏附、侵袭能力的影响

目的:探讨VEGF-C反义寡核苷酸(VEGF-C,ASODN)对人卵巢癌细胞SKOV3黏附、侵袭能力的影响。方法:以VEGF-C基因编码区为靶点合成反义寡核苷酸,脂质体介导转染。MTT法检测卵巢癌细胞与细胞外基质黏附能力;利用tran-swell小室,检测卵巢癌细胞侵袭人工基底膜的能力;免疫组化法检测细胞中VEGF-C蛋白表达,western blot检测细胞中MMP-2蛋白表达。结果:与空白对照组及正义序列转染组相比,ASODN组对细胞外基质黏附率明显降低(P<0.01),穿透重组基质膜数目明显下降(P<0.01),细胞中VEGF-C、MMP-2蛋白表达明显下降(P<0.01)。结论:VEGF-C ASODN可明显抑制卵巢癌细胞体外实验中的黏附和侵袭能力,下调MMP-2的表达可能是其作用途径。

VEGF-C真核表达质粒的构建及其真核表达

目的 研究人血管内皮生长因子 C(VEGF- C)基因功能片段的表达功能及表达活性。方法 以前期从人舌癌克隆得到的 VEGF- C功能片段 c DNA和真核表达质粒 pc DNA3.1(+)构建重组质粒 ,以阳离子脂质体转染法将其导入舌鳞癌细胞 Tca8113,并检测其表达、分泌功能及体外激活能力。结果 通过将长度约为 110 0 bp的VEGF- C功能片段插入 pc DNA3.1(+)的 Eco R 和 Xho 酶切位点之间 ,成功构建出 pc DNA3.1(+) - VEGF- C重组质粒 ,该质粒转染 Tca8113细胞后得到 VEGF- C高表达的舌癌细胞 Vc Tca,转染后的细胞可表达相对分子质量为 5 3× 10 3和 2 9× 10 3的 VEGF- C分子 ,在细胞培养液中可检测到相对分子质量为 2 9× 10 3的 VEGF- C片断。结论 构建的 VEGF- C重组质粒可在真核细胞实现表达 。

VEGF-C反义寡核苷酸对乳腺癌细胞MDA-MB-435黏附、侵袭能力的影响

目的 探讨 VEGF- C反义寡核苷酸 (antisense oligodeoxynucleotide,ASODN )对人乳腺癌细胞 MDA-MB- 4 35黏附、侵袭能力的影响。方法 以 VEGF- C基因编码区为靶点合成反义寡核苷酸 ,脂质体介导转染。 RT-PCR法检测转染后 VEGF- C m RNA表达水平 ;MTT法检测乳腺癌细胞与细胞外基质黏附 ;利用 Transwell小室 ,检测乳腺癌细胞侵袭人工基底膜能力 ;Western- blot法检测乳腺癌细胞中 MMP- 2蛋白表达。结果 与空白对照及正义序列 (sense oligodeoxynucleotide,SODN)转染组比较 ,ASODN组 VEGF- C m RNA水平下调 ,差异有显著性 (t=5 .6 4 ,5 .4 8,P<0 .0 1) ;对胞外基质黏附率明显降低 (χ2 =7.15 ,7.2 9,P<0 .0 5 ) ,穿透重组基底膜数目显著下降 (t=5 .2 9,5 .17,P<0 .0 1) ;细胞裂解液中 MMP- 2蛋白表达显著下调 (t=7.36 ,7.4 3,P<0 .0 1)。结论 VEGF- C基因 ASODN脂质体介导转染可明显抑制乳腺癌细胞体外实验中的黏附和侵袭能力 ;下调 MMP- 2的表达可能是其作用途径。

VEGF-C基因转染对人胃癌OCUM-2MD3细胞VEGF-C表达的影响

目的:探讨脂质体介导VEGF-C基因转染对人胃癌OCUM-2MD3细胞VEGF-C表达的影响。方法:双酶切pCRⅡ-VEGF-C重组质粒获得人VEGF-CcDNA片段,与真核表达载体pcDNA3.1连接构建pcDNA3.1-VEGF-C重组质粒,脂质体介导转染人胃癌OCUM-2MD3细胞并筛选,RT-PCR检测转染后VEGF-CmRNA表达水平,免疫组化法、流式细胞术检测VEGF-C蛋白表达变化。结果:经酶切鉴定,pcDNA3.1-VEGF-C重组质粒含人VEGF-CcDNA。转染组VEGF-CmRNA相对吸光度值为(0.73±0.16)%,较空载组(0.54±0.13)%表达显著上调(P<0.01)。免疫组化和流式细胞术检测转染组VEGF-C蛋白阳性表达率分别为(52.16±6.72)%、(41.83±3.65)%,较空载组(30.33±5.04)%、(30.16±3.23)%显著增加(P<0.01或0.05)。结论:脂质体介导VEGF-C基因转染人胃癌OCUM-2MD3细胞可显著增加VEGF-C表达水平,对探索胃癌淋巴转移机制及其治疗具有重要意义。

pEGFP-VEGF重组质粒的构建及其在成骨细胞中的表达

目的构建一种含人血管内皮细胞生长因子121(VEGF121)的质粒,以绿色荧光蛋白作为报告基因,观察其在成骨细胞中的表达。方法从人胎脑文库中,以PCR方法扩增出人VEGF121基因,构建入增强绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1,脂质体法转染成骨细胞,荧光显微镜下观测绿色荧光蛋白的表达;免疫细胞化学及ELISA检测VEGF蛋白的表达。结果PCR扩增出人VEGF121基因;构建入pEGFP-C1,体外成功转染入成骨细胞,在荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白的表达,免疫细胞化学及ELISA检测到VEGF蛋白的表达。结论重组质粒pEGFP-VEGF体外转染入成骨细胞后,目的基因能够在细胞有效表达,检测方法简便可靠,为利用转染该种目的基因的成骨细胞进行下一步实验提供了理论支持。

IGF-1基因转染对骨髓基质细胞分泌IGF-1、VEGF、BMP-2的影响

目的:观察胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因转染的骨髓基质细胞(MSCs)合成IGF-1、血管内皮细胞生长因子(VEGF)和骨形成蛋白-2(BMP-2)的变化,进一步了解基因转染骨髓基质细胞的生物学特性。方法:将含有IGF-1基因的真核质粒转染入大鼠骨髓基质细胞(MSCs)中,以正常培养的MSCs为对照组,分别于1、3、5、7 d对MSCs进行IGF-1、VEGF和BMP-2免疫组化观察。通过图像分析的方法检测IGF-1基因转染对MSCs合成IGF-1、VEGF和BMP-2的影响。结果:IGF-1基因转染后可促进MSCs合成IGF-1、BMP-2、VEGF(P<0.05),第三天合成IGF-1、BMP-2、VEGF作用最明显。结论:IGF-1基因转染的MSCs较未转染细胞合成IGF-1、BMP-2、VEGF明显增加。

hVEGF_(165)在兔骨髓间充质干细胞中的表达

目的培养和鉴定兔骨髓间充质干细胞,基因转染后观察hVEGF165在其中的表达。方法体外培养兔骨髓间充质干细胞,以流式细胞仪检测其表面抗原(CD29、CD44、CD45、HLA-DR)的表达。通过腺病毒载体转染hVEGF165后,采用RT-PCR、Western blot法检测hVEGF165在细胞中的表达。结果通过流式细胞仪检测表明培养的细胞为兔骨髓间充质干细胞,RT-PCR法、Western blot法检测结果均表明hVEGF165基因转染兔骨髓间充质干细胞后能在其中表达。结论成功培养兔体外骨髓间充质干细胞,基因转染后细胞能有效表达hVEGF165。

加减驻景方含药血清对AKT基因转染后ARPE-19细胞表达VEGF的影响

目的探讨加减驻景方含药血清对AKT基因转染后人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)细胞表达VEGF的影响。方法制备SD大鼠加减驻景方含药血清及空白血清,建立AKT基因转染ARPE-19细胞模型,体外培养,分为5个组,正常组为ARPE-19细胞常规培养,转染模型组(模型细胞,常规条件培养),含药血清组(模型细胞,给予含药血清干预培养)、空白血清组(模型细胞,给予空白血清干预培养)和阳性对照组(模型细胞,给予康柏西普干预培养)。设立不同时间和不同浓度,通过CCK-8法检测各组血清及阳性组药物对细胞毒性、增殖的影响;通过ELISA检测各组细胞上清液中VEGF的表达。结果蛋白质印迹法(Western blot)显示,转染模型组与正常组比较,AKT蛋白的表达量明显增加,差异有统计学意义(P <0.05)。CCK-8示,细胞培养24、48h后,AKT基因转染可促进ARPE-19细胞增殖(P<0. 05),培养72h后,对细胞增殖影响不大(P> 0.05)。10、20μg/ml康柏西普及5%、10%的含药血清对模型细胞的增殖有抑制作用(P <0. 05),各浓度空白血清组对模型细胞组的增殖影响不大(P>0. 05)。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测显示:转染模型组细胞上清液中VEGF表达量高于正常组(P<0. 05),康柏西普组与含药血清组均显著低于模型组(P <0.05),其中康柏西普组低于含药血清组,差异有统计学意义(P<0. 05)。空白血清组与模型组比较,差异无统计学意义(P>0. 05)。结论 AKT基因转染后可诱导ARPE-19细胞的增殖,促进VEGF的表达。加减驻景方含药血清对AKT基因转染后ARPE-19细胞的增殖及VEGF的表达有抑制作用。加减驻景方可能通过抑制VEGF的过度表达发挥干预CNV生成的作用。

色素上皮衍生因子基因修饰的人脐带间充质干细胞对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用

目的观察色素上皮衍生因子色素上皮衍生因子(pigment epithelial-derived factor,PEDF)基因修饰的人脐带间充质干细胞(pigment epithelial-derived factor gene-odified human umbilical cord mesenchimal stem cells,PEDF-MSCs)对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)模型中PEDF、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响及对视网膜神经节细胞的保护作用。方法绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记的慢病毒(lentivirus,LV)为载体,将PEDF基因以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为1、10、20、50体外转染至人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)中,应用RT-PCR及ELISA法分别检测以最佳MOI值转染细胞中PEDF的表达情况。选取健康SD雄性大鼠,采用高眼压的方法制成RIRI模型,随机分为正常对照组(N组)、磷酸盐缓冲液(phosphate bufferedsaline,PBS)治疗组(PBS组)、hUCMSCs治疗组(M组)及PEDF基因转染的hUCMSLs治疗组(P组);N组不予特殊处理,其余三组大鼠造模成功后立即进行干预治疗,PBS组给予PBS治疗,P组与M组分别给予PEDF-MSCs、hUCMSCs治疗。5 d后处死大鼠,尼氏染色计数视网膜神经节细胞数目,计算视网膜内层厚度,RTMPCR检测大鼠视网膜PEDF和VECGF的mRNA表达情况。结果荧光显微镜下观察到转染率高达75.8%。RT-PCR结果显示,转染后PEDF-MSCs的上清液中PEDF mRNA相对表达量(4.34±0.29)明显高于hUCMSCs(1.08±0.15),差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA检测结果显示,转染后PEDFMSCs上清液中PEDF蛋白表达量[(83.09±7.58)μg·L^(-1)]明显高于hUCMSCs[(12.30±1.24)μg·L^(-1)],差异有统计学意义(P<0.05)。尼氏染色结果显示造模后PBS组大鼠神经节细胞数量变少,治疗5 d后,P组、M组大鼠神经节细胞数量均高于PBS组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);P组高于M组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗5 d后,P组、M组大鼠视网膜厚度均厚于PBS组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);P组厚于M组。RT-PCR检测结果显示,P组PEDF mRNA表达水平显著升高,VEGF mRNA表达水平下降,与PBS组、M组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论玻璃体内注射PEDF-MSCs能上调RIRI模型大鼠视网膜PEDF表达,并下调VEGF表达,对RIRI大鼠视网膜神经节细胞有保护作用。

血管内皮生长因子165基因转染小鼠硬皮病皮损的实验研究

目的:探讨硬皮病基因治疗的新方法。方法:建立小鼠硬皮病动物模型后,应用电穿孔技术将血管内皮生长因子(VEGF)165真核表达质粒导入硬皮病小鼠硬化的皮下;再利用免疫组化、原位杂交法检测小鼠硬皮病皮损VEGF165的表达及观察组织病理改变。结果:①转基因后硬皮病鼠毛发生长明显增多,而未转基因硬皮病鼠毛发未见生长。②组织病理检查示转基因鼠毛囊明显增生,毛囊数每一低倍视野平均为(12.0±1.6)个,显著高于未转基因硬皮病鼠组(P<0.05)。真皮厚度增加,新生血管增加。③免疫组化、原位杂交法检测示转基因鼠表皮和真皮细胞及间质VEGF165表达明显增加。结论:电穿孔技术可将外源性基因转入小鼠硬化的皮肤,使其高表达。外源性VEGF165基因转染后,可明显促进小鼠硬化的皮肤毛发生长,已萎缩的真皮组织增生。

人血管内皮细胞生长因子165基因转染大鼠内皮祖细胞的实验研究

目的探讨人血管内皮细胞生长因子165(hVEGF165)基因转染骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)及对其影响。方法体外分离、培养、鉴定大鼠骨髓EPCs,ELISA检测转基因EPCs表达VEGF蛋白,MTT法检测对其增殖的影响。结果FITC-UEA-I和DiI-ac-LDL荧光双染证实分化的EPCs,脂质体介导pcDNA3-hVEGF165质粒转染组EPCs培养基上清中表达VEGF,hVEGF165基因转染促进EPCs增殖,注射转基因EPCs的大鼠皮下局部血管增加。结论hVEGF165基因可成功转染EPCs,并且具有血管内皮增殖刺激活性,为进一步研究hVEGF165基因修饰EPCs治疗血管内膜损伤性疾病提供实验依据。

外源性反义血管内皮生长因子-C基因稳定转染对人胃癌细胞SGC-7901体外生长的影响

目的:观察以pCI-neo为载体的血管内皮生长因子-C(Vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)反义基因转染的人胃癌细胞SGC-7901中VEGF-C蛋白的表达,并研究其对人胃癌细胞体外生长的影响。方法:应用重组质粒pCI-neo-anti VEGF-C和pCI-neo空载体质粒,以脂质体转染法转染体外培养的人胃癌细胞株,以未转染组为对照,经G418筛选抗性克隆,扩大培养后,再用免疫组化和Western-blot分析VEGF-C基因及蛋白的表达,最后用MTT法分析其对细胞生长的抑制作用。结果:免疫组化和Western-blot均显示pCI-neo-anti VEGF-C转染组无VEGF-C mRNA及其蛋白的表达,MTT检测表明pCI-neo-anti VEGF-C转染组活细胞数较其它各组均低(P<0.05)。结论:pCI-neo-anti VEGF-C成功转染人胃癌细胞SGC-7901且可封闭VEGF-C mRNA,使已转染pCI-neo-anti VEGF-C的人胃癌细胞VEGF-C蛋白的表达减少,并能抑制胃癌细胞SGC-7901的体外生长,为进一步研究VEGF-C的生物学功能及胃癌的基因治疗研究创造了条件。

不同基因转染对骨髓基质干细胞成骨活性的影响

为了优化骨组织工程种子细胞,探讨不同基因对骨髓基质干细胞(M SC s)成骨活性的影响,我们首先利用RT-PCR方法获得了全长BM P-2,VEGF 165及bFGF基因,克隆入真核表达载体pcDNA 3.0,鉴定正确后,经脂质体介导转入分离培养的大鼠骨髓基质干细胞,G 418筛选出稳定表达株。并利用RT-PCR、免疫组织化学方法证明目的基因能够在骨髓基质干细胞中得到稳定表达。M TT实验结果显示转基因后的M SC s增殖能力有不同程度的提高。细胞内碱性磷酸酶活性明显上调,BM P-2、bFGF转染组骨钙素水平升高,成骨活性增强。提示:BM P-2、bFGF基因修饰的骨髓基质干细胞作为种子细胞能够更为有效地在骨组织工程中发挥作用。