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人血管内皮生长因子受体KDR胞外3区的表达与配体结合活性的鉴定
被引量:
1
1
作者
张娟
张艳丽
+3 位作者
李海鑫
陈卫
张弢
王旻
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第11期1962-1967,共6页
血管内皮生长因子受体(VEGFR)是血管内皮生长因子的特异性受体,VEGFR-2在介导VEGF刺激内皮细胞增殖及血管通透性等生物学活性中起重要作用。在大肠杆菌中实现可溶性的人血管内皮生长因子受体KDR胞外3区的表达,并鉴定其与配体结合的活性...
血管内皮生长因子受体(VEGFR)是血管内皮生长因子的特异性受体,VEGFR-2在介导VEGF刺激内皮细胞增殖及血管通透性等生物学活性中起重要作用。在大肠杆菌中实现可溶性的人血管内皮生长因子受体KDR胞外3区的表达,并鉴定其与配体结合的活性。采用重叠PCR的方法合成人血管内皮生长因子受体KDR胞外3区基因,将该基因与高效表达载体pET-32a重组,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)中,表达产物依次经过CM阳离子交换树脂和镍柱亲和层析纯化。利用ELISA法和体外抑制VEGF刺激的人脐静脉内皮细胞增殖实验检测表达产物与配体结合的活性。SDS-PAGE显示,目的蛋白主要以可溶性Trx-KDR3融合蛋白表达于胞质,30oC时1 mmol/L IPTG诱导细菌5 h融合蛋白表达量约占胞质可溶性总蛋白的20%,经CM阳离子交换树脂和镍柱亲合层析纯化得到纯度为95%的产物,Western blotting鉴定是目的蛋白。ELISA和体外HUVEC细胞增殖实验显示,表达产物具有特异性结合hVEGF165的活性,且该作用呈一定的浓度依赖性。具有配体特异性结合活性的可溶性人血管内皮生长因子受体KDR胞外3区成功表达,为靶向血管抗肿瘤治疗和相关抗体的研究奠定了基础。
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关键词
血管内皮生长因子
kdr
蛋白表达与纯化
下载PDF
职称材料
血管内皮生长因子D基因的原核表达及纯化
2
作者
耿明伟
张春
+2 位作者
王春雨
曾范丽
王全凯
《经济动物学报》
CAS
2008年第4期245-248,共4页
利用GST融合基因表达系统原核表达血管内皮生长因子D,并进行纯化。诱导重组质粒pGEX-VEGF-D在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,经超声破菌后,采用GST蛋白纯化系统进行纯化,并用3C-Protease酶切去标签GST,所得产物进行15%SDS-PAGE电泳。结果表明...
利用GST融合基因表达系统原核表达血管内皮生长因子D,并进行纯化。诱导重组质粒pGEX-VEGF-D在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,经超声破菌后,采用GST蛋白纯化系统进行纯化,并用3C-Protease酶切去标签GST,所得产物进行15%SDS-PAGE电泳。结果表明:大肠杆菌经诱导,高效表达出分子质量约56 ku的GST-VEGF-D融合蛋白;纯化后的蛋白经酶切后电泳显示只有一条带,纯度相对较高,可基本满足生物学活性测定,为研究VEGF-D蛋白的结构和功能提供了有利的条件。
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关键词
GST-
vegf
-D
融合蛋白
原核表达
纯化
下载PDF
职称材料
题名
人血管内皮生长因子受体KDR胞外3区的表达与配体结合活性的鉴定
被引量:
1
1
作者
张娟
张艳丽
李海鑫
陈卫
张弢
王旻
机构
中国药科大学生命科学与技术学院分子生物学教研室
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第11期1962-1967,共6页
文摘
血管内皮生长因子受体(VEGFR)是血管内皮生长因子的特异性受体,VEGFR-2在介导VEGF刺激内皮细胞增殖及血管通透性等生物学活性中起重要作用。在大肠杆菌中实现可溶性的人血管内皮生长因子受体KDR胞外3区的表达,并鉴定其与配体结合的活性。采用重叠PCR的方法合成人血管内皮生长因子受体KDR胞外3区基因,将该基因与高效表达载体pET-32a重组,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)中,表达产物依次经过CM阳离子交换树脂和镍柱亲和层析纯化。利用ELISA法和体外抑制VEGF刺激的人脐静脉内皮细胞增殖实验检测表达产物与配体结合的活性。SDS-PAGE显示,目的蛋白主要以可溶性Trx-KDR3融合蛋白表达于胞质,30oC时1 mmol/L IPTG诱导细菌5 h融合蛋白表达量约占胞质可溶性总蛋白的20%,经CM阳离子交换树脂和镍柱亲合层析纯化得到纯度为95%的产物,Western blotting鉴定是目的蛋白。ELISA和体外HUVEC细胞增殖实验显示,表达产物具有特异性结合hVEGF165的活性,且该作用呈一定的浓度依赖性。具有配体特异性结合活性的可溶性人血管内皮生长因子受体KDR胞外3区成功表达,为靶向血管抗肿瘤治疗和相关抗体的研究奠定了基础。
关键词
血管内皮生长因子
kdr
蛋白表达与纯化
Keywords
vegf
,
kdr
,
protein expression and purification
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
血管内皮生长因子D基因的原核表达及纯化
2
作者
耿明伟
张春
王春雨
曾范丽
王全凯
机构
吉林农业大学中药材学院
吉林农业大学发展学院
出处
《经济动物学报》
CAS
2008年第4期245-248,共4页
基金
农业部948项目
文摘
利用GST融合基因表达系统原核表达血管内皮生长因子D,并进行纯化。诱导重组质粒pGEX-VEGF-D在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,经超声破菌后,采用GST蛋白纯化系统进行纯化,并用3C-Protease酶切去标签GST,所得产物进行15%SDS-PAGE电泳。结果表明:大肠杆菌经诱导,高效表达出分子质量约56 ku的GST-VEGF-D融合蛋白;纯化后的蛋白经酶切后电泳显示只有一条带,纯度相对较高,可基本满足生物学活性测定,为研究VEGF-D蛋白的结构和功能提供了有利的条件。
关键词
GST-
vegf
-D
融合蛋白
原核表达
纯化
Keywords
GST-
vegf
-D
fusion
protein
prokaryotic
expression
purification
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人血管内皮生长因子受体KDR胞外3区的表达与配体结合活性的鉴定
张娟
张艳丽
李海鑫
陈卫
张弢
王旻
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
1
下载PDF
职称材料
2
血管内皮生长因子D基因的原核表达及纯化
耿明伟
张春
王春雨
曾范丽
王全凯
《经济动物学报》
CAS
2008
0
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职称材料
已选择
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