组蛋白去乙酰化酶8抑制剂PCI-34051抑制哮喘小鼠气道旁血管生成和VEGF/ERK信号通路活性

目的探讨组蛋白去乙酰化酶8(HDAC8)抑制剂PCI-34051对支气管哮喘小鼠气道旁血管生成的治疗作用。方法BALB/C小鼠随机分作正常对照组、单纯哮喘组、地塞米松组和PCI-34051组,每组6只。应用卵白蛋白致敏和激发方法构建哮喘小鼠模型,HE染色观察气道炎症浸润水平,Masson染色观察气道壁周围胶原沉积水平,AB-PAS染色观察气道杯状细胞增生水平。免疫荧光双重染色观察α-SMA/CD31在肺组织中的表达分布,免疫组织化学染色观察VEGF、p-ERK1/2在肺组织中的表达分布,Western blot检测肺组织中VEGF、p-ERK1/2表达水平。结果卵白蛋白所致哮喘组小鼠气道周围可见大量炎症细胞浸润,α-SMA、CD31、VEGF和p-ERK1/2表达上调;地塞米松和PCI-34051处理显著抑制上述变化。结论HDAC8特异性抑制剂PCI-34051能缓解哮喘气道旁新生血管形成,其机制与抑制VEGF/ERK信号通路有关。

ERK-VEGF/MMP-9信号通路对肝癌HepG2细胞不良生物学行为的调控作用

目的:探究ERK-VEGF/MMP-9信号通路对肝癌HepG2细胞不良生物学行为的调控作用。方法:体外培养人肝癌HepG2细胞,54个培养皿分为对照组,阻断组及转染组,各18。对照组不进行干预;阻断组使用特异性ERK-VEGF/MMP-9信号通路抑制剂GDC-0994;转染组转染ERK1质粒。MTT法检测HepG2细胞增殖情况;流式细胞仪检测HepG2细胞周期及凋亡变化;Transwell实验分析HepG2细胞迁移、侵袭情况;Western blot法检测ERK、VEGF以及MMP-9蛋白表达。结果:与对照组相比,阻断组细胞增殖率下降、S期及G_(2)/M期细胞占比增加、细胞凋亡率增加、细胞迁移及侵袭数降低(P<0.05),转染组细胞增殖率上升、S期及G_(2)/M期细胞占比减少、细胞凋亡率下降、细胞迁移及侵袭数增加(P<0.05)。与对照组相比,阻断组ERK、VEGF及MMP-9蛋白表达均下降(P<0.05);转染组ERK、VEGF及MMP-9蛋白表达均上升(P<0.05)。结论:阻断ERK-VEGF/MMP-9信号通路可抑制HepG2细胞增殖、迁移及侵袭,促进其凋亡。

软坚散结胶囊含药血清调控VEGF-ERK信号通路诱导胃癌细胞凋亡机制研究

目的研究VEGF-ERK信号通路在软坚散结胶囊含药血清诱导胃癌SGC7901细胞凋亡过程中的变化,探讨软坚散结胶囊含药血清调控胃癌细胞凋亡的机制。方法制备软坚散结胶囊含药血清;激光共聚焦显微镜观察软坚散结胶囊含药血清处理后胃癌SGC7901细胞形态变化;流式细胞仪检测软坚散结胶囊含药血清处理后胃癌SGC7901细胞凋亡率;Western Blot检测软坚散结胶囊含药血清对人胃癌SGC7901细胞ERK、P-ERK及VEGF蛋白表达影响。结果软坚散结胶囊含药血清处理细胞后,激光共聚焦显微镜下见:阴性对照组以正常活性细胞为主,Annexin V和PI均为低染,细胞膜完整,细胞形态正常;低剂量组可见Annexin V高染、PI低染,细胞膜呈绿色荧光,细胞核着色浅或不着色;中剂量组可见Annexin V高染、PI低染,细胞膜呈绿色荧光,细胞核呈桔红色荧光;高剂量组PI高染,细胞核呈红色荧光,出现部分细胞的细胞膜破裂、细胞核呈大小不等形态不规则的碎片状,为典型的细胞凋亡形态特征。流式细胞仪检测经阴性对照组及低中高剂量组含药血清处理的SGC7901细胞后,各组细胞凋亡率分别为:(6.053±0.223)%、(9.117±1.583)%、(23.663±3.428)%、(37.707±1.328)%,细胞凋亡率随软坚散结胶囊含药血清剂量的增加而升高。Western Blot检测发现SGC7901细胞中VEGF蛋白水平随含药血清剂量的增加而降低(P<0.05);ERK蛋白表达无明显变化(P>0.05),P-ERK(ERK磷酸化)蛋白水平随含药血清剂量增加而降低(P<0.05)。结论软坚散结胶囊含药血清能诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡;其作用机制可能是通过抑制VEGF蛋白表达,调控ERK信号通路,抑制ERK磷酸化(p-ERK)表达进而促进胃癌细胞凋亡。

胃癌中ERK-1、VEGF的表达及相关性分析

目的探讨ERK-1、VEGF两种蛋白在胃癌组织中表达情况并探讨其意义。方法采用组织芯片技术和微波EliVisionTM免疫组织化学法检测60例胃癌组织中ERK-1、VEGF蛋白的表达情况,并与42例正常胃粘膜组织进行比较。结果癌组织中ERK-1、VEGF蛋白表达均定位于细胞浆,阳性率分别为81.67%(49/60例)和80.00%(48/60例),其表达均明显高于正常胃粘膜组织(P<0.05),肿瘤血管内皮细胞也有部分VEGF表达。ERK-1和VEGF蛋白的表达与淋巴结转移、分化程度及病理分期有关(P<0.05),两者之间表达呈正相关(P<0.05)。在胃癌组织中,ERK-1和VEGF蛋白的表达呈正相关性(P<0.05)。结论 ERK-1和VEGF两者在胃癌呈高表达,且在胃癌的发生、发展和转移过程中起到一定的作用。

桂枝茯苓丸对子宫内膜异位症患者血清MAPK、ERK和VEGF水平影响研究

目的探讨桂枝茯苓丸对子宫内膜异位症患者血清丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)水平影响。方法选取收治的子宫内膜异位症患者60例,根据随机对照表分为实验组和对照组,其中对照组30例,予常规醋酸戈舍瑞林缓释植入剂皮下注射;实验组30例,予桂枝茯苓丸口服治疗。治疗结束后,对比各组患者临床疗效、血清MAPK、ERK-5、ERK及VEGF、T-钙黏蛋白(T-cadherin,T-cad)、宫颈上皮钙粘蛋白(vagina epithelial cadherin,VE-cad)水平变化。结果治疗结束后,与对照组比较,实验组患者临床总有效率较高(P<0.05);血清MAPK、ERK-5、ERK水平较低(P<0.05);血清T-cad及VE-cad水平较低(P<0.05);血清VEGF水平较低(P<0.05)。结论桂枝茯苓丸可能通过抑制MAPK及ERK蛋白活性,阻断细胞间信号传导通路,从而抑制子宫内膜异常增殖及细胞分裂周期的进行,进而有效抑制肿瘤的生长与分化。

七氟烷调节ERK-VEGF/MMP-9通路抑制胶质瘤细胞侵袭、迁移的实验研究

目的:探讨七氟烷抑制胶质瘤细胞侵袭、迁移的作用及对细胞外信号调节激酶(ERK)-血管内皮生长因子(VEGF)/基质金属蛋白酶-9(MMP-9)通路的影响。方法:不同气体浓度七氟烷处理人胶质瘤U251细胞24 h,分为空白对照组(0%)、七氟烷低(1.7%)、中(3.4%)、高(5.1%)剂量组和阳性对照组(多柔比星,75 nmol·L^(-1)),采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)、改良Matrigel Boyden室测定法和划痕试验法检测细胞存活率、侵袭能力和迁移能力,采用蛋白免疫印迹(WB)法检测细胞ERK、VEGF和MMP-9蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,七氟烷低、中、高剂量组及阳性对照组人胶质瘤U251细胞存活率、侵袭细胞数、细胞迁移率和ERK、VEGF、MMP-9蛋白表达量均显著降低(P<0.05),且呈剂量依赖性(P<0.05);七氟烷高剂量组和阳性对照组作用相似,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:七氟烷能够抑制人胶质瘤U251细胞的侵袭及迁移能力,其机制可能与降低ERK-VEGF/MMP-9信号通路相关蛋白表达量有关。

VEGF和N-Ras及pERK1/2在急性髓系白血病骨髓中的表达及相关性研究

目的:研究VEGF、NRas和pERK1/2在急性髓系白血病(AML)中的表达及临床意义,探讨白血病发展过程中VEGF的表达与Ras/MAPK信号通路之间的相互关系。方法:应用免疫组织化学染色法检测骨髓单个核细胞VEGF、NRas和pERK1/2蛋白的水平,应用PCR/RFLP、PCRSSCP和DNA测序方法对初诊和完全缓解(CR)AML患者进行Nras基因12位点突变分析。结果:检测AML46例,在初诊组28例AML中,VEGF、Nras和pERK1/2的表达[(52.1±0.31)%、(59.8±0.32)%和(41.9±0.38)%]显著高于20例对照组[(20.5±0.16)%、(20.9±0.12)%和(14.1±0.14)%],P=0.034、P=0.008和P=0.005。CR组18例AML患者中,VEGF、NRas和pERK1/2的表达[(18.6±0.18)%、(28.2±0.27)%和(15.1±0.19)%]与对照组差异无统计学意义,P>0.05、P=0.411和P=0.343。初诊组VEGF、Nras和pERK1/2的表达较CR组显著增高,P=0.029、P=0.018和P=0.008。初诊和CR组中未发现Nras基因12位点突变。VEGF与Nras和pERK1/2表达水平相关性分析结果表明,VEGF的表达与NRas和pERK1/2的表达具有密切相关性(VEGF与NRas:r=0.510,P=0.003;VEGF与pERK1/2:r=0.513,P=0.003;VEGF与pERK1/2:r=0.464,P=0.009)。结论:VEGF和NRas/ERK信号传导通路共同参与了AML的发展过程,NRas/ERK信号传导通路的工作状态与Nras基因突变关系不密切。

基于Ras/Raf-1/ERK信号转导通路调控VEGF的表达探讨活血解毒方对糖尿病大鼠视网膜的影响

目的:观察活血解毒方对糖尿病大鼠视网膜血管形态的影响并探讨其可能的作用机制。方法:一次性腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ,65 mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型,造模后随机分为模型组和活血解毒方组。另设正常对照组。药物干预12周后,应用视网膜消化铺片法观察视网膜血管形态;应用Western blot法检测视网膜VEGF蛋白的表达,应用Real-Time PCR法检测视网膜VEGF、Ras、Raf-1与ERK mRNA的表达。结果:模型组视网膜毛细血管面积密度及内皮细胞/周细胞比例与较正常组升高(P<0.001),VEGF蛋白及VEGF、Ras、ERKmRNA表达升高(P<0.05),Raf-1mRNA表达升高(P>0.05)。与模型组比较,活血解毒方组视网膜毛细血管面积密度和内皮细胞/周细胞比例降低(P<0.01和P<0.001),VEGF蛋白与VEGF、Ras、Raf-1、ERK mRNA表达下降(P<0.05)。结论:活血解毒方能明显抑制视网膜毛细血管和内皮细胞的增生,其机制可能是通过干预Ras/Raf-1/ERK信号转导通路,下调VEGF在视网膜中的表达,抑制血管新生,从而改善DR。

桂枝茯苓丸对子宫内膜异位症患者MAPK、p-ERK和VEGF表达的影响

目的探讨桂枝茯苓丸对子宫内膜异位症（endometriosis,EMT）患者血清丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）、磷酸化细胞外信号调节激酶（phosphorylated extracellular signal-regulated kinase,p-ERK）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响。方法选取2015年3月-2016年5月陕西省康复医院妇产科收治的126例EMT患者,将其随机分为观察组（n=63）和对照组（n=63）,2组均采用常规西药进行治疗,观察组同时服用桂枝茯苓丸,2组均治疗2个月。比较治疗前后2组血清MAPK、p-ERK和VEGF、肿瘤相关抗原125（tumor related antigen 125,CA125）水平及机体激素水平变化。结果治疗结束后,观察组血清MAPK、p-ERK、VEGF、CA125较对照组降低显著（P〈0.05）;观察组患者血清促卵泡激素（follicle stimulating hormone,FSH）、雌二醇（estradiol,E2）、孕酮（progesterone,P）水平较对照组降低明显（P〈0.05）,黄体生成素（luteinizing hormone,LH）水平在2组间差异无统计学意义;观察组盆腔包块直径较治疗前明显降低,且显著低于对照组（P〈0.05）。观察组治疗总有效率96.82%与对照组84.13%差异显著（P〈0.05）。结论桂枝茯苓丸能够抑制MAPK、p-ERK蛋白活性,降低VEGF表达水平,阻断细胞间信号传导通路以及细胞因子与表面受体的结合,从而使细胞分裂和子宫内膜异常增殖得以控制。

桂枝茯苓丸对子宫内膜异位症患者MEK-2、p-ERK和VEGF表达影响

目的:探讨桂枝茯苓丸对子宫内膜异位症患者MEK-2、p-ERK和VEGF表达的影响效果。方法:选取我院妇科收治的子宫内膜异位症患者60例,随机分为两组,其中对照组30例,予常规醋酸戈舍瑞林缓释植入剂10.8 mg,月1次皮下注射,1个月为1疗程,治疗2个疗程。实验组30例,予桂枝茯苓丸,12 g日2次口服,1月为1疗程,治疗2个疗程。正常组30例,选取健康女性,不予任何治疗手段。治疗结束后,对比各组患者MEK-2、ERK-5、p-ERK及VEGF、T-cad、VE-cad水平变化,并通过PCR逆转录聚合酶链反应检测各组MEK-2、p-ERK、VEGF蛋白基因表达水平。试验结束后应用宫腔内窥镜进行组织活检,通过染色方法进行镜下观察。结果:(1)试验后各组MEK-2、ERK-5及p-ERK水平均有不同程度变化,与对照组比较,实验组MEK-2(4.05±0.75)μg/m L、ERK-5(10.81±3.29)μg/m L、p-ERK(0.99±0.17)μg/m L较对照组MEK-2(5.77±10.69)μg/m L、ERK-5(13.34±2.16)μg/m L、p-ERK(1.59±0.47)μg/m L明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)试验后各组VEGF、T-cad及VE-cad水平均有不同程度变化,与对照组比较,实验组VEGF(5.90±1.82)ng/m L、T-cad(0.11±0.01)U/m L、VE-cad(0.19±0.17)U/m L较对照组VEGF(22.77±5.32)ng/m L、T-cad(0.27±0.11)U/m L、VEcad(0.69±0.07)U/m L明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)试验后,实验组与对照组细胞活化及生长因子基因电泳结果均不同程度表达,实验组PCR(301 bp)、MEK-2基因(0.20±0.17)、p-ERK基因(0.13±0.09)、VEGF基因(0.15±0.07)较对照组PCR(521 bp)、MEK-2基因(0.60±0.16)、p-ERK基因(0.62±0.04)、VEGF基因(0.66±4.19)明显改善。结论:桂枝茯苓丸能够明显抑制子宫内膜异位症的细胞增殖与分化,通过抑制MEK及ERK蛋白活性,阻断细胞间信号传导通路,从而抑制子宫内膜异常增殖及细胞分裂周期的进行,并能有效抑制肿瘤的生长与分化,对临床具有指导意义,值得临床推广。

熊果酸对子宫内膜异位症模型大鼠内膜血管生成及ERK-VEGF/MMP-9通路的影响

目的:探讨熊果酸对子宫内膜异位症模型大鼠内膜血管生成及细胞外调节蛋白激酶(ERK)-血管内皮生长因子(VEGF)/基质金属蛋白酶9(MMP-9)通路的影响。方法:建立子宫内膜异位症大鼠模型,随机分为模型组、熊果酸低(100 mg·kg^-1)、中(250 mg·kg^-1)、高(500 mg·kg^-1)剂量组、孕三烯酮(60 mg·kg^-1)组,每组12只,另取12只设为假手术组。造模后以熊果酸及孕三烯酮灌胃治疗,1次/d,持续给药7 d。给药结束24 h后处死大鼠,观察药物对大鼠异位子宫内膜体积生长的抑制作用;采用免疫组织化学染色检测各组大鼠异位子宫内膜组织中CD31表达情况;采用免疫酶联吸附实验(ELISA)检测大鼠血清中VEGF和MMP-9水平;采用实时荧光定量(qRT-PCR)检测大鼠异位子宫内膜组织中VEGF、MMP-9 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠异位子宫内膜组织中ERK、磷酸化ERK(p-ERK)、VEGF、MMP-9蛋白表达水平。结果:与假手术组相比,模型组大鼠CD31阳性细胞表达、血清中VEGF及MMP-9水平、异位子宫内膜组织中VEGF及MMP-9mRNA水平、异位子宫内膜组织中p-ERK/ERK、VEGF及MMP-9蛋白表达均显著升高(P<0.05);与模型组相比,熊果酸组大鼠CD31阳性细胞表达、血清中VEGF及MMP-9水平、异位子宫内膜组织中VEGF及MMP-9 mRNA水平、异位子宫内膜组织中p-ERK/ERK、VEGF及MMP-9蛋白表达均显著降低(P<0.05),异位子宫内膜生长抑制率升高(P<0.05)且熊果酸各剂量组之间呈剂量依赖性;熊果酸高剂量组和孕三烯酮组相比,差异无统计学意义(P>0.05);ERK蛋白表达各组之间无明显变化(P>0.05)。结论:熊果酸可抑制子宫内膜异位症模型大鼠内膜血管生成,可能是通过下调ERK-VEGF/MMP-9通路来实现。

丙泊酚通过MAPK/ERK途径抑制食管癌细胞系EC9706中VEGF的表达

目的探究丙泊酚对食管癌细胞系EC9706中血管内皮生长因子VEGF表达情况的影响及相关分子机制。方法通过蛋白免疫印迹检测人食管癌细胞系EC9706与正常食管上皮细胞系HEEC中VEGF表达情况。分别用不同浓度的丙泊酚(0、2、6、10μg/L)培养EC9706,孵育后,对各组EC9706细胞株行MTT、流式细胞术、细胞侵袭实验、细胞划痕修复试验,观察各组细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力;使用q RT-PCR和蛋白免疫印迹分别检测各组细胞内VEGF、p38(MAPK)和p44/42(ERK1/2)的表达和磷酸化水平。结果 EC9706细胞中VEGF表达显著强于HEEC细胞。丙泊酚干预后,丙泊酚组细胞增殖、迁移和侵袭显著低于Ctrl组;而丙泊酚组细胞凋亡率显著高于Ctrl组。q RT-PCR和蛋白免疫印迹结果显示,丙泊酚组瘤细胞内VEGF m RNA和蛋白表达水平显著降低;丙泊酚抑制p38(MAPK)和p44/42(ERK1/2)的表达和磷酸化水平。上述这些影响都存在剂量依赖性。结论丙泊酚抑制人食管癌细胞系EC9706的增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡。其潜在的机制是通过抑制MAPK/ERK信号通路,进而抑制VEGF的表达。

奥美昔芬对子宫内膜异位症模型大鼠内膜血管生成及ERK-VEGF/MMP-9通路的影响

目的观察奥美昔芬对子宫内膜异位症模型大鼠内膜血管生成及ERK-VEGF/MMP-9通路的影响。方法构建子宫内膜异位症模型(EM)大鼠,将其随机分为模型组、奥美昔芬组,通过皮下注射等量的0.9%生理盐水、奥美昔芬100 mg/(kg·d),连续注射42 d,测量术后14 d和48 d各组大鼠异位病灶体积,光镜下观察各组大鼠异位内膜组织形态变化,Western blot法检测大鼠子宫内膜促血管生成素1(Ang-1)、促血管生成素2(Ang-2)、细胞外信号调节激酶(ERK)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白水平情况。结果术后14 d,与空白组相比,模型组、奥美昔芬组大鼠体内异位病灶体积显著升高(P<0.05),在术后48 d,与空白组相比,模型组、奥美昔芬组异位病灶体积显著升高(P<0.05),异位膜上皮细胞、血管增多,与模型组相比,奥美昔芬组异位病灶体积显著降低(P<0.05),异位膜上皮细胞萎缩、血管减少,大鼠体内Ang-1、Ang-2、ERK、VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论奥美昔芬可能通过调控ERK-VEGF/MMP-9,降低Ang-1、Ang-2蛋白表达,抑制内膜血管生成。

滋肾活血方联合低分子肝素改善小鼠复发性流产及对VEGF/VEGFR-2/p-ERK/ERK信号通路的影响

目的观察滋肾活血法联合低分子肝素对复发性流产小鼠流产率及蜕膜中血管内皮生长因子/血管内皮生长因子受体2/磷酸化的细胞外调节蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(VEGF/VEGFR-2/p-ERK/ERK)信号通路的影响。方法68只未孕CBA/J雌鼠,26只DBA/2雄鼠,8只BALB/c雄鼠,按雌∶雄=2∶1,建立CBA/J×DBA/2习惯性流产模型小鼠50只,随机数字法分为模型组(蒸馏水)、LMWH组(1000U/kg)、滋肾活血方低剂量(3.9g/kg)+LMWH(1000U/kg)组、滋肾活血方中剂量(11.7g/kg)+LMWH(1000U/kg)组、滋肾活血方高剂量(35.1g/kg)+LMWH(1000U/kg)组,每组10只;建立CBA/J×BALB/c正常妊娠模型小鼠10只作为正常对照组(蒸馏水)。按照人鼠体表面积换算每日滋肾活血方灌胃药量和LMWH注射量,给药干预2周。计算各组小鼠胚胎丢失率;免疫组化法测定小鼠蜕膜中VEGF蛋白的表达;蛋白质印迹法(Western blot)测定小鼠蜕膜中VEGF、VEGFR-2、p-ERK、ERK表达。结果与正常对照组比较,模型组胚胎丢失率上升(38.38%比7.29%,P<0.05),免疫组化VEGF蛋白平均光密度值降低[(0.22±0.07)比(0.23±0.01),P<0.01],Western blot结果显示,VEGF、VEGFR-2蛋白表达下降[VEGF:(2.01±0.08)比(2.90±0.06);VEGFR-2:(2.62±0.01)比(3.15±0.08),P均<0.05]。与模型组比较,LMWH组、滋肾活血方低剂量+LMWH组、滋肾活血方中剂量+LMWH组和滋肾活血方高剂量+LMWH组胚胎丢失率下降(23.76%、16.83%、12.75%、10.10%比38.38%,P均<0.05),免疫组化结果显示,上述四组VEGF蛋白平均光密度值上升[(0.24±0.04)、(0.29±0.02)、(0.32±0.06)、(0.33±0.10)比(0.22±0.07),P均<0.05],Western blot结果显示,上述四组的VEGF、VEGFR-2、p-ERK、ERK蛋白表达上升[VEGF:(3.13±0.09)、(2.93±0.73)、(3.31±0.18)、(3.38±0.15)比(2.01±0.08);VEGFR-2:(3.19±0.03)、(3.53±0.10)、(3.77±0.12)、(3.83±0.09)比(2.62±0.01);p-ERK:(1.57±0.35)、(1.79±0.06)、(1.73±0.07)、(1.75±0.06)比(1.39±0.04);ERK:(3.82±0.08)、(4.22±0.09)、(4.24±0.04)、(4.19±0.27)比(3.42±0.14),P均<0.05]。与LMWH组比较,滋肾活血方低剂量+LMWH组胚胎丢失率无明显差异(P>0.05),滋肾活血方中剂量+LMWH组、滋肾活血方高剂量+LMWH组胚胎丢失率降低更显著(P均<0.05);免疫组化结果显示,VEGF蛋白平均光密度值在滋肾活血方低剂量+LMWH组、滋肾活血方中剂量+LMWH组、滋肾活血方高剂量+LMWH组上升(P均<0.05);Western blot结果显示,上述三组VEGFR-2、p-ERK、ERK蛋白表达上升(P均<0.05),VEGF蛋白表达无明显差异(P>0.05)。结论滋肾活血法联合LMWH能够改善复发性流产小鼠妊娠结局,其机制可能与激活VEGF/VEGFR-2/p-ERK/ERK信号通路有关。

滋肾活血方联合低分子肝素对血管内皮细胞VEGF、VEGFR-2、ERK和血管生成的影响

目的探究滋肾活血方联合低分子肝素(LMWH)对人血管内皮细胞的血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)表达及血管生成的影响,探讨其治疗复发性流产的可能作用机制。方法2020年1—12月期间购置人血管内皮细胞试验样本。制备滋肾活血方含药血清和正常血清,分为3组:对照组、LMWH组、滋肾活血方+LMWH组。其对应的处理方式分别为:正常血清、正常血清+LMWH、含药血清+LMWH分别孵育人血管内皮细胞48 h后,应用蛋白质印迹法(western blot)检测各组细胞VEGF、VEGFR-2、ERK蛋白表达量变化,实时荧光定量PCR检测VEGF、VEGFR-2、ERK基因的mRNA转录水平,应用成管实验检测各组细胞的成管能力变化。结果与对照组比较,LMWH组VEGF、VEGFR-2、ERK蛋白的表达水平显著升高(P<0.05),血管生成数和长度均显著升高(P<0.05),VEGF mRNA表达水平显著上调(P<0.05),VEGFR-2、ERK mRNA表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,滋肾活血方+LMWH组VEGF、VEGFR-2、ERK mRNA及其蛋白的表达水平显著上调(P<0.05),血管生成数和长度均显著升高(P<0.05);滋肾活血方+LMWH组较LMWH组VEGF、VEGFR-2、ERK蛋白其表达水平升高(P<0.05),血管生成数和长度均增加(P<0.05),VEGF、VEGFR-2、ERK mRNA表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论滋肾活血方联合LMWH可促进血管生成改善复发性流产患者妊娠结局,其机制可能与调节VEGF、VEGFR-2、ERK表达,促进血管内皮细胞生长有关。

普萘洛尔对HUVEC-12细胞VGEF/ERK胞内信号转导影响

目的:通过血管内皮生长因子/细胞外信号调节激酶(VEGF/ERK)的胞内信号转导途径研究普萘洛尔治疗血管瘤的疗效机制。方法:以离体培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC-12)为模型,观察普萘洛尔对体外培养内皮细胞磷酸化ERK影响。摸索合适的重组人VEGF浓度,建立HUVEC-12细胞VEGF阳性系统,在其基础上采用四甲基偶氮唑蓝法测定普萘洛尔对VEGF阳性系统HUVEC-12细胞的细胞毒作用及蛋白质免疫印迹法测ERK变化。结果:普萘洛尔对体外培养内皮细胞磷酸化ERK影响差异无统计学意义。VEGF在20μg/L时HUVEC-12细胞磷酸化ERK表达最强,以该浓度建立HUVEC-12细胞VEGF阳性系统。与空白对照组相比,普萘洛尔对VEGF阳性系统的HUVEC-12细胞细胞毒作用差异无统计学意义(P>0.05);在普萘洛尔浓度为8～16 mg/L时磷酸化ERK表达受到抑制。结论:普萘洛尔治疗血管瘤的机制可能为通过抑制VEGF诱导的内皮细胞的胞内ERK信号转导,从而促进血管瘤的消退。

越婢汤调控肾脏毛细血管通透性对阿霉素肾病大鼠水肿的干预作用

目的观察越婢汤对阿霉素肾病大鼠肾脏毛细血管通透性的影响,阐明其干预肾病综合征大鼠水肿的作用机制。方法采用尾静脉注射阿霉素建立大鼠肾病综合征模型。大鼠随机分为正常组、模型组及越婢汤低、中、高剂量组(6.6、11.1、22.2 g/kg),灌胃给予相应药物14 d。给药结束后,检测肾脏毛细血管通透性、肾脏及皮肤干湿重比例,观察肾脏病理学变化,检测血清Scr、BUN、TC、ALB及尿液24 h UTP水平,ELISA法检测肾组织VEGF水平,免疫组化法检测肾组织VEGF、VEGFA、VEGFR2阳性表达,Western blot法检测肾组织VEGF、VEGFA、VEGFR2、p-ERK1/2、ERK1/2和Rap1蛋白表达。结果与模型组比较,越婢汤高剂量组大鼠肾脏及皮肤干湿重比例升高(P<0.05,P<0.01),VEGF和VEGFA蛋白表达降低(P<0.01);中、高剂量组大鼠肾脏毛细血管通透性,血清Scr、BUN、TC水平,尿液24 h UTP水平,肾组织VEGF水平和VEGFR2蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),ALB水平升高(P<0.01),肾组织病理学改善;越婢汤各剂量组大鼠肾组织p-ERK1/2/ERK1/2蛋白表达比值降低(P<0.01),Rap1蛋白表达升高(P<0.01)。结论越婢汤可以减轻阿霉素肾病大鼠皮肤和肾脏水肿,其作用机制和调控VEGF/ERK信号通路,改善肾脏毛细血管通透性有关。

马来酸噻吗洛尔治疗血管瘤的作用机制探讨

目的探究治疗β-受体阻滞剂治疗血管瘤的作用机制。方法取临床上获取的血管瘤组织和瘤旁组织,进行Western blotting实验,检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达。收集血管瘤组织,使用胶原酶消化制备肿瘤细胞悬浮液并体外培养得到瘤细胞,在此基础上分别使用不同浓度的马来酸噻吗洛尔(0、2、4 nM)进行处理,观察细胞计数,结合定量PCR,比较血管瘤组织与瘤旁组织CDC42、MAPK、PI3K基因表达情况。结果与瘤旁组织相比,血管瘤组织VEGFR蛋白表达增加。培养的瘤细胞添加马来酸噻吗洛尔后瘤体细胞生长受到抑制,且VEGF信号通路中相关基因如CDC42、MAPK、PI3K的表达均出现了下调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论马来酸噻吗洛尔可通过抑制VEGF信号相关基因表达,从而可能参与了血管瘤细胞生长的过程。

乐伐替尼联合顺铂治疗进展期原发性肝癌患者的疗效及对免疫功能的影响

目的:探讨乐伐替尼联合顺铂调控VEGF/PI3K/ERK信号通路治疗进展期原发性肝癌的疗效及其对患者免疫功能的影响。方法:选取2017年1月至2019年12月本院收治的100例进展期原发性肝癌患者,分为观察组(乐伐替尼联合顺铂治疗)和对照组(多西他赛联合顺铂治疗),每组50例。评价两组患者的临床疗效、毒性反应和安全性,并对患者的生存质量进行评价。观察患者T淋巴细胞亚群变化;采用Westernblot法检测患者血清中的VEGF、PI3K、AKT、ERK、P53、BCL-2和Caspase 3蛋白相对表达量。结果:观察组患者的总有效率为68.00%、疾病控制率为86.00%,显著高于对照组的40%和36%,差异有显著性意义(P<0.05);两组患者治疗后CD_(3)^(+)、CD_(4)^(+)、CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)表达比治疗前显著上升,而CD_(8)^(+)表达水平比治疗前则显著下降(P<0.05),且观察组患者各项指标改善优于对照组(P<0.05);治疗后观察组患者VEGF、ERK和BCL-2蛋白含量显著降低,PI3K、AKT、P53和Caspase 3蛋白表达显著升高,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.05)。结论:乐伐替尼联合顺铂治疗进展期原发性肝癌,临床疗效佳,并能提高患者T淋巴细胞数量,改善患者免疫功能。其机制是通过调控VEGF/PI13K/ERK信号通路达到治疗目的。

乌丹丸对寒凝血瘀型EMS模型大鼠内膜血管生成及细胞外调节蛋白激酶-血管内皮生长因子/基质金属蛋白酶9通路的影响

目的探索乌丹丸对寒凝血瘀型子宫内膜异位症(Endometriosis,EMS)大鼠内膜组织中微血管密度(Platelet endothelial cell adhesion molecule-1,CD31),细胞外调节蛋白激酶(Extracellular regulated protein kinases,ERK)-血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)/基质金属蛋白酶9(Matrix metalloprotein-9,MMP-9)通路的影响。方法选取有规律动情周期的雌性SD大鼠,随机将49只大鼠分为假手术组、模型组、乌丹丸高、中、低剂量组(2.4、1.2、0.6 g/kg)、散结镇痛组(0.48 g/kg)和地诺孕素组0.2 mg/kg,每组各7只,冰水浴联合自体子宫内膜移植法建立寒凝血瘀型EMS,连续给药4周后处死取材。免疫组织化学染色检测大鼠异位内膜CD31阳性细胞表达,以免疫酶联吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测大鼠血清VEGF、MMP-9水平;以蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)检测大鼠异位子宫内膜组织ERK-VEGF/MMP-9通路相关蛋白表达。结果(1)与假手术组比较,模型组CD31阳性率,血清中VEGF、MMP-9水平,异位内膜组织ERK、VEGF、MMP-9蛋白表达均明显升高(P<0.05);(2)与模型组比较,乌丹丸各剂量组、散结镇痛组、地诺孕素组异位内膜CD31阳性率,血清中VEGF、MMP-9水平,异位内膜ERK1/2、VEGF、MMP-9蛋白表达均明显降低,且地诺孕素组<乌丹丸高剂量组<乌丹丸中剂量组<散结镇痛组<低剂量组(P<0.01,P<0.05)。结论乌丹丸可抑制寒凝血瘀型子宫内膜异位症模型大鼠内膜血管生成,可能是通过下调ERK-VEGF/MMP-9通路来实现。