人参皂苷Rg_3对人肺鳞癌细胞VEGF及KDR表达的影响

目的:探讨人参皂苷Rg3在抑制肿瘤新生血管生成过程中的作用,及其对人肺鳞癌SK-MES-1分泌的血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体KDR的影响。方法:体外培养人肺鳞癌SK-MES-1细胞,经不同浓度的Rg3处理后,采用免疫细胞化学法与RT-PCR法检测Rg3对SK-MES-1细胞株VEGF mRNA、KDR mRNA及其蛋白表达的影响。结果:免疫细胞化学结果显示人参皂苷Rg3各浓度组SK-MES-1细胞VEGF及KDR蛋白阳性率与对照组比较差异显著。RT-PCR结果显示随着Rg3浓度的增加,VEGF、KDR扩增条带逐渐减弱,各浓度组与对照组比较差异显著。结论:人参皂苷Rg3能够抑制人肺鳞癌SK-MES-1细胞VEGF mRNA与KDR mRNA及其蛋白水平的表达,这可能是Rg3抑制肿瘤新生血管形成的机制之一。

益气化瘀解毒方对人肝癌裸鼠HepG2移植瘤MVD、HIF1a、VEGF/KDR表达的影响

目的:观察益气化瘀解毒方对人肝癌裸鼠HepG2移植瘤MVD、HIF1a、VEGF/KDR表达的影响。方法:建立人肝癌移植瘤模型,分为7组,分别以益气化瘀解毒方、黄芪、莪术、重楼、壁虎、顺铂药物干预21 d后,取瘤组织行免疫组化检测。结果:①对MVD的影响:全方组与除顺铂外的其它组比较有统计学意义(P<0.05);除黄芪、莪术外的其它组与空白组比较有统计学意义(P<0.05)。②对HIF1a的影响:全方组与除黄芪外的其它组比较有统计学意义(P<0.05);各组与空白组比较有统计学意义(P<0.05)。③对VEGF表达的影响:全方组与除顺铂外的其它组比较均有统计学意义(P<0.05);莪术组与空白组比较无统计学意义(P>0.05)。④对KDR表达的影响:全方组与其它各组比较均有统计学意义(P<0.05);黄芪组与空白组比较无统计学意义(P>0.05)。结论:益气化瘀解毒方能明显抑制人肝癌裸鼠移植瘤MVD、HIF1a、VEGF和KDR的表达而发挥抗血管生成作用;各单味药对其作用各有侧重,但作为整方的有机组成从不同环节发挥了协同作用。

大肠癌中C-Met VEGF及其受体KDR的表达与预后的相关性

目的:探讨C-Met、CEGF及其受体KDR在大肠癌组织中的表达与预后的关系,为判断大肠癌患者预后提供参考。方法:应用免疫组织化学法检测60例大肠癌标本中C-Met、VEGF及其受体KDR的表达情况。随访统计5年生存率。结果:C-Met、VEGF及其受体KDR在大肠癌组织中的表达阳性率分别为43.3%、61.7%及68.3%;三者在大肠癌组织中的表达与患者的年龄及性别无明显相关(P>0.05),与肿瘤侵袭深度、是否淋巴结转移及Dukes分期密切相关(P均<0.05)。C-Met、VEGF及KDR阳性者5年生存率分别为423%、43.2%及51.2%,阴性者5年生存率分别为73.5%、87.0%及78.9%,两组差异有统计学意义(P<0.05)Cox回归生存分析显示:对于大肠癌患者,VEGF、KDR及C-Met均是独立危险因素;联合检测VEGF、KDR及C-Met,是预测大肠癌预后很好的指标。结论:C-Met、VEGF及其受体KDR在大肠癌患者组织中的表达与大肠癌的发生、发展有关,三者均阳性表达提示患者预后差,可作为评价预后的指标。

桃红四物汤Ⅱ号抑制小鼠B16黑色素瘤生长及VEGF,KDR/FLK-1表达

目的:观察桃红四物汤Ⅱ号对小鼠B16黑色素瘤生长、血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮生长因子受体-2(KDR/FLK-1)表达及肿瘤微血管密度(MVD)值的影响。方法:采用C57BL/6J小鼠皮下接种B16黑色素瘤细胞建立模型,分别给予2.5,5,10 g.kg-1桃红四物汤Ⅱ号水煎剂、环磷酰胺0.05 g.kg-1及联合用药桃红四物汤Ⅱ号10 g.kg-1+环磷酰胺0.025 mg.kg-1,检测各组肿瘤体积、重量、VEGF和KDR/FLK-1表达及肿瘤MVD值。结果:桃红四物汤Ⅱ号5,10 g.kg-1及联合用药组肿瘤体积、重量、VEGF和KDR/FLK-1表达及肿瘤MVD值均较生理盐水组明显降低(P<0.01)。结论:桃红四物汤Ⅱ号能抑制小鼠B16黑色素瘤的生长,其抗肿瘤机制可能与抗血管生成作用有关。

VEGF、VEGFR_2(KDR)、MMP-1以及转录调节因子Ets-1在子宫颈癌组织中的表达及其意义

目的从分子水平观察肿瘤血管生成因子VEGF、VEGF受体KDR、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)及其转录调节因子Ets-1(E26transformation-specific-1,Ets-1)在子宫颈癌中的表达并揭示其因子间相互关系,为判断患者预后和解释促血管生成因子间内在规律提供根据。方法利用原位杂交和免疫组织化学染色法检测87例子宫颈癌组织中VEGF、KDR、MMP-1以及Ets-1等因子mRNA和蛋白表达规律;患者生存曲线比较在阴性组和阳性组间进行;因子间分析利用Pearson相关分析法。结果VEGFmRNA和蛋白主要分布在癌细胞胞质中,阳性率分别为78.6%(68/87)和70.4%(61/87);KDRmRNA和蛋白主要在内皮细胞上表达,其表达率与VEGF表达率间存在密切的相关关系,r=0.892;MMP-1在肿瘤细胞和间质血管内皮细胞中表达,尤其在血管新生处表达明显;Ets-1主要分布在内皮细胞和肿瘤细胞中,其表达率与KDR和MMP-1表达率间的相关系数(r)分别为0.900和0.873;上述四因子表达与肿瘤分化度、淋巴结转移及5年存活率均有密切的相关性。结论VEGF、KDR、MMP-1以及Ets-1是参与子宫颈癌血管生成的重要因子,且彼此间存在密切的相关性,检测其表达规律可为判断子宫颈癌生物学行为和解释促血管生成因子间内在联系提供理论根据。

抗人VEGF受体KDR胞外区域3血清的制备及生物活性

目的:制备抗人VEGF受体KDR胞外区域3(KDR3)的血清,研究其阻断VEGF受体的作用。方法:采用6周龄雌性BALB/C小鼠将纯化的人VEGF受体II基因3区蛋白质与完全佐剂和不完全佐剂制成抗原乳剂,分3次注射,前2次为腹腔注射,第3次为静脉注射,待第3次静脉注射后7天摘眼球取血,静置凝固后取上层血清测抗血清的效价,用血管内皮细胞ECV3042×104/ml铺24孔板,加入VEGF的同时加入抗KDR中和抗体IMC-ICI和KDR3抗血清,从次日开始测定。结果:用Studentt-tes统计学方法处理显示,PBS对照组与非相关性血清组P>0.05,抗KDR中和抗体IMC-ICI组与KDR3抗血清组P>0.05,而VEGF组与非相关性血清组和KDR3抗血清组P<0.05。结论:VEGF对ECV304细胞有促增殖作用,而抗KDR中和抗体IMC-ICI和KDR3抗血清对ECV304细胞都表现出了对外源性VEGF有明显抑制作用,同时对内源性VEGF也有明显抑制作用。

VEGF受体KDR胞外区基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达

VEGF(血管内皮细胞生长因子 ,VascularEndothelialGrowthFactor)是刺激内皮细胞增殖和新生血管形成的最重要因子 ,与多种实体瘤的生长和转移密切相关。应用其可溶性受体阻断它的病理作用是一个非常有前景的课题。将VEGF受体KDR胞外区前三个Loop 96 9碱基对的cDNA片段克隆到杆状病毒表达载体pFastBacI,与杆状病毒表达载体Bacmid同源重组后 ,转染昆虫细胞SF 9,获得重组杆状病毒并证明了目的基因的高效表达。经Westernblot证实表达产物的特异性。经ELISA和体外生物学活性检测表明表达产物可阻断VEGF的生物学活性 ,抑制鸡胚CAM血管的生长。

早期糖尿病大鼠模型玻璃体VEGF及其受体sFlt-1、KDR的研究

目的观察早期糖尿病大鼠玻璃体血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血管内皮生长因子可溶性fm样酪氨酸激酶受体1(soluble fms-like tyrosine kianse-1,sFlt-1)及VEGF受体2(kinase insert domain-containing receptor,KDR)的变化,探讨各生长因子浓度变化与早期糖尿病视网膜病变的关系。方法 40只成年雄性SD大鼠随机分为两组。模型组30只,使用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射法诱发糖尿病,对照组10只腹腔注射生理盐水。72h后使用德国拜安易(拜耳集团)血糖仪检测血糖,血糖≥16.67mmol·L-1为造模成功,血糖未达标者再次注射STZ造模。造模当天及建模后1周、2周、4周连续测量大鼠测血糖;造模当天及建模后1周、4周测体质量;4周时取大鼠玻璃体,ELISA检测VEGF、sFlt-1、KDR的含量,多聚甲醛固定眼球并石蜡包埋行HE染色。结果 STZ腹腔注射糖尿病大鼠成模率100%,1个月后死亡率为30%。模型组存活21只,对照组10只。1周、2周、4周时模型组与对照组血糖浓度差异均有统计学意义(均为P<0.05),前者均低于后者;1周时两组体质量差异无统计学意义(P=0.279),4周时模型组体质量(240.00±27.43)g与对照组(318.50±41.37)g差异有统计学意义(P=0.000)。视网膜HE染色显示模型组较对照组细胞肿胀,组织排列紊乱。ELISA检测模型组、对照组VEGF含量分别为(0.2690±0.2205)ng·mL-1、(0.2499±0.0206)ng·mL-1;sFlt-1含量分别为(5.9020±0.6133)ng·mL-1、(6.1742±0.4912)ng·mL-1;KDR含量分别为(2.7783±0.2924)ng·mL-1、(2.5024±0.3326)ng·mL-1。模型组大鼠玻璃体VEGF与KDR均较对照组升高,两组差异均具有统计学意义(P=0.036、0.033)。模型组sFlt-1含量较对照组降低,但差异无统计学意义(P=0.244)。结论大鼠早期糖尿病模型玻璃体中VEGF和KDR之间的浓度变化,与糖尿病所致早期视网膜病变有关。

抗VEGF抗体及抗KDR抗体对人胃癌生长的抑制作用

目的:观察抗VEGF及抗KDR抗体对胃癌生长和转移的抑制作用。方法:1)将不同浓度的抗VEGF及抗KDR抗体分别加入胃癌BGC-823细胞,培养5天后测细胞活性(MTT法)。2)采用原位种植裸鼠模型,观察抗VEGF抗体及抗KDR抗体的作用。实验分为4组:对照组,抗VEGF组,抗KDR组及抗VEGF+抗KDR组。自肿瘤种植后第7天起,经腹腔注射连续给药8周,每周2次,第10周末处死裸鼠,测定肿瘤重量和肝转移状况,计数微血管密度。结果:1)抗VEGF抗体和抗KDR抗体浓度由高至低对BGC-823细胞生长的抑制作用减弱。2)抗VEGF抗体和抗KDR抗体对原位肿瘤生长有明显抑制作用,两者合用时作用更明显;对照组肝转移率80.0%,而抗VEGF组、抗KDR组和二者合用组分别为16.7%、25.0%、0,与对照组相比其它3组的微血管密度(MVD)明显为低。结论:通过中和VEGF抗体和封闭KDR受体抑制血管形成,可能为胃癌的治疗提供一个新的途径。

VEGF mRNA、KDR mRNA及蛋白在非小细胞肺癌中表达的意义探讨

目的探讨非小细胞肺癌中血管内皮生长因子(VEGF)、受体KDRmRNA和蛋白表达的意义。方法应用原位杂交技术及免疫组织化学PV-9000法分别检测30例新鲜非小细胞肺癌标本中VEGFmRNA、KDRmRNA及蛋白的表达。结果VEGF、KDRmRNA和蛋白均主要分布在肺癌细胞、血管内皮细胞及纤维母细胞,肺癌细胞VEGFmRNA和蛋白的阳性率分别为66.67%(20/30)和60.00%(18/30),两者的表达有极显著正相关性(r=0.86,P<0.01);KDRmRNA和蛋白的阳性率分别为73.33%(22/30)和76.67%(23/30),两者的表达亦有极显著正相关性(r=0.7366,P<0.01);VEGFmRNA、KDRmRNA及相应蛋白在肺癌细胞中的表达均呈极显著性正相关(原位杂交r=0.853,免疫组化r=0.5148,均P<0.01);肺癌细胞VEGFmRNA、KDRmRNA及相应蛋白的阳性表达率在不同大小的3组肺癌标本间,差异均具有显著性(确切P=0.014,P=0.002;P=0.0087,P=0.0016);淋巴结有转移组的VEGFmRNA、KDRmRNA及相应蛋白在肿瘤细胞中的阳性表达率显著高于淋巴结无转移组者(确切P=0.007,P=0.003;P=0.0008,P=0.0073)。结论肺癌细胞产生的VEGF通过自分泌环作用于癌细胞上的KDR受体促进癌细胞生长;VEGF及KDR的检测可作为肺癌淋巴结转移的有效评估指标;VEGF及KDR有望成为肺癌治疗的新靶点。

芪竹方对MGC-803细胞VEGFKDR表达影响的研究

目的:了解芪竹方对MGC803细胞血管内皮生长因子VEGF及其受体KDR表达的影响。方法:分成芪竹方高、低浓度、DMSO对照、空白对照4组处理MGC803细胞,运用RT-PCR、免疫荧光法研究VEGF、KDR的表达量。结果:芪竹方高、低浓度、DMSO对照、空白对照4组VEGFmRNA表达量光密度积分分别是:(6.7±2.12)、(9.98±3.27)、(18.99±7.73)、(20.55±4.85),芪竹方高浓度与空白对照组间差别具有显著性;KDRmRNA分别是(49.66±9.76)、(38.22±3.54)、(47.5±5.87)、(45.18±7.25),各组间无显著性差别;VEGF蛋白表达量荧光度值分别是:(24.6±5.5)、(29.4±4.8)、(43.2±7.4)、(40.4±3.2),芪竹方高浓度与空白对照组间差别具有显著性;KDR蛋白表达量荧光度值分别是:(32.2±8.6)、(35.4±8.3)、(37.4±11.3)、(27.4±4.7),各组间无显著性差别。结论:芪竹方对MGC803细胞VEGF表达具有下调作用,对KDR表达无明显影响。芪竹方抑制胃癌的作用可能与抑制VEGF表达有关。

脑膜瘤组织VEGF/VPF、KDR的表达及意义

目的 研究脑膜瘤血管生成及瘤周脑水肿与VEGF/VPF及其受体KDR的关系。方法 采用Northern印迹分子杂交和免疫组化技术检测47例脑膜瘤组织VEGF/VPF mRNA、VEGF/VPF和KDR蛋白表达,分析其与微血管密度(MVD)和瘤周脑水肿度(DPTBE)的关系。结果 47例脑膜瘤均表达4.2Kb的VEGF/VPF mRNA片段,VEGF/VPF蛋白表达与其mRNA的表达一致,80.9％的肿瘤KDR蛋白表达阳性,VEGF/VPF和KDR分别定位于脑膜瘤瘤细胞和血管内皮细胞胞浆。VEGF/VPFmRNA表达与脑膜瘤MVD和DPTBE呈正相关(r=0.67,P<0.01;r=0.54,P<0.01);KDR阳性组脑膜瘤VEGF/VPF mRNA表达水平、MVD、DPTBE均显著高于KDR阴性组(P<0.01)。结论 脑膜瘤细胞可产生VEGF/VPF,通过KDR介导促肿瘤血管生成和增加血管通透性,在脑膜瘤瘤周脑水肿的发生发展过程中起重要作用。

婴幼儿血管瘤组织中VEGF、VEGFR/KDR及PCNA表达

目的 婴幼儿血管瘤的发病机制尚不清楚 ,目前已知血管内皮细胞生长因子 (VEGF)与血管内皮细胞增殖有密切关系。本文探讨VEGF在血管瘤发生发展中的作用。方法 采用免疫组织化学方法 ,对临床收集的 90例手术切除的新鲜血管病变标本 (血管瘤 5 6例 ,血管畸形 34例 ,其中增生期血管瘤 32例 ,消退期血管瘤 2 4例 ) ,进行VEGF及其受体 (VEGFR/KDR)和增殖细胞核抗原 (PCNA)表达水平的检测。结果 VEGF ,VEGFR和PCNA表达水平在增生期血管瘤明显升高 ,与消退期血管瘤、血管畸形和正常皮肤比较差异有显著性 (P <0 .0 1 )。而消退期血管瘤、正常皮肤及血管畸形的VEGF ,VEGFR和PCNA表达差异无显著性 (P >0 .0 1 )。结论 VEGF和VEGFR可能促进血管瘤的生长 ,增生期血管瘤血管内皮细胞增生活跃。VEGF ,VEGFR和PCNA的检测有利于临床鉴别诊断血管瘤及血管畸形 ,并对血管瘤进行分期。

VEGF及KDR在骨肉瘤中的表达及其临床意义

目的:探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)与血管内皮细胞生长因子受体(KDR)结合,在骨肿瘤中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化染色方法检测105例骨肿瘤组织的VEGF与KDR的表达,并对其中85例骨肉瘤主要临床资料、病理分级及临床相关参数进行比较,用χ2检验进行统计学处理。结果:骨肉瘤中VEGF与KDR阳性表达率明显高于骨软骨瘤阳性表达率(P<0.0001)。VEGF与KDR阳性表达率在骨肉瘤临床分期中Ⅱb期、Ⅲ期明显高于Ⅰ期、Ⅱa期(P<0.001),并随着病理分级恶性程度增高而显著增加(P<0.01)。且在软组织浸润和转移组中VEGF与KDR阳性表达率明显高于非浸润和非转移组(P<0.005)。结论:VEGF与KDR在骨肉瘤中不同程度异常表达与肿瘤的临床分期、病理分级和浸润、转移呈正相关,提示VEGF与KDR的高表达可能与骨肉瘤的发生发展有关,尤其与骨肉瘤的浸润转移密切相关。

VEGF、COX-2和p-KDR在血管瘤中的表达

目的:探讨血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、环氧化酶-2(COX-2)和p-KDR在血管瘤中的表达及作用。方法:采用免疫组织化学SP法、实时定量PCR及Western免疫印迹法检测血管瘤标本、血管畸形标本及正常皮肤组织中VEGF、COX-2和p-KDR的表达,应用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:免疫组织化学检测发现,VEGF、COX-2和p-KDR在血管瘤标本中高表达,其阳性率分别达100%、93.33%和86.67%,且与血管畸形和正常皮肤组织中的表达有显著差异(P<0.05)。实时定量PCR及Western免疫印迹方法检测发现,VEGF、COX-2和p-KDR mRNA及蛋白在血管瘤中的表达显著高于正常皮肤组织。结论:VEGF、COX-2和p-KDR在血管瘤血管内皮细胞上高表达,其相互作用可促进血管瘤增殖。其表达情况为临床治疗血管瘤提供了新的思路。

VEGF、KDR在卵巢癌组织中的表达及其与MVD的关系

目的:探讨VEGF、KDR在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达及其与微血管密度的关系。方法:用免疫组化技术检测卵巢上皮性肿瘤组织中VEGF、KDR表达并测定IOD值,在光镜下计数MVD。结果:VEGF和KDR的表达在卵巢良恶性肿瘤组织中有显著性差异。VEGF表达阳性的MVD值显著高于VEGF表达阴性者(P<0.01);MVD与VEGF、KDR表达呈正相关(P<0.05),VEGF表达与KDR表达呈正相关(P<0.01)结论:VEGF、KDR和MVD均能反映卵巢上皮性肿瘤的良恶性和恶性进展程度,可作为衡量卵巢肿瘤良恶性及判断预后的重要参考指标。

VEGF、KDR在精索静脉曲张大鼠睾丸中的表达意义

目的研究VEGF及KDR在实验性左侧精索静脉曲张4周组及8周组大鼠睾丸中的表达变化,探讨它们与精索静脉曲张(VC)的关系及VC致男性不育的病理生理学机制。方法建立大鼠实验性左侧精索静脉曲张模型,于术后4周和8周取双侧睾丸,采用免疫组织化学SP法检测VEGF、KDR在实验组和对照组SD大鼠睾丸上的表达情况。结果 ELV 4周组大鼠两侧睾丸中VEGF蛋白表达均上调,8周组表达均下降;ELV4周组大鼠睾丸中KDR蛋白的表达与对照组比较显著增强,而8周组比对照组和4周组均显著降低。结论 VEGF和KDR在睾丸中的表达明显受到ELV进程的影响,说明它们在VC致男性不育中起到一定的作用。

原发性肝癌VEGF KDR/Flk-1 bFGF表达与影像学特征关系的研究

通过探讨原发性肝癌VEGF、KDR/Flk-1、bFGF蛋白表达与CT与MRI影像表现的多样性的关系,探讨用影像表现判断肝癌生物学行为的可行性,为肝癌的临床治疗及预后判断提供参考指标。经影像与病理研究显示:(1)VEGF、KDR/Flk-1、bFGF的异常表达与肝癌的发生、发展相关。(2)原发性肝癌的CT和MRI征象可在一定程度上反映VEGF、KDR/Flk-1、bFGF蛋白的表达情况。

VEGF、KDR在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达及其与血管新生的关系

目的:探讨VEGF、KDR在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达及其与微血管密度的关系。方法:用免疫组化技术检测卵巢上皮性肿瘤组织中VEGF、KDR的表达并测定IOD值,在光镜下计数MVD。结果:VEGF和KDR的表达在卵巢良恶性肿瘤组织中有显著性差异。VEGF表达阳性的MVD值显著高于VEGF表达阴性者(P<0.01);MVD与VEGF、KDR表达呈正相关(〈P0.05),VEGF表达与KDR表达呈正相关(P〈0.01)结论:VEGF、KDR和MVD均能反映卵巢上皮性肿瘤的良恶性和恶性进展程度,可作为衡量卵巢肿瘤良恶性及判断预后的重要参考指标。