基于VEGF/KDR通路探讨温肾养血方提高子宫内膜容受性的研究

目的:探讨温肾养血方提高子宫内膜容受性的作用机制。方法:建立肾虚血瘀型胚胎着床障碍大鼠模型,运用SP免疫组化法、蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR检测正常组,模型组,高、中、低剂量组血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体2(KDR)的表达情况。结果:与模型组比较,温肾养血方高剂量组的VEGF、KDR蛋白表达均显著升高(P<0.05)。结论:温肾养血方能促进子宫内膜VEGF和KDR的表达,并且其效果与剂量成正相关,提示温肾养血方提高妊娠率的作用机制可能与通过调节子宫内膜血流改善子宫内膜容受性有关。

罗沙司他对腹膜透析大鼠腹膜HIF-1α/VEGF信号通路表达及纤维化的影响

目的评估罗沙司他(Roxadustat,ROX)对腹膜透析(Peritoneal dialysis,PD)大鼠腹膜组织的缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factors-1α,HIF-1α)以及血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响,同时探讨其对腹膜纤维化程度的潜在作用及其机制。方法购入30只雄性SPF级大鼠,采用5/6肾脏切除法成功构建尿毒症腹膜透析大鼠模型27只,随机分为空白对照组、PD组、PD+ROX组(联合给予5 mg/kg ROX,每周3次),每组9只,持续给药1个月,在灌胃后6、12、24 h以及4周时,采用ELISA法检测腹膜透析液、血液中HIF-1α和VEGF的浓度。利用HE和Masson染色观察大鼠腹膜组织病理变化,WB和免疫组化检测腹膜组织中HIF-1α、VEGF蛋白表达变化。结果HE和Masson染色观察各组大鼠腹膜组织,与空白对照组比较,PD组大鼠的腹膜组织出现了明显的纤维化和血管增生现象;与PD组相比,PD+ROX组大鼠的腹膜组织纤维化和血管增生现象明显改善。PD组腹膜组织中HIF-1α和VEGF蛋白表达水平显著高于空白对照组(P均<0.05),增加ROX干预后,PD+ROX组大鼠腹膜组织中HIF-1α和VEGF蛋白表达水平显著降低(P均<0.05)。PD+ROX组血清中HIF-1α和VEGF浓度均高于空白对照组和PD组(P均<0.05)。PD+ROX组腹膜透析液中HIF-1α和VEGF浓度均低于空白对照组和PD组(P均<0.05)。结论ROX治疗能有效降低腹膜组织及腹膜透析液中的HIF-1α和VEGF表达水平,缓解由葡萄糖腹膜透析引起的腹膜组织纤维化和血管增生。同时,血清中HIF-1α和VEGF水平的提升有助于改善腹膜组织的缺氧状况,抑制HIF-1α/VEGF信号通路,对抗腹膜纤维化。

VEGF/Akt信号通路在骨折大鼠愈合中作用机制及对炎症因子IL-6、TNF-α的影响

目的 观察血管内皮生长因子(VEGF)/蛋白激酶B(Akt)信号通路在骨折大鼠愈合中的作用机制及对炎症因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α的影响。方法 选取健康清洁级SD雄性大鼠30只,按随机原则分为假手术组、模型组与对照组,每组10只。其中假手术组行假手术,模型组与对照组建立大鼠股骨骨折模型,对照组通过尾静脉注射经慢病毒转染高表达VEGF的骨髓间充质干细胞处理。4 w后通过四点断裂实验分析愈合后股骨的力学参数,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中成骨标记物骨源性碱性磷酸酶(BALP)、IL-6与TNF-α水平,通过苏木素-伊红(HE)染色观察股骨标本病理学变化,通过RT-聚合酶链反应(PCR)检测VEGF与p-Akt水平,通过Western印迹检测骨痂组织中p-Akt、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、IL-6、TNF-α蛋白水平。结果 对照组骨折部位承受的最大力及韧性均显著高于模型组(P<0.05)。对照组外周血中BALP水平显著高于模型组,IL-6与TNF-α水平显著低于模型组(P<0.05)。与模型组相比,对照组骨折部位能观察到广泛的新骨生成,且骨组织中VEGF、p-Akt mRNA水平明显升高(P<0.05)。与模型组相比,对照组骨痂组织中eNOS与p-Akt蛋白表达显著上调,IL-6与TNF-α蛋白表达显著下调(P<0.05)。结论 激活VEGF/Akt信号通路能促进骨折大鼠的愈合,且能够抑制炎症反应。

电针调控HIF-1α/VEGF信号通路对类风湿性关节炎模型踝关节病理学改变的影响

目的探讨电针通过调控HIF-1α/VEGF信号通路活性对类风湿性关节炎(RA)大鼠踝关节病理损伤的影响。方法选取50只SD大鼠,随机分为Sham组(空白对照)、RA组(大鼠构建RA模型)、电针组(RA组大鼠给予电针治疗)、CAY10585组(RA大鼠腹腔内注射HIF-1α/VEGF信号通路抑制剂)、电针+CAY10585组(电针组大鼠腹腔注射HIF-1α/VEGF信号通路抑制剂),每组10只。模型建立后观察各组大鼠基本形态;8周后处死大鼠,比较治疗后大鼠踝关节直径;取大鼠踝关节行HE染色,观察整体病理形态及踝关节病理特征(滑膜细胞增殖、细胞侵蚀、血管翳形成、炎性细胞浸润、骨侵蚀)病理评分;酶联免疫吸附法(ELISA)检测5组大鼠血清炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平;Western-blot检测大鼠踝关节组织内软骨基质因子Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)、C端肽(CTXⅡ)、Ⅱ型胶原C前肽(CPⅡ)蛋白表达。结果与Sham组比较,RA模型建立可以上调大鼠踝关节直径,踝关节滑膜细胞增殖、细胞侵蚀、血管翳形成、炎性细胞浸润、骨侵蚀病理评分,血清炎性因子(TNF-α、IL-6)水平均明显提升(P<0.05),关节滑膜上皮复层出现增生、间质水肿以及炎性细胞浸润的现象;电针干预可以下调大鼠踝关节直径、踝关节滑膜细胞增殖、细胞侵蚀、血管翳形成、炎性细胞浸润、骨侵蚀病理评分,血清炎性因子(TNF-α、IL-6)水平(P<0.05),同时踝关节病理形态明显得到缓解;CAY10585干预再次增加RA大鼠病理形态,破骨细胞明显增加,骨质出现侵蚀、溶解骨层及炎性细胞浸润的现象,踝关节直径、踝关节滑膜细胞增殖、细胞侵蚀、血管翳形成、炎性细胞浸润、骨侵蚀病理评分,血清炎性因子(TNF-α、IL-6)水平再次提升(P<0.05);电针干预可以逆转CAY10585组大鼠趋势,再次下调大鼠踝关节直径、踝关节滑膜细胞增殖、细胞侵蚀、血管翳形成、炎性细胞浸润、骨侵蚀病理评分(P<0.05);与Sham组比较,RA组大鼠踝关节组织内CTXⅡ表达提升,CollagenⅡ、CPⅡ表达降低(P<0.05);电针干预可以下调CTXⅡ表达,上调CollagenⅡ、CPⅡ、HIF-1α、VEGF表达(P<0.05);CAY10585干预则体现出相反趋势,再次上调CTXⅡ表达,下调CollagenⅡ、CPⅡ、HIF-1α、VEGF表达(P<0.05);电针干预可以逆转CAY10585组大鼠软骨基质及HIF-1α、VEGF表达(P<0.05)。结论电针治疗可以改善RA大鼠踝关节的病理学表现,降低炎性反应,保护软骨损伤,其分子机制可能与激活HIF-1α/VEG信号通路有关。

HIF-1α/VEGF信号通路在胃癌前病变中的作用及中药干预研究进展

胃癌的发生发展和血管生成密不可分,丰富的新生血管为癌细胞的生长增殖及转移提供了物质条件。胃癌前病变(precancerous lesions of gastric cancer,PLGC)是炎性病变胃黏膜进展为胃癌的关键病理阶段,研究显示,该阶段早期即有新血管生成,且随胃黏膜病变程度加重而逐渐增多。缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF)-1α/血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)信号通路是介导血管生成的重要通路,在PLGC过程中可发挥正向促进作用。中医素来强调治未病思想,加之中药多成分、多途径、多靶点等特征,在PLGC防治中优势显著。文章以HIF-1α/VEGF信号通路为切入点,系统阐述了该信号通路在PLGC中的作用以及中药靶向干预PLGC的研究进展,以期为本病的临床治疗提供依据和参考。

散结消瘿方通过调控HIF-1α/VEGF信号通路对甲状腺滤泡状癌荷瘤裸鼠血管生成的影响

目的探究散结消瘿方对甲状腺滤泡状癌荷瘤裸鼠血管生成的影响。方法构建FTC-238甲状腺滤泡状癌裸鼠腋下异位移植瘤模型,随机分为空白组、模型组、索拉菲尼组(30 mg/kg,阳性对照)和复方低、中、高剂量组(7.5、15、30 g/kg散结消瘿方)。给药4周后获取小鼠血清及肿瘤组织,ELISA法检测血清HIF-1α、VEGF、IL-6水平,免疫组化法检测肿瘤组织微血管密度(MVD),RT-qPCR、Western blot及免疫组化法检测肿瘤组织HIF-1α、VEGF mRNA及蛋白表达。结果与模型组比较,散结消瘿方各剂量组和索拉菲尼组肿瘤体积缩小(P<0.05,P<0.01),MVD值降低(P<0.05,P<0.01),血清HIF-1α、VEGF、IL-6水平降低(P<0.05,P<0.01),肿瘤组织HIF-1α、VEGF mRNA及蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01)。结论散结消瘿方对甲状腺滤泡状癌有显著的抑制作用,其机制可能与抑制HIF-1α/VEGF信号通路活化,抑制血管生成有关。

桃红四物汤治疗冠心病的疗效及对患者神经体液、HIF-1α/VEGF信号通路的影响

目的:研究桃红四物汤治疗冠心病的疗效及对患者神经体液、缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)/血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)信号通路的影响。方法:选取2020年2月至2023年3月我院收治的200例冠心病患者作为研究对象,按建档编号的单、双号将其分为对照组和观察组,各100例。对照组采用常规西医治疗,观察组在对照组的基础上增加服用桃红四物汤治疗。比较两组临床疗效、动脉弹性、神经体液、HIF-1α/VEGF信号通路相关因子表达和不良反应。结果:治疗4 w后,观察组治疗总有效率明显高于对照组(P<0.05);两组小动脉震荡指数(C2)和大动脉顺应指数(C1)均明显升高,且观察组明显高于对照组(P<0.05);两组醛固酮(Aldosterone,ALD)、心钠素(Atrial natriuretic peptide,ANP)、脑钠素(Brain natriuretic peptide,BNP)均明显降低,且观察组ANP、BNP明显低于对照组(P<0.05),但两组ALD无明显差异(P>0.05);两组HIF-1α、VEGF均明显降低,且观察组明显低于对照组(P<0.05);两组转化生长因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β)均明显升高,且观察组明显高于对照组(P<0.05);两组不良反应发生率无明显差异(P>0.05)。结论:桃红四物汤可增强冠心病患者动脉弹性及临床疗效,调节神经体液,这可能与调节HIF-1α/VEGF信号通路有关,且安全性较高。

基于VEGF/VEGFR2信号通路探究苗药铁筷子醇提物抗类风湿关节炎大鼠滑膜血管新生作用

目的本项目拟以“苗药铁筷子”为研究对象,研究其对胶原诱导型(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠抗炎活性及VEGF/VEGFR2/P38 MAPK通路的调控机制。方法将60只雌性Wistar大鼠,随机分为正常组、模型组、阳性药物组、铁筷子低、中、高剂量组,每组10只。将牛Ⅱ型胶原蛋白溶液注入大鼠尾部,复制大鼠模型,阳性药物组灌胃给予甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)2.0 mg/(kg·d),每隔1 d 1次;铁筷子低、中、高3个剂量组以铁筷子醇提取物灌胃0.25、0.5和1 g/(kg·d),每天1次;正常组、模型组均采用等量NaCl溶液灌胃;连续灌胃28 d。治疗过程中,观察各组大鼠一般状况,记录体重变化,测定大鼠足底厚度;治疗结束后取大鼠后肢,经Micro-CT检测骨质破坏程度、苏木素-伊红(HE)染色法进行关节滑膜的病理学研究,免疫组织化学染色观察滑膜新生血管数量,反转录聚合酶链反应法(qRT-PCR)在大鼠滑膜组织中检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)-A、血管内皮细胞生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)、肿瘤坏死因子(tumer necrosis factor,TNF)-α的mRNA水平,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测VEGF、VEGFR2、p-P38、p-AKT的表达,以探索苗药铁筷子治疗类风湿性关节炎的潜在作用机制。结果与正常组比较,模型组大鼠体重降低显著(P<0.01),足肿胀度明显增加(P<0.01),病理切片可见踝关节及后肢其他小关节滑膜组织明显增生、大量炎性细胞浸润,骨组织表面可见啃噬样病变,滑膜新生血管数量明显增多,Micro-CT显示明显骨质破坏、骨量百分比、骨小梁厚度、骨密度均显著下降,关节滑膜组织中VEGF-A、VEGFR2、TNF-αmRNA水平显著升高(P<0.01),VEGF-A、VEGFR2、p-P38、p-AKT蛋白表达量均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,铁筷子醇提物呈剂量依赖性改善上述情况,以铁筷子高剂量组效果最优,大鼠的体重显著升高(P<0.05),足肿胀度明显下降(P<0.05),滑膜组织病理学损伤及骨组织啃噬样病变情况明显好转,滑膜组织新生血管明显减少,VEGF-A、VEGFR2、TNF-αmRNA水平明显降低(P<0.01),VEGF-A、VEGFR2、p-P38、p-AKT蛋白表达量显著降低(P<0.01)。结论苗药铁筷子可能通过调节VEGF/VEGFR2信号通路减轻CIA大鼠关节炎性损伤,进而发挥治疗类风湿关节炎的作用。

基于STAT3/VEGF信号通路探究头顶一颗珠正丁醇萃取物对肝癌大鼠的抑制作用及其机制

目的探讨头顶一颗珠正丁醇萃取物对二乙基亚硝胺(DEN)诱发的大鼠原发性肝癌的抑制作用,探讨其对STAT3/VEGF信号通路的影响,并研究其对抗肝癌血管生成的分子机制。方法将大鼠随机分为G1组(正常对照组)、G2组(模型组)、G3组(华蟾素组)、G4组(头顶一颗珠低剂量组)、G5组(头顶一颗珠高剂量组),除G1组外所有大鼠腹腔注射二乙基亚硝胺建立肝癌大鼠模型。使用头顶一颗珠正丁醇萃取物处理肝癌大鼠,检测大鼠肝脏指数、脾脏指数;检测大鼠的血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)和总胆红素(TBIL)的水平;ELISA法检测血清TGF-β1和VEGF的水平;同时采用Western blot检测VEGF、KDR、STAT3、p-STAT3蛋白水平。结果与G1组比较,G2组大鼠肝脏指数、ALT、AST和TBIL的水平显著增加,ALB的水平显著降低,血清TGF-β1和VEGF的水平显著升高,肝组织VEGF、KDR、STAT3、p-STAT3蛋白水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,头顶一颗珠正丁醇萃取物组大鼠肝脏指数显著降低,血清AST和TBIL水平显著降低,血清TGF-β1和VEGF的水平显著降低,肝组织VEGF、KDR、STAT3、p-STAT3蛋白水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论头顶一颗珠正丁醇萃取物通过抑制STAT3/VEGF信号通路,发挥抗肝癌血管生成作用。

依达拉奉调节HIF-1α/VEGF信号通路对类风湿性关节炎大鼠血管生成及炎症反应的影响

目的探讨依达拉奉(Eda)调节缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路对类风湿性关节炎(RA)大鼠血管生成及炎症反应的影响。方法将60只6~8周龄SPF级雄性SD大鼠分为control组、RA组、Eda组、甲氨蝶呤组、二甲基草酰甘氨酸(DMOG)组(HIF-1α/VEGF通路激活剂),每组12只,除control组外均采用Ⅱ型胶原蛋白联合完全弗氏佐剂复制RA大鼠模型。所有干预结束后,检测大鼠足趾肿胀度、痛阈值并对大鼠进行关节炎评分;ELISA法检测血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平;CD31免疫组化检测足关节滑膜组织血管密度;HE染色观察足关节滑膜组织病理改变;qRT-qPCR法检测HIF-1α、VEGF mRNA表达;Western blot法检测HIF-1α/VEGF信号通路蛋白表达。结果相较于control组,RA组大鼠足肿胀度、关节炎评分、IL-6、TNF-α水平、足关节滑膜组织血管密度、HIF-1α、VEGF mRNA及蛋白表达升高,压痛阈值、热痛阈值降低(P<0.05);相较于RA组,Eda组与甲氨蝶呤组大鼠足肿胀度、关节炎评分、IL-6、TNF-α水平、足关节滑膜组织血管密度、HIF-1α、VEGF mRNA及蛋白表达降低,压痛阈值、热痛阈值升高(P<0.05);HIF-1α/VEGF通路激活剂DMOG可减弱Eda对RA大鼠血管生成及炎症反应的抑制作用(P<0.05)。结论Eda通过抑制HIF-1α/VEGF信号通路,抑制血管生成、降低炎症反应,从而起到减轻RA的作用。

基于HIF-VEGF-Notch通路探讨丁苯酞对氧糖剥夺/复氧人脑微血管内皮细胞的保护作用

目的基于HIF-VEGF-Notch通路探讨丁苯酞对氧糖剥夺/复氧人脑微血管内皮细胞的保护作用。方法制备氧糖剥夺/复氧人脑微血管内皮细胞模型,将细胞分为空白组、氧糖剥夺/复氧组、丁苯酞组和丁苯酞+sh-HIF-1α组。CCK-8及EdU染色检测H9c2细胞活力;流式细胞仪和AO/EB染色检测细胞凋亡;Matrigel体外成管试验检测血管生成能力;ELISA检测细胞中炎症因子含量;蛋白质印迹法检测细胞中HIF-1α、VEGF、Notch1蛋白表达。结果和空白组相比,氧糖剥夺/复氧组细胞存活率(51.32±4.68)%、EdU阳性细胞率(12.08±0.75)%、小管形成数目(121.08±10.59)个明显降低,细胞凋亡率(14.92±1.06)%、细胞中IL-1β(30.46±2.51)pg/mL、IL-6(35.96±2.74)pg/mL、TNF-α(24.08±1.95)pg/mL水平、HIF-1α(0.61±0.08)、VEGF(0.72±0.08)、Notch1(0.43±0.05)蛋白表达明显升高(P<0.01);和氧糖剥夺/复氧组相比,丁苯酞组细胞存活率(85.94±7.09)%、EdU阳性细胞率(20.27±2.01)%、小管形成数目(204.15±16.71)个及细胞中HIF-1α(1.15±0.12)、VEGF(0.96±0.10)、Notch1(0.87±0.10)蛋白表达均明显增加,细胞凋亡率(7.40±0.65)%、细胞中IL-1β(10.32±0.87)pg/mL、IL-6(12.81±1.03)pg/mL、TNF-α(10.31±0.89)pg/mL水平明显降低(P<0.0001);和丁苯酞组相比,丁苯酞+sh-HIF-1α组细胞存活率(54.18±5.06)%、EdU阳性细胞率(15.46±0.83)%、小管形成数目(129.26±11.64)个及细胞中HIF-1α(0.53±0.06)、VEGF(0.60±0.06)、Notch1(0.36±0.04)蛋白表达明显降低,细胞凋亡率(12.87±1.01)%、细胞中IL-1β(28.59±2.39)pg/mL、IL-6(32.87±2.31)pg/mL、TNF-α(22.01±1.87)pg/mL水平明显升高(P<0.01)。结论丁苯酞可促进氧糖剥夺/复氧人脑微血管内皮细胞血管生成,从而对损伤的细胞发挥保护作用,其作用机制可能和促进HIF-1α/VEGF/Notch1信号通路激活有关。

基于HIF-1α/VEGF通路探讨土家族麝针疗法“活血生新”干预缺血性脑卒中大鼠的作用机制

目的 探讨土家族麝针疗法对缺血性脑卒中大鼠运动功能的康复作用,分析缺氧诱导因子(HIF)-1α/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路在缺血性脑卒中发生、发展和转归中的作用机制。方法 采用改良线栓法复制缺血性脑中风大鼠模型。筛选Zea-longa评分为1~3分的大鼠,随机分为模型组、土家族麝针组、针刺组,另设立假手术组,每组15只,土家族麝针组以自制麝针刺激大鼠对侧头皮运动区肌层;针刺组以普通针灸同法治疗,持续治疗3个疗程。假手术组和模型组不做任何处理。在治疗前和每个疗程治疗结束后,每组随机选取6只大鼠进行平衡木实验检测其神经运动功能变化;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆中的VEGF和HIF-1α含量;Western印迹检测海马中VEGF受体(VEGFR)2与酪氨酸蛋白激酶家族成员(Src)蛋白的表达。结果 治疗前,与假手术组相比,模型组、土家族麝针组和针刺组运动功能明显降低,血浆中VEGF和HIF-1α含量明显增高(P<0.05);治疗3个疗程后,与模型组比较,麝针组和针刺组的运动功能明显提高,血浆中HIF-1α和VEGF含量明显升高,大鼠海马中VEGFR2相对表达量明显升高,Src蛋白相对表达量明显降低(P<0.05);与针刺组相比,麝针组神经运动功能恢复明显较好,血浆中VEGF和HIF-1α含量明显高于针刺组(P<0.05)。麝针组海马中VEGFR2相对表达明显升高,Src蛋白相对表达明显降低(P<0.05)。结论 土家族麝针疗法对缺血性脑卒中所致运动功能障碍的康复有明显促进作用,可能是通过调节HIF-1α/VEGF信号通路以“活血化瘀生新”而实现的。

杞菊地黄丸联合抗VEGF通过调控cAMP/PKA信号通路治疗增殖性糖尿病视网膜病变的作用机制

目的研究旨在探讨杞菊地黄丸联合抗VEGF通过调控cAMP/PKA信号通路治疗增殖性糖尿病视网膜病变患者的作用机制。方法将2022年1月—2024年3月宁德师范学院附属宁德市医院眼科收治的204例增殖性糖尿病视网膜病变患者为研究对象,采用随机数字表法将其分为对照组(给予抗VEGF治疗)和试验组(给予杞菊地黄丸联合抗VEGF治疗)各102例,对比两组疗效,观察治疗前、治疗后视力相关指标、VEGF、Ang-1水平及cAMP/PKA信号通路。结果试验组总有效率高于对照组(P<0.05)。治疗后两组眼部相关指标(视力、眼压、视野灰度值、黄斑中心凹厚度)水平均优于治疗前(P<0.05);试验组眼部相关指标(视力、眼压、视野灰度值、黄斑中心凹厚度)水平优于对照组(P<0.05)。治疗后两组VEGF、Ang-1水平低于治疗前(P<0.05);试验组VEGF、Ang-1水平低于对照组(P<0.05)。治疗后两组cAMP水平高于治疗前,PKA水平低于治疗前(P<0.05);试验组cAMP水平高于治疗前,PKA水平低于对照组(P<0.05)。结论杞菊地黄丸联合抗VEGF能够通过调控cAMP/PKA信号通路,发挥治疗增殖性糖尿病视网膜病变患者的作用。

人参皂苷Rg_3对人肺鳞癌细胞VEGF及KDR表达的影响

目的:探讨人参皂苷Rg3在抑制肿瘤新生血管生成过程中的作用,及其对人肺鳞癌SK-MES-1分泌的血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体KDR的影响。方法:体外培养人肺鳞癌SK-MES-1细胞,经不同浓度的Rg3处理后,采用免疫细胞化学法与RT-PCR法检测Rg3对SK-MES-1细胞株VEGF mRNA、KDR mRNA及其蛋白表达的影响。结果:免疫细胞化学结果显示人参皂苷Rg3各浓度组SK-MES-1细胞VEGF及KDR蛋白阳性率与对照组比较差异显著。RT-PCR结果显示随着Rg3浓度的增加,VEGF、KDR扩增条带逐渐减弱,各浓度组与对照组比较差异显著。结论:人参皂苷Rg3能够抑制人肺鳞癌SK-MES-1细胞VEGF mRNA与KDR mRNA及其蛋白水平的表达,这可能是Rg3抑制肿瘤新生血管形成的机制之一。

益气化瘀解毒方对人肝癌裸鼠HepG2移植瘤MVD、HIF1a、VEGF/KDR表达的影响

目的:观察益气化瘀解毒方对人肝癌裸鼠HepG2移植瘤MVD、HIF1a、VEGF/KDR表达的影响。方法:建立人肝癌移植瘤模型,分为7组,分别以益气化瘀解毒方、黄芪、莪术、重楼、壁虎、顺铂药物干预21 d后,取瘤组织行免疫组化检测。结果:①对MVD的影响:全方组与除顺铂外的其它组比较有统计学意义(P<0.05);除黄芪、莪术外的其它组与空白组比较有统计学意义(P<0.05)。②对HIF1a的影响:全方组与除黄芪外的其它组比较有统计学意义(P<0.05);各组与空白组比较有统计学意义(P<0.05)。③对VEGF表达的影响:全方组与除顺铂外的其它组比较均有统计学意义(P<0.05);莪术组与空白组比较无统计学意义(P>0.05)。④对KDR表达的影响:全方组与其它各组比较均有统计学意义(P<0.05);黄芪组与空白组比较无统计学意义(P>0.05)。结论:益气化瘀解毒方能明显抑制人肝癌裸鼠移植瘤MVD、HIF1a、VEGF和KDR的表达而发挥抗血管生成作用;各单味药对其作用各有侧重,但作为整方的有机组成从不同环节发挥了协同作用。

大肠癌中C-Met VEGF及其受体KDR的表达与预后的相关性

目的:探讨C-Met、CEGF及其受体KDR在大肠癌组织中的表达与预后的关系,为判断大肠癌患者预后提供参考。方法:应用免疫组织化学法检测60例大肠癌标本中C-Met、VEGF及其受体KDR的表达情况。随访统计5年生存率。结果:C-Met、VEGF及其受体KDR在大肠癌组织中的表达阳性率分别为43.3%、61.7%及68.3%;三者在大肠癌组织中的表达与患者的年龄及性别无明显相关(P>0.05),与肿瘤侵袭深度、是否淋巴结转移及Dukes分期密切相关(P均<0.05)。C-Met、VEGF及KDR阳性者5年生存率分别为423%、43.2%及51.2%,阴性者5年生存率分别为73.5%、87.0%及78.9%,两组差异有统计学意义(P<0.05)Cox回归生存分析显示:对于大肠癌患者,VEGF、KDR及C-Met均是独立危险因素;联合检测VEGF、KDR及C-Met,是预测大肠癌预后很好的指标。结论:C-Met、VEGF及其受体KDR在大肠癌患者组织中的表达与大肠癌的发生、发展有关,三者均阳性表达提示患者预后差,可作为评价预后的指标。

桃红四物汤Ⅱ号抑制小鼠B16黑色素瘤生长及VEGF,KDR/FLK-1表达

目的:观察桃红四物汤Ⅱ号对小鼠B16黑色素瘤生长、血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮生长因子受体-2(KDR/FLK-1)表达及肿瘤微血管密度(MVD)值的影响。方法:采用C57BL/6J小鼠皮下接种B16黑色素瘤细胞建立模型,分别给予2.5,5,10 g.kg-1桃红四物汤Ⅱ号水煎剂、环磷酰胺0.05 g.kg-1及联合用药桃红四物汤Ⅱ号10 g.kg-1+环磷酰胺0.025 mg.kg-1,检测各组肿瘤体积、重量、VEGF和KDR/FLK-1表达及肿瘤MVD值。结果:桃红四物汤Ⅱ号5,10 g.kg-1及联合用药组肿瘤体积、重量、VEGF和KDR/FLK-1表达及肿瘤MVD值均较生理盐水组明显降低(P<0.01)。结论:桃红四物汤Ⅱ号能抑制小鼠B16黑色素瘤的生长,其抗肿瘤机制可能与抗血管生成作用有关。

VEGF、VEGFR_2(KDR)、MMP-1以及转录调节因子Ets-1在子宫颈癌组织中的表达及其意义

目的从分子水平观察肿瘤血管生成因子VEGF、VEGF受体KDR、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)及其转录调节因子Ets-1(E26transformation-specific-1,Ets-1)在子宫颈癌中的表达并揭示其因子间相互关系,为判断患者预后和解释促血管生成因子间内在规律提供根据。方法利用原位杂交和免疫组织化学染色法检测87例子宫颈癌组织中VEGF、KDR、MMP-1以及Ets-1等因子mRNA和蛋白表达规律;患者生存曲线比较在阴性组和阳性组间进行;因子间分析利用Pearson相关分析法。结果VEGFmRNA和蛋白主要分布在癌细胞胞质中,阳性率分别为78.6%(68/87)和70.4%(61/87);KDRmRNA和蛋白主要在内皮细胞上表达,其表达率与VEGF表达率间存在密切的相关关系,r=0.892;MMP-1在肿瘤细胞和间质血管内皮细胞中表达,尤其在血管新生处表达明显;Ets-1主要分布在内皮细胞和肿瘤细胞中,其表达率与KDR和MMP-1表达率间的相关系数(r)分别为0.900和0.873;上述四因子表达与肿瘤分化度、淋巴结转移及5年存活率均有密切的相关性。结论VEGF、KDR、MMP-1以及Ets-1是参与子宫颈癌血管生成的重要因子,且彼此间存在密切的相关性,检测其表达规律可为判断子宫颈癌生物学行为和解释促血管生成因子间内在联系提供理论根据。

抗人VEGF受体KDR胞外区域3血清的制备及生物活性

目的:制备抗人VEGF受体KDR胞外区域3(KDR3)的血清,研究其阻断VEGF受体的作用。方法:采用6周龄雌性BALB/C小鼠将纯化的人VEGF受体II基因3区蛋白质与完全佐剂和不完全佐剂制成抗原乳剂,分3次注射,前2次为腹腔注射,第3次为静脉注射,待第3次静脉注射后7天摘眼球取血,静置凝固后取上层血清测抗血清的效价,用血管内皮细胞ECV3042×104/ml铺24孔板,加入VEGF的同时加入抗KDR中和抗体IMC-ICI和KDR3抗血清,从次日开始测定。结果:用Studentt-tes统计学方法处理显示,PBS对照组与非相关性血清组P>0.05,抗KDR中和抗体IMC-ICI组与KDR3抗血清组P>0.05,而VEGF组与非相关性血清组和KDR3抗血清组P<0.05。结论:VEGF对ECV304细胞有促增殖作用,而抗KDR中和抗体IMC-ICI和KDR3抗血清对ECV304细胞都表现出了对外源性VEGF有明显抑制作用,同时对内源性VEGF也有明显抑制作用。

VEGF受体KDR胞外区基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达

VEGF(血管内皮细胞生长因子 ,VascularEndothelialGrowthFactor)是刺激内皮细胞增殖和新生血管形成的最重要因子 ,与多种实体瘤的生长和转移密切相关。应用其可溶性受体阻断它的病理作用是一个非常有前景的课题。将VEGF受体KDR胞外区前三个Loop 96 9碱基对的cDNA片段克隆到杆状病毒表达载体pFastBacI,与杆状病毒表达载体Bacmid同源重组后 ,转染昆虫细胞SF 9,获得重组杆状病毒并证明了目的基因的高效表达。经Westernblot证实表达产物的特异性。经ELISA和体外生物学活性检测表明表达产物可阻断VEGF的生物学活性 ,抑制鸡胚CAM血管的生长。