芪甲柔肝方及其拆方调控VEGF/SRF/c-FOS通路与改善肝纤维化大鼠肝窦毛细血管化的机制研究

基于血管内皮生长因子(VEGF)/血清应答因子(SRF)/原癌基因c-FOS(c-FOS)通路及肝窦毛细血管化揭示芪甲柔肝方及其拆方抗肝纤维化的机制。将大鼠随机分为空白组(6只)和造模组(28只),造模组大鼠采用皮下注射40%四氯化碳(CCl_4)橄榄油的方法建立肝纤维化模型。确定造模成功后,将造模组剩余大鼠分为模型组(7只)、芪甲柔肝全方组(6只)、拆方益气养血药组(6只)、拆方化瘀通络药组(6只),芪甲柔肝全方组、拆方益气养血药组、拆方化瘀通络药组分别采用中药灌胃治疗,空白组与模型组给予生理盐水灌胃。灌胃28 d后处死大鼠,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)判断肝功能,肝组织苏木素-伊红(HE)染色、马松(Masson)染色观察肝脏炎症及纤维化,检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(collagenⅠ)判断肝星状细胞激活,检测肝组织血管内皮生长因子A(VEGFA)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)、SRF、c-FOS、分化抗原簇31(CD31)、血管性血友病因子(vWF)的表达水平,扫描电镜观察肝窦内皮细胞窗孔形态以揭示各组药物抗肝纤维化的机制。结果显示,与模型组相比,芪甲柔肝方及其拆方益气养血药、化瘀通络药均能减轻肝组织病理损伤,降低肝纤维化大鼠ALT、AST和肝指数(P<0.01);各治疗药物均能降低肝组织α-SMA和collagenⅠ表达(P<0.01),降低肝纤维化大鼠肝组织CD31和vWF的表达(P<0.05),维持肝窦内皮细胞窗孔形态;各治疗药物均能降低VEGFA、SRF、c-FOS的表达(P<0.05),恢复VEGFR-2的表达(P<0.05)。其中,芪甲柔肝全方在改善大鼠肝损伤与血清肝功能,抑制肝窦毛细血管化,以及调控VEGF/SRF/c-FOS信号通路方面优于拆方的益气养血药及化瘀通络药(P<0.05)。综上,芪甲柔肝方及其拆方均能够改善肝纤维化大鼠肝功能,减轻病理损伤,抑制肝星状细胞激活,减轻肝纤维化及肝窦毛细血管化,其机制与调控VEGF/SRF/c-FOS信号通路有关。单用化瘀通络药不及联合益气养血药的芪甲柔肝全方,提示荣通并治在肝纤维化及肝窦毛细血管化的积极意义。