TGFβ1及VEGF基因在急性髓系白血病患者中的表达水平及其临床预后价值

目的:研究TGFβ1及VEGF基因在急性髓系白血病(AML)患者中的表达水平及其临床预后价值。方法:选取2016年7月至2018年9月间在本院接受治疗的78例AML患者,分离患者骨髓单个核细胞后,采用RT-PCR实验检测样本TGFβ1及VEGF基因水平,并分析TGFβ1及VEGF基因表达与AML患者临床特征的相关性;采用Kaplan-Meier评估患者的OS及EFS;采用Cox风险比例模型分析患者的预后危险因素。结果:AML患者TGFβ1基因相对表达水平为0.32±0.04,显著低于对照组(P<0.05)。VEGF基因相对表达水平为2.65±0.15,显著高于对照组(P<0.05)。TGFβ1及VEGF基因水平与AML患者的白细胞数、血红蛋白、血小板及外周血幼稚细胞呈显著相关性(r=0.83)。完全缓解的AML患者的TGFβ1水平均高于部分缓解及未缓解的患者(P<0.05)。部分缓解的AML患者TGFβ1水平显著高于未缓解患者(P<0.05)。完全缓解的AML患者的VEGF水平均低于部分缓解及未缓解患者(P<0.05)。部分缓解的AML患者VEGF水平显著低于未缓解患者(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析表明,TGFβ1高表达的AML患者OS和DFS均优于TGFβ1低表达的患者(P<0.05),VEGF低表达的AML患者OS和DFS均优于VEGF高表达的患者(P<0.05)。多因素Cox回归分析表明,血小板、TGFβ1及VEGF基因是OS独立影响因素(P<0.05),白细胞、TGFβ1及VEGF基因是DFS独立影响因素(P<0.05)。结论:AML患者TGFβ1表达水平下降,VEGF基因水平上升,并与AML的预后密切相关,可为AML患者的临床治疗提供参考。

超声微泡造影剂对心肌组织的生物学效应及介导VEGF基因转染大鼠心肌的实验研究

目的 探讨超声微泡造影剂对心肌组织的生物学效应及其介导VEGF基因转染大鼠心肌的有效性。方法 18只健康雄性Wistar大鼠 ,取 3只采用超声波在鼠胸壁破坏微泡造影剂 ,观察对心肌组织显微结构的影响。将另 15只急性心肌梗死 3天后的雄性Wistar大鼠分为 3组 ,每组 5只。第一组采用超声破坏微泡造影剂的方式 ,将pcD2 VEGF12 1基因转染大鼠心肌至造影剂不再显影 (约 6min) ;第二组尾静脉输入同等剂量携pcD2 VEGF12 1基因的造影剂 ;第三组为对照。 2周后 ,取缺血心肌组织行VEGF免疫组织化学染色 ,观察心肌组织血管内皮生长因子 (VEGF)蛋白表达情况。结果 超声波破坏微泡造影剂能使心肌组织充血 ,产生大量空泡 ,并有部分心肌细胞坏死。采用超声微泡造影剂介导的VEGF基因转染 ,能明显增强大鼠心肌组织VEGF蛋白的表达。结论 超声微泡造影剂能明显增强对组织的空化效应 ,其介导的VEGF基因治疗是一种无创、新型、高效的基因转移方法。

骨髓间充质干细胞的肌源性诱导分化及转染VEGF基因的表达

目的体外诱导兔骨髓间充质干细胞向肌源性细胞分化,并观察血管内皮生长因子AdTrackCMV-hVEGF165真核表达质粒转染骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)后的表达。方法将20只兔随机分为对照组和实验组,从骨髓液中分离MSCs,对照组以低糖DMEM培养,实验组加用5-氮胞苷(10 mmol/L)诱导培养,第28天进行肌钙蛋白I免疫组化染色。另构建AdTrackCMV-hVEGF165真核表达质粒,通过脂质体转染对照组MSCs,用Northern blotting和Western blotting鉴定血管内皮生长因子(VEGF)的表达,并用ELISA法测定培养上清液中VEGF的浓度。结果成功分离培养出兔MSCs,实验组经5-氮胞苷诱导后MSCs向肌源性细胞分化,肌钙蛋白I免疫组化染色阳性。成功构建AdTrackCMV-hVEGF165真核表达质粒并通过脂质体转染MSCs,Northern blotting示转染的MSCs VEGF165表达信号明显强于未转染细胞,Western blotting 示转染VEGF165基因的MSC表达VEGF,ELISA法测定培养上清液中VEGF的浓度在转染后第3天(1 011 pg/ml)和第5天(1 027 pg/ml)达高峰,此后逐渐下降,但至第13天(349 pg/ml)仍显著高于空白对照(116 pg/ml)和pAdTrackCMV组(125 pg/ml),P<0.01。结论兔骨髓间充质干细胞可在体外向肌源性细胞分化,转染VEGF基因可表达VEGF。

VEGF基因表达抑制对胃腺癌细胞SGC-7901增殖的影响

目的:研究siRNA(small interfering RNA)对人胃腺癌细胞SGC-7901的VEGF基因表达的影响．方法:选择血管内皮生长因子(VEGF)基因为靶基因,设计两组针对VEGF mRNA的小干扰RNA,合成DNA寡核苷酸链,体外转录合成siRNA．以人胃腺癌细胞系SGC-7901为靶细胞,应用脂质体转染的方法,将siRNA导入细胞．采用Hoechst33258染色观察siRNA作用于SGC-7901细胞中出现凋亡小体的情况．流式细胞仪检测细胞周期的改变,RT-PCR法比较转染前后VEGF mRNA表达水平的变化, ELISA法检测细胞培养液中VEGF蛋白分泌量的变化．结果:两组siRNA转染后均能有效地抑制 SGC-7901细胞的生长,诱导细胞凋亡产生凋亡小体．siRNA作用于SGC-7901细胞．其细胞周期均发生了明显的变化,主要表现为G0／G1 期细胞增多,S期细胞减少,并使细胞周期阻滞于G0／G1期(siRNA1组,siRNA2组G0／G1期VS 对照组G0／G1期:75．04％,76．52％ vs 58．37％, P<0．01;siRNA1组,siRNA2组S期vs对照组S 期:17．82％,16．73％ vs 39．52％,P<0．01),而其他组则无明显变化．VEGF mRNA的表达量大幅度减少(siRNA1组,siRNA2组vs对照组: 0．638±0．078,0．656±0．085 vs 0．941±0．046, P<0．01),相对应的VEGF蛋白水平也显著降低(164．7±22．7,166．3±26．6 vs 414．0±61．5, P<0．01),而其他组siRNA转染后则无上述作用．结论:应用靶向VEGF基因RNA干扰技术可以有效抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖．

人BMP-7及VEGF基因共表达腺病毒的构建及在兔骨髓基质干细胞中的共表达

目的构建人BMP7及VEGF165基因共表达腺病毒并观察其在兔骨髓基质干细胞(rBMSC)中的表达。方法利用AdEasy腺病毒表达系统构建人BMP7及VEGF165基因共表达腺病毒AdB7V,体外感染rBMSC后通过观察绿色荧光蛋白表达及RTPCR、免疫组化方法鉴定外源基因的表达。结果rBMSC经AdB7V感染后72h可观察到绿色荧光蛋白(GFP)表达,RTPCR、免疫细胞化学方法证实外源性BMP7及VEGF165基因均可在rBMSC中表达。结论成功构建人BMP7及VEGF165基因共表达重组腺病毒,证实了其在rBMSC的表达,为骨再生的局部联合基因治疗打下基础。

VEGF基因多态性与肺癌危险因素的关系

背景与目的:血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是有力的血管生成介质,在肿瘤的生长及转移中起重要作用。本研究探讨VEGF基因多态性与肺癌危险因素的关系。方法:以病例对照研究方法,采用PCR-RFLP技术,对171例肺癌患者和172例健康对照者的VEGF基因-2578C/A及936C/T位点基因型进行检测,明确两个位点基因型。并采用PHASE110软件构建这两个多态性位点的个体单倍体型。以非条件Logistic回归校正混杂因素,并进行多态性与肺癌风险关联性的统计学分析。结果:携带至少1个-2578A等位基因的个体与携带-2578CC基因型的个体相比,肺癌发病风险降低(P=0.001,OR=0.303,95%CI 0.153～0.601)。性别分层分析显示:携带-2578CA+AA基因型男性患者其肺癌发病风险降低。936C/- 2578C与936C/-2578A两种单倍体分布差异有显著性(P=0.016,OR=0.317,95%CI 0.124～0.809;P=0.018,OR=0.547,95%CI 0.331～0.903)。病理分层显示:与其他对照组单倍体相比,C-C单倍体个体其腺癌发病风险降低(P=0.004,OR=0.237,95%CI 0.090～0.627)。结论:VEGF基因多态性是肺癌危险因素的风险因素。

小分子干扰RNA对斑马鱼VEGF基因的沉默作用

运用RNA干扰技术,针对斑马鱼血管内皮生长因子(VEGF)基因设计并合成了特异性小分子干扰RNA(siRNA),并从血管形成水平研究了siRNA对VEGF基因表达的影响。为了得到能在体内稳定表达的siRNA,进一步以pSilencer4.1-CMVVector为载体,合成了短发夹RNA(shRNA)表达模板并定向克隆到CMV启动子下游,构建了shRNA表达载体。定量碱性磷酸酶染色显示注射合成的siRNA后胚胎新血管生成(angiogenesis)为71.8%,NBT/BCIP血管染色显示表达载体可以引起斑马鱼胚胎肠下静脉、节间血管发育缺陷,原位杂交结果显示胚胎头部及前原肾管部位VEGF表达异常。

人反义VEGF基因表达载体的构建及其对卵巢癌细胞增殖的影响

目的 :构建人反义VEGF基因真核表达载体 ,进行抗血管生成治疗卵巢癌实验。方法 :RT PCR法获得人VEGF基因 ,将VEGF基因反向克隆入真核表达载体pcDNA3中 ,酶切鉴定结果。用此真核表达载体转染人卵巢癌细胞HO 8910 ,G418筛选获得阳性克隆 ,RNA斑点杂交鉴定HO 8910细胞中VEGF表达。Westernblot及间接免疫荧光法检测转染前后HO 8910细胞中VEGF蛋白表达。检测转染前后瘤细胞的生物学性状及裸鼠体内致瘤性。结果 :RT PCR法得到VEGF基因 ,并获得反向构建的VEGF真核表达载体。VEGF反义RNA部分阻断了HO 8910细胞中VEGF表达 ,转染后单个细胞的克隆形成能力明显减弱 ;细胞周期中 ,G1期细胞增多 ,S期细胞减少 ,细胞增殖能力降低 ;形态学超微结构显示细胞器扩张和肿胀 ,核染色质边集 ,凝集成块 ,可见明显的凋亡改变。裸鼠体内致瘤性降低。结论 :成功构建了反义VEGF基因真核表达载体 ,该载体可明显抑制卵巢癌细胞增殖 。

人VEGF基因的克隆及卵巢癌中VEGF基因重排的检测

目的 探讨 VEGF高表达的卵巢癌中 VEGF基因结构有无异常 .方法 用 RT- PCR方法自胎盘中克隆 VEGFc DNA以作为杂交探针 ;收集临床卵巢癌手术切除标本 ,以正常卵巢组织为对照 ,从中提取基因组 DNA并进行 Southern印迹杂交 .结果 序列分析表明所获得基因正确 ,Southernblot分析 10 / 19呈现出大于 2 3 kb片段和 4.3 kb片段的异常片段 ,而不同于正常对照组织的大于 30 kb,6 .5 kb和 2 .5 kb.

VEGF基因沉默联合唑来膦酸抑制胃癌细胞增殖和迁移的机制

目的:探讨靶向抑制VEGF基因联合唑来膦酸对胃癌细胞增殖、迁移及STAT3信号通路的影响。方法:采用LipofectamineTM2000将si-VEGF转染至胃癌BGC-823细胞中,以RT-PCR和Western blot检测其转染效果。转染后,加入不同浓度的唑来膦酸共同培养48 h,MTT法检测si-VEGF联合唑来膦酸对BGC-823细胞增殖的影响,并检测唑来膦酸的IC50;将细胞随机分为si-NC组(转染阴性对照)、si-NC+唑来膦酸组(转染阴性对照后,给予唑来膦酸处理)、si-VEGF组(转染si-VEGF)和si-VEGF+唑来膦酸组(转染si-VEGF后,给予唑来膦酸处理),Transwell小室实验检测细胞的侵袭和迁移能力,Western blot检测细胞中STAT3、p-STAT3和MMP-2蛋白的表达情况。结果:转染si-VEGF后成功下调BGC-823细胞中VEGF mRNA和蛋白的表达,si-VEGF联合唑来膦酸对BGC-823细胞增殖的抑制作用明显高于唑来膦酸单独作用,且唑来膦酸的IC50为62. 94μmol/L。与si-NC组相比,si-NC+唑来膦酸组、si-VEGF组和si-VEGF+唑来膦酸组的侵袭细胞数及迁移细胞数均明显减少,且p-STAT3和MMP-2蛋白表达明显降低,而STAT3表达差异不明显。其中,si-VEGF+唑来膦酸组的作用效果明显高于si-NC+唑来膦酸组或si-VEGF组。结论:靶向抑制VEGF基因联合唑来膦酸能够协调抑制胃癌细胞增殖和迁移,其作用机制可能与抑制STAT3信号通路有关。

Taqman探针检测VEGF基因多态性的实验研究

目的确定Taqman探针等位基因鉴别技术检测VEGF基因C-634G多态性的最适实验条件.方法对影响VEGF基因C-634G多态性Taqman探针检测的反应体系及探针、引物浓度等主要因素进行了系统研究.结果最适反应体系为12.5μL,最适探针、引物浓度为:0.3/12.5μL.结论建立了Taqman探针检测VEGF基因多态性的稳定实验方法.

母猪VEGF基因mRNA全序列的克隆与分析

本研究运用多种分子生物学方法对母猪胎盘VEGF mRNA全序列进行克隆和分析,结果发现：母猪胎盘VEGFmRNA全长约3500 bp,其完整的cDNA编码190个氨基酸,通过同源性比较预测了VEGF基因的DNA序列全长约为16kb。VEGF基因编码的氨基酸序列与人、小鼠和恒河猴的同源性分别为78.82%、79.44%和96.34%。经生物信息学分析,预测VEGF蛋白理论分子量为22.33 kD,其等电点为7.89;大约在1-20,40-45,50-60,65-80,100-105位之间的氨基酸存在疏水性区域,用TMHMM2.0分析猪VEGF的跨膜结构发现此蛋白所有氨基酸都位于膜表面,证实了VEGF是一种表面蛋白。用signalP 3.0分析发现在1-27位氨基酸可能为信号肽（P=0.999）,且可能在26和27位氨基酸之间发生切割（P=0.956）。对VEGF核苷酸序列和氨基酸序列、蛋白质结构和功能的分析,进一步证实本研究得到了VEGF基因mRNA的全序列,为VEGF基因与母猪繁殖性能的关联性研究提供依据。

VEGF基因治疗与血管化作用的研究进展

血管内皮细胞牛长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是目前最强有力的血管生成因子，能增加微静脉、小静脉的通透性，促进血管内皮细胞分裂与增殖，使细胞质钙聚集，诱导血管生成，在胚胎发育、创伤愈合、肿瘤生长与转移过程中起重要作用，因此VEGF的血管化作用是机体生理及病理性组织生长和损伤愈合的基础。

小鼠梗死心肌组织上VEGF基因治疗和骨髓间充质干细胞移植的实验研究

目的探讨VEGF基因治疗和MSCs移植各对梗死心肌组织的影响。方法将相同基因背景的SD雄性大鼠30只随机分成A、B、C三组。建立心肌梗死模型后,MSCs组注射MSCs 4×106cells/50μl。AdVEGF组注射AdVEGF 5×107pfu 50μl。Control组(对照组)注射无血清IMDM培养液50μl。移植前、移植后2、4周分别用超声检测心功能。病理中检测细胞存活分化和血管新生情况。结果MSCs组移植2、4周后AdVEGF组与Control组相比,心功能较移植前有明显改善(P<0.01),而且病理提示大部分MSCs己向心肌样细胞分化。MSCs组和AdVEGF组都有促血管新生作用,MSCs组为(5.94±1.67)mm;AdVEGF组(13.59±1.08)mm,Control组(对照组)无新生血管出现。结论移植于梗死心肌的骨髓间充质干细胞可以存活,并在一定程度上改善了受体的心功能。

人VEGF基因昆虫杆状病毒表达载体的构建

为了在昆虫杆状病毒表达系统表达人血管内皮细胞生长因子 (VEGF)基因 ,用HindⅢ对 pcDNA3 .1 /VEGF进行酶切 ,回收 5 75bp的VEGF片段 ,与 pFastBacI载体连接 ,得到含VEGF基因的转座载体 pFast/VEGF ,NcoI酶切鉴定方向 ;将其转化到含有穿梭载体杆粒 (Bacmid)的DH1 0Bac感受态细胞 ,得到重组杆状病毒穿梭载体Bacmid/VEGF ,采用琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增对重组转座载体、穿梭载体进行鉴定。将Bacmid/VEGF转染sf 9细胞 ,进行病毒重组及噬斑筛选。结果 :琼脂糖电泳得到杆粒 (Bacmid)DNA条带 ,PCR扩增得到 5 75bp的VEGF片段 ,病毒液在 1 0 - 7稀释度时出现噬斑 ,约 5 0个 /孔。说明已成功构建了重组杆状病毒穿梭载体并重组出杆状病毒。

转VEGF基因对血管损伤后平滑肌细胞增殖和表型的影响

目的观察局部转染pAdTrack CMV-VEGF165对动脉粥样硬化兔血管损伤后平滑肌细胞增殖和表型转变的影响.方法90只新西兰大白兔分为3组,Ⅰ组(30只)单纯拉伤腹主动脉;Ⅱ组(30只)拉伤后局部转染真核表达质粒pAdTrack CMV;Ⅲ组(30只)拉伤后局部转染pAdTrackCMV-VEGF165;每组按实验终点(术后3 d、1周、2周、4周和8周)分为5个亚组,术前1周开始予高脂饮食至实验终点,取拉伤段血管用于3H-TdR掺入实验、病理学检测和电镜观察平滑肌细胞表型变化.结果3H-TdR掺人实验结果显示,Ⅰ组和Ⅱ组在血管拉伤后3d3H-TdR掺入量增加(P＜0.05),2周时达到高峰(P＜0.01),以后逐渐下降,8周时恢复至正常,而Ⅲ组血管组织术后3 d同样出现3H-TdR掺入增加(P＜0.05),术后1周时3H-TdR掺入值明显低于Ⅰ组和Ⅱ组(P＜0.01),术后4周时3H-TdR掺入量接近正常;透射电镜观察显示Ⅰ组和Ⅱ组从术后3d开始出现合成型VSMC,2周时达到高峰,80%以上为合成型,至4周时,仍以合成型平滑肌细胞为主(60%),而Ⅲ组血管组织术后3 d时可见少量合成型平滑肌细胞(10%),1周时合成型VSMC约占30%,术后2周时90%为收缩型平滑肌细胞,4周时已无合成型平滑肌细胞.结论局部转染VEGF165基因可抑制平滑肌细胞增殖和表型改变,缩短修复时程.

Survivin、VEGF基因在非小细胞肺癌中的表达

目的通过检测Survivin、VEGF基因在非小细胞肺癌中的表达情况,探讨Survivin、VEGF基因阳性表达与肺癌临床病理特征的关系,以及二者在肺癌组织中表达的相关性。方法采用免疫组织化学检测40例非小细胞肺癌患者肺癌组织与癌旁正常组织中Survivin、VEGF基因的表达水平。结果 Survivin、VEGF基因在肺癌组织中的阳性表达率均显著高于其在癌旁正常组织中的表达(P<0.01),二者在肺癌组织中的表达呈显著正相关(χ2=8.5,P<0.01);Survivin、VEGF基因表达与非小细胞肺癌的病理类型、年龄、性别均无明显关系,而与细胞分化程度、TNM分期有一定关联,患者TNM分期越晚、细胞分化程度越低,Survivin、VEGF基因表达越高。结论 Survivin和VEGF基因可作为非小细胞肺癌的特异生成、抑制异性生物学标记物,二者的联合检测可为肺癌的诊断和靶向治疗、预后的判断等提供新的依据。

TMLR联合VEGF基因治疗缺血心肌后心肌灌注和代谢的变化

目的 :观察TMLR联合VEGFDNA1 65治疗后心肌灌注和代谢的变化。方法 :动物 (犬 )随机分成假手术组、心肌梗死组、TMLR组、TMLR +VEGF1 65cDAN组 (n =1 2 )。采用正电子断层扫描 (PET)检查不同时期实验区心室壁节段心肌灌注和代谢变化。结果 :TMLR联合VEGF1 65cDNA组治疗后 6周和 1 2周 ,前壁、前侧壁、前间壁灌注量和FDG明显高于单纯TMLR组 (P <0 0 5) ;TMLR组 6周和 1 2周缺血心肌对FDG摄入和心肌灌注较心肌梗塞组无统计学差异。结论 :TMLR +VEGF1 65cDNA治疗后 6周和 1 2周时心肌灌注量和心肌摄入FDG较单纯TMLR显著增加 ,提示成活心肌的数量显著增加和

VEGF基因表达与肝细胞癌生物学特性的研究

目的 :研究血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor ,VEGF)蛋白及mRNA与肝细胞癌生物学特性的关系。方法 :应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)及ABC免疫组化染色技术 ,检测 6 0例肝细胞癌中VEGFmRNA及蛋白表达情况 ,并分析它们与肝细胞癌临床及病理的关系。结果 :VEGFmRNA及蛋白的阳性表达率分别为 78 3%和 81 3% ,明显高于正常肝组织 (P <0 0 5 ) ;并且VEGF表达与肿瘤的病理分级、有无包膜、瘤栓、直径大小均有相关性 ;另外 ,VEGFmRNA和蛋白表达呈正相关关系。结论 :VEGFmRNA和蛋白表达水平越高 ,细胞恶性程度及侵袭、转移能力越强 。

微囊化转VEGF基因成肌细胞在全厚皮片移植中的动物实验研究

目的观察应用微囊化转VEGF基因成肌细胞与生理盐水对照的条件下,对提高大鼠全厚皮片移植成活率的差异性。方法(1)将应用pc DNA6/His A-VEGF质粒转染的成肌细胞进行微囊化;(2)筛选2016年1月购自吉林大学实验动物中心健康Wistar大鼠50只,进行标记序号,随机化分成微囊化组(A组)和对照组(B组),每组25只,背部剃毛,标记范围约4.0 cm×4.0 cm的范围,按标记范围切取制备全厚皮片,在切取皮片后的创面上,微囊化组给予多点注射转VEGF基因成肌细胞混悬液,每点0.1 m L,间隔1.0 cm,对照组给予等量生理盐水注射,然后将全厚皮片原位回植,打包包扎,放回笼中单笼饲养;(3)14 d后进行观察并摄影;(4)应用Image pro 5.0软件分别进行测算成活面积百分比;(5)进行统计分析,以观察两组间差异性及微囊化组的治疗作用。结果经统计分析,微囊化组的成活面积与对照组相比较,微囊化组成活面积(14.1±0.61)cm^2,对照组成活面积(13.5±0.55)cm^2,微囊化组成活面积百分比(88.0±3.6)%,对照组成活面积百分比(84.5±3.5)%。两组间差异有统计学意义(P<0.01),微囊化组全厚皮片移植的成活面积明显高于对照组(P<0.05)。结论微囊化转VEGF基因成肌细胞在全厚皮片移植受区创面多点注射,能显著提高全厚皮片移植的成活率。