探讨术前注射VEGF抗体对微创玻璃体手术治疗糖尿病性视网膜病变的影响

探究在糖尿病性视网膜病变(DR)患者接受微创玻璃体手术治疗前注射VEGF抗体的效果。方法 选取本院2022.08-2023.08接诊的58例DR患者,随机编号后,以奇偶数进行组别划分,命名为对比组(29例)、探究组(29例)。对比组单纯实施微创玻璃体手术,探究组术前注射VEGF抗体,比较临床疗效。结果 两组手术时长相当,(P>0.05);探究组治疗有效率及患者满意度(96.55%、93.10%)相较于对比组(89.66%、82.76%)更高,并发症发生率(3.45%)相较于对比组(24.14%)更低,黄斑中心凹视网膜厚度更低,患者术后眼压更低,视力更佳,(P<0.05)。结论 针对DR患者,在微创玻璃体术前注射VEGF抗体,能够有利于手术及预后安全性的提升,同时可对视力改善效果起到明显的积极效果。

龙葵碱联合VEGF抗体对人结肠癌鸡胚移植模型血管生成的影响

目的建立人结肠癌鸡胚移植模型,探讨龙葵碱、VEGF抗体及两者联合对人结肠癌细胞诱导肿瘤血管生成及肿瘤增殖的影响。方法将人结肠癌HT-29细胞鸡胚移植模型分为实验组和对照组,实验组加入龙葵碱、VEGF抗体和龙葵碱+VEGF抗体混合液,对照组加入磷酸盐缓冲液(PBS)液。通过立体显微镜照相、IPP 6.0图像分析软件分析图片;免疫组织化学方法检测CD34抗原和ki-67抗原,观察龙葵碱、VEGF抗体和龙葵碱联合VEGF抗体对肿瘤血管生成及肿瘤增殖的影响。结果肿瘤血管面积、CD34抗原和ki-67抗原表达:龙葵碱+VEGF抗体组明显优于单药VEGF抗体组和龙葵碱组,VEGF抗体组优于龙葵碱组,3组均明显优于对照组(P<0.01)。结论龙葵碱、VEGF抗体及两者联合时均能抑制人结肠癌HT-29细胞系诱导的肿瘤血管生成及肿瘤增殖,为抗肿瘤血管生成提供了一种新途径。

抗VEGF抗体及抗flt抗体对人喉癌HEP-2细胞系的生长抑制作用

目的：观察抗VEGF抗体及抗flt抗体对HEP－2人喉癌细胞生长的影响，探讨VEGF对HEP－2细胞的作用及作用方式。方法：将不同浓度的抗VEGF及抗flt抗体分别加入HEP－2细胞的培养液中，培养5天后测HEP－2细胞的活性（MTT法）。结果：不同浓度的VEGF抗体作用于HEP－2细胞时，浓度从10μg／ml至1μg／ml时，对HEP－2细胞的生长具有显著的抑制作用（P＜0．01），当VEGF浓度低于1μg／ml时，无明显抑制作用；抗flt抗体浓度从10μg／ml减至0．1μg／ml时，对HEP－2细胞的生长均有显著抑制作用（P＜0．01），当浓度低于0．1μg／ml时，抗flt抗体对HEP－2细胞的生长无显著抑制作用（P＜0．05）。结论：在体外培养条件下，中和VEGF抗体及封闭VEGF的受体flt对人喉癌HEP－2细胞的生长均有显著抑制作用，显示VEGF作为一种自分泌和旁分泌生长因子在喉癌的发生发展中发挥重要作用。

人源噬菌体抗体库的构建及抗VEGF抗体的初步筛选分析

应用噬菌体表面呈递技术构建人抗体组合文库 .筛选获得了结合血管内皮细胞生长因子( VEGF)的人噬菌体 Fab抗体 ,并对所获抗体的多样性进行了进一步分析 .从不同人群外周血淋巴细胞提取总 RNA,经反转录后采用家族特异性免疫球蛋白可变区基因引物与免疫球蛋白信肽序列引物 ,通过改变 PCR条件或半套式扩增分别获得全部亚型的轻、重链抗体 Fab段 ,并重组到噬粒载体 p Comb3H中 ,经电转化大肠杆菌 XL- 1 Blue,构建了 1 .5× 1 0 8完整组合抗体库 .利用 VEGF12 1对该库经过 4轮固相筛选后 ,获得 1 2个可与 VEGF特异结合的阳性克隆 .酶谱分析表明了所获抗体克隆的多样性 .为通过基因工程改造 ,进一步获得可用于临床的人源 VEGF抗体奠定了基础 .

抗VEGF抗体联合重组人可溶性TRAIL诱导白血病细胞K562凋亡的研究

本研究探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和抗血管内皮生长因子(VEGF)抗体对人慢性髓系白血病细胞K562的生长抑制和诱导凋亡的协同作用。将TRAIL和抗VEGF抗体单独及联合作用于K562细胞,应用CCK-8法检测各组的细胞抑制率和用流式细胞仪检测各组的细胞凋亡率。结果表明:以TRAIL 75、100和150ng/ml的浓度作用于K562细胞48小时的凋亡率分别为(4.26±0.67)%、(8.91±0.55)%、(11.71±0.78)%;抗VEGF抗体2.5、5和7.5μg/ml的浓度作用于K562细胞48小时的凋亡率分别为(3.95±0.69)%、(7.98±0.74)%和(10.26±0.83)%。以抗VEGF抗体2.5μg/ml+TRAIL 75 ng/ml或抗VEGF抗体5μg/ml+TRAIL100 ng/ml或抗VEGF抗体7.5μg/ml+TRAIL150 ng/ml作用于K562细胞48小时的细胞凋亡率分别为(22.16±0.93)%、(36.32±1.31)%和(49.19±0.71)%。抗VEGF抗体与TRAIL联合作用于K562细胞后,细胞抑制率及凋亡率显著高于单独应用TRAIL组或抗VEGF抗体组(p<0.05)。结论:TRAIL和抗VEGF抗体对K562细胞在诱导凋亡过程中具有协同作用。

抗VEGF抗体对骨肉瘤OS-732细胞血管生成及其肿瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨阻断血管内皮生长因子 (Vascularendothelialgrowthfactor ,VEGF)的血管生成作用对骨肉瘤OS 73 2细胞及血管内皮细胞增殖、凋亡的影响。方法 应用鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)模型 ,通过解剖显微镜血管计数 ,光镜HE染色 ,原位末端标记及PC NA免疫组化检测观察VEGF抗体对骨肉瘤血管生成及肿瘤增殖 ,凋亡状态的影响。结果 VEGF抗体组肿瘤区血管数目及瘤细胞数显著低于PBS对照组 ,肿瘤细胞凋亡指数显著高于PBS对照组 ,增殖指数两组差异不明显 ,同时VEGF抗体组凋亡的微血管内皮细胞增多 ,增殖期微血管内皮细胞少见。结论 VEGF抗体能显著抑制骨肉瘤OS 73 2血管生成 ,抑制内皮细胞增殖 ,促进内皮细胞凋亡 ,可能是VEGF抗体发挥抗血管生成作用的途径之一 ,并可能通过抑制血管形成而促进肿瘤细胞凋亡 ,最终达到抑制瘤细胞生长的作用。

TGF—β1，VEGF抗体等与2型糖尿病肾病患者并发高血压肾间质纤维化指标变化的相关性研究

目的探讨转化生长因子（TGF-β1）、血管内皮生长因子（VEGF）抗体、肿瘤坏死因子（TNF—α）、透明质酸（HA）、纤维连接蛋白（FN）、层黏连蛋白（LN）、Ⅳ型胶原（CⅣ）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）在2型糖尿病肾病患者并发高血压肾间质纤维化的发病机理及病程进展中表达的相关性。方法选择经诊断为2型糖尿病肾病并发高血压患者146例；同时选择40例健康正常人作对照组。应用酶联免疫分析法（ELISA）对TGF—β1，VEGF抗体，TNF—α进行检测，用化学发光分析法对HA，FN，LN，CⅣ，PCⅢ进行检测。结果2型糖尿病肾病并发高血压肾间质纤维化患者的TGF—β1，VEGF，VEGF抗体，TNF—α，FN，LN，CⅣ，PCⅢ表达显著上调（P〈0．01），较正常对照组差异有统计学显著性意义（P〈0．01），且与病情的进展呈正相关；而HA表达明显下调，较正常对照组差异有统计学显著性意义（P〈0．01），且与病情的进程呈负相关。结论生长因子（PEDF）是有效的血管生成抑制剂，对保持正常组织透明无血管的状态有重要作用，TGF-β1是促进纤维化的重要细胞因子，调节肌成纤维细胞分化和胶原合成，在肾纤维化发生发展中起着重要的作用。而VEGF是血管和淋巴内皮细胞的生长和分化及正常和异常血管新生的重要的调节因子，在生理和病理性血管新生中起重要作用。三者同时表达异常，可能提示肾间质纤维化患者免疫病理机理中的细胞活化模式，对肾间质纤维化患者的免疫机制和指导治疗有指导意义。

VEGF抗体抑制磨损颗粒诱导骨溶解的实验研究

目的通过观察局部注射VEGF及VEGF抗体对小鼠植骨气囊模型中磨损颗粒诱导骨溶解的影响,探讨VEGF在人工关节无菌性松动中的作用。方法取人工髋关节翻修术取出的金属关节假体柄,参照真空球磨法体外制备磨损颗粒,PBS配制成浓度为10 mg/mL颗粒悬液。取8～10周龄雌性昆明小鼠50只,体重约25 g。10只作为气囊植骨模型颅骨供体。剩余40只小鼠随机分为4组(n=10),分别为空白对照组(A组)、颗粒组(B组)、VEGF刺激组(C组)和VEGF抑制组(D组);小鼠背部皮下注射无菌空气制备气囊,第8天切开气囊植入颅骨骨片,制备植骨气囊模型。于植骨后第1天B、C、D组气囊内注入0.5 mL颗粒悬液,A组注入0.5 mL PBS。气囊制备期间第6、7天及植骨后隔天,C、D组气囊内分别注射0.2 mL重组人VEGF和Bevacizumab溶液,A、B组注射0.2 mL生理盐水。植骨2周后取囊壁连同骨片行HE染色、实时荧光定量PCR及ELISA检测。结果各组小鼠均存活至实验完成。大体观察见A组气囊红肿程度轻,新生血管少;B、C、D组气囊明显红肿,可见较多渗出及新生血管,其中C组最重,B组次之,D组介于A、B组间。组织学及分子生物学检测发现,B组囊壁明显炎性反应及骨溶解,囊壁厚度、细胞密度及TNF-α、IL-1β、VEGF表达均较A组明显增加(P<0.05);C组囊壁炎性反应及骨溶解最显著,以上观察指标均高于B组(P<0.05);D组囊壁亦可见炎性反应及骨溶解,但以上指标均低于B组(P<0.05),高于A组(P<0.05)。结论 VEGF在人工关节无菌性松动中具有促进炎性反应及骨溶解作用,局部给予VEGF抗体可抑制磨损颗粒诱导的骨溶解。

抗VEGF单克隆抗体偶联5-FU纳米微粒的初步研究

目的:为了提高5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)的抗癌活性,采用抗VEGF单克隆抗体与5-FU聚乳酸纳米微粒交联结合制备具有靶向功能的免疫纳米微粒。方法:采用抗VEGF单克隆抗体与已制备的5-FU聚乳酸纳米微粒(5-FU-NPs)以化学键偶联连接的方法制备具有靶向功能的5-FU免疫纳米微粒(5-FU-Ab-NPs),考察其形貌、粒径分布、体外释放和免疫活性等性能。结果:5-FU-Ab-NPs仍呈规则球形,粒径约为(202±23)nm,体外释放实验表明该5-FU-Ab-NPs与5-FU-NPs具有相似缓释特性,免疫学检测和电镜检视显示偶联后的抗VEGF单克隆抗体免疫活性保持原活性的80%以上。结论:5-FU-Ab-NPs保持原5-FU-NPs缓释药物的特点,具有双重活性功能,即免疫导向和缓释药物,有利于提高肿瘤局部药物浓度。

榄香烯和VEGF多克隆抗体联合应用对C_6胶质瘤增殖的抑制作用

目的探讨榄香烯和VEGF多克隆抗体联合应用对昆明小鼠皮下C6胶质瘤的抑制作用。方法建立昆明小鼠皮下C6胶质瘤模型,将32只接种成瘤后的小鼠随机分成4组,每组8只,Ⅰ组生理盐水、Ⅱ组榄香烯、Ⅲ组VEGF多克隆抗体、Ⅳ组榄香烯和VEGF多克隆抗体。治疗后定期测量肿瘤的大小,计算抑制率,镜下观察肿瘤组织病理切片,流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡率。结果Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组的抑制率分别为(43.2±3.6)%、(41.3±2.9)%、(51.9±4.1)%,Ⅳ组的抑制率低于Ⅱ组和Ⅲ组(P<0.05)。实验组肿瘤标本见到较多的坏死灶,其中肿瘤细胞可见较多的核破裂,肿瘤组织坏死程度和血管的减少量Ⅳ组多于Ⅲ组和Ⅱ组。Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组细胞凋亡率分别为(0.46±0.19)%、(12.9±1.70)%、(11.7±1.70)%、(19.4±1.32)%,Ⅳ组较Ⅱ组、Ⅲ组的凋亡率高(P<0.05)。结论榄香烯和VEGF多克隆抗体联合应用能更好抑制肿瘤组织的生长,具有协同的作用。

抗人膀胱癌抗VEGF双功能基因抗体制备及体外效应研究

目的 :研究制备抗人膀胱癌和抗血管内皮生长因子的双功能抗体 ,用以导向抑制肿瘤新生血管的形成。方法 :在制备抗人膀胱癌和抗血管内皮细胞生长因子单克隆抗体的基础上制备双功能抗体。结果 :双功能抗体的IC5 0为 10 - 9 5,抗血管内皮生长因子抗体的IC5 0为 10 - 8 9,抗人膀胱移行细胞癌单克隆抗体的IC5 0为 10 - 8 3。结论 :双功能抗体的有效率明显高于单克隆抗体。

抗VEGF抗体Fab片段在大肠埃希菌中的可溶性表达策略

抗血管内皮细胞生长因子(VEGF)抗体Fab片段能够抑制VEGF的促血管生成作用,在糖尿病性黄斑水肿等眼科疾病的治疗中有重要的应用价值。在基因工程中大肠埃希菌(Escherichia coli)是Fab片段蛋白的主要表达系统,然而Fab片段往往会在大肠埃希菌内形成不可溶的包涵体,而不具有生物活性。本研究从引入分子伴侣、重组蛋白诱导表达的温度、时间等方面入手,进行系统优化,使绝大部分Fab蛋白可以分泌到大肠埃希菌周质中,大大提高了抗VEGF抗体Fab片段的可溶性表达效率和生物学活性,为其工业生产奠定基础,同时也为其他种类重组Fab分子的可溶性表达提供借鉴。

VEGF单克隆抗体在胰腺缺血再灌注损伤中的保护作用

目的:探讨VEGF单克隆抗体对胰腺缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)损伤的保护作用及其机制。方法:采用钳闭大鼠腹腔干、肠系膜上动脉制备胰腺缺血再灌注损伤模型。应用ELISA试剂检测VEGF,TNF-α表达,并应用TUNEL法检测胰腺细胞凋亡,RT-PCR,蛋白质印迹法和免疫组织化学染色检测胰腺组织中Fas,FasLmRNA和蛋白的表达情况。结果:I/R组血清中的TNF-α,VEGF明显高于VEGF单抗组(P<0.01)。I/R组胰腺组织中TUNEL染色见典型的细胞核固缩及凋亡小体形成。应用VEGF单克隆抗体后,胰腺组织中胰腺细胞凋亡指数明显下降。和I/R组相比,胰腺组织中Fas,FasL mRNA和蛋白表达水平均明显降低,免疫组化亦显示Fas,FasL在VEGF单抗组中显色弱于I/R组。结论:VEGF单克隆抗体可以降低I/R过程中TNF-α,VEGF表达水平,并且抑制Fas的表达,抑制过度凋亡,减轻缺血再灌注对胰腺的损伤。

VEGF_(165)单克隆抗体对视网膜新生血管的抑制作用

目的 :探讨有效阻断视网膜新生血管发生的方法。方法 :对体外培养新生儿脐静脉血管内皮细胞进行血管内皮细胞生长因子 1 65 ( VEGF165)单克隆抗体、1 3-顺式维甲酸、INF- α、INF- γ4种药物筛选实验。用倒置显微镜观察细胞生长状态 ;用 MTT法测 A560 nm值 ,计算细胞增殖抑制率。结果 :VEGF165单克隆抗体组浓度在 2 0 0 0 mg· L-1时 ,对血管内皮细胞的增殖抑制率达 91 %。1 3-顺式维甲酸对细胞最高增殖抑制率是 61 % ;IFN- γ浓度在 2 0 0 0 mg·L-1时 ,对细胞增殖抑制率为 5 6%。IFN- α浓度在 2 0 0 0 mg·L-1时 ,细胞增殖抑制率均低于 40 %。结论

榄香烯和VEGF多克隆抗体联合应用对大鼠脑胶质瘤增殖的影响

目的:对Wistar大鼠脑胶质瘤增殖中应用VEGF多克隆抗体与榄香烯联合应用的抑制效果进行分析与探讨。方法:构建Wistar大鼠脑胶质瘤模型,此模型为脑胶质瘤模型,胶质瘤细胞为SHG-44,大鼠接种成瘤后将其随机分为4组,每组大鼠8只,A组大鼠给予生理盐水,B组大鼠给予榄香烯,C组大鼠给予VEGF多克隆抗体,D组大鼠给予VEGF多克隆抗体与榄香烯。镜下对肿瘤组织病理切片进行观察。结果:研究组肿瘤标本坏死灶较多,肿瘤细胞中含有大量核破裂,而对照组肿瘤标本具有较多血管数量,血管管壁增厚,肿瘤血管减少量与组织坏死程度D组明显多于B组与C组。结论:研究表明,VEGF多克隆抗体与榄香烯联合使用对肿瘤组织生长具有有效抑制作用,具有协同作用,VEGF多克隆抗体与榄香烯对细胞凋亡具有促进作用,两者联合使用存在协同效应。

榄香烯和VEGF多克隆抗体联合应用对C_6胶质瘤增殖抑制作用的研究

目的:研究榄香烯和VEGF多克隆抗体联合应用对昆明小鼠皮下C6胶质瘤的抑制作用。方法:建立昆明小鼠皮下C6胶质瘤模型,将接种成瘤后的小鼠随机分成4组,每组8只,组给予生理盐水,组给予榄香烯,组给予VEGF多克隆抗体,组给予榄香烯和VEGF多克隆抗体;镜下观察肿瘤组织病理切片。流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡率。结果:实验组肿瘤标本见到较多的坏死灶,其中肿瘤细胞可见较多的核破裂,对照组肿瘤标本血管数量较实验组多,血管管壁增厚,内皮细胞增生。肿瘤组织坏死程度和血管的减少量组多于组和组。结论:榄香烯和VEGF多克隆抗体联合应用能更好抑制肿瘤组织的生长,具协同的作用。榄香烯和VEGF多克隆抗体均可促进细胞凋亡,联合应用具有协同效应。

VEGF单克隆抗体对胰腺缺血再灌注损伤中细胞凋亡的影响

目的:从胰腺腺泡细胞凋亡的角度探讨血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体在胰腺缺血再灌注损伤中保护作用。方法:采用钳闭大鼠腹腔干、肠系膜上动脉制备胰腺缺血再灌注损伤模型,并应用细胞凋亡原位标记法(TUNEL)、免疫组化技术等检测VEGF单克隆抗体干预后对胰腺细胞凋亡及Bax,Bcl-2蛋白表达的影响。结果:干预组15,30,60 min胰腺细胞凋亡指数显著低于缺血再灌注组(P<0.01)。正常胰腺组织未见凋亡调控基因Bcl-2的表达,VEGF单克隆抗体干预后15,30,60 min胰腺细胞Bcl-2染色阳性率明显高于缺血再灌注组(P<0.01);正常胰腺组织见较弱的凋亡调控基因Bax的表达,而VEGF单克隆抗体干预后15,30,60 min胰腺细胞Bax染色阳性率明显低于缺血再灌注组(P<0.01)。结论:VEGF单克隆抗体能够通过抑制胰腺腺泡细胞的过度凋亡减轻胰腺炎的严重程度,该作用可能是通过促进抗凋亡Bcl-2基因表达,抑制促进凋亡基因Bax表达来实现的。

抗人膀胱癌/抗VEGF双功能基因抗体对血管内皮细胞增殖的影响

目的 研究抗人膀胱癌 /抗 VEGF双功能基因抗体体外抗血管内皮细胞增殖的活性。方法 MTT法检测抗人膀胱癌 /抗 VEGF双功能基因抗体对血管内皮细胞增殖的活性。结果 抗人膀胱癌 /抗 VEGF双功能基因抗体可以明显抑制血管内皮细胞增殖。结论 抗人膀胱癌 /抗VEGF双功能基因抗体能通过抗肿瘤新生血管形成而发挥抗肿瘤作用 ,从而为膀胱癌的治疗提供了一种新的思路。

抗VEGF单克隆抗体Ranibizumab玻璃体腔注射治疗渗出型老年性黄斑变性的临床疗效和安全性研究

目的 研究抗血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体Ranibizumab玻璃体腔注射治疗渗出型老年性黄斑变性的临床疗效和安全性.方法 随机选取我院2012-01~2015-05收治的渗出型老年性黄斑变性患者120例(147眼),依据治疗方法将这些患者分为抗VEGF单克隆抗体Ranibizumab玻璃体腔注射组(Ranibizumab组)和保守治疗组,各60例,对两组患者的血液黏性指标、OA、CRA处的血流动力学指标及治疗指标进行统计分析.结果 Ranibizumab组患者的全血粘度、PLT、PDW均显著低于保守治疗组(P<0.05),OA、CRA处的PSV、EDV均显著高于保守治疗组(P<0.05),眼压值、视力均显著高于保守治疗组(P<0.05),黄斑区视网膜厚度显著低于保守治疗组(P<0.05).结论 抗VEGF单克隆抗体Ranibizumab玻璃体腔注射治疗渗出型老年性黄斑变性的临床疗效显著,具有较高的安全性.

抗VEGF单克隆抗体生物学活性分析方法的建立及其应用

目的建立抗VEGF单克隆抗体生物学活性分析方法,并对实验条件进行优化及方法学验证。方法从新生儿脐带分离获取人脐静脉内皮细胞(HUVEC),使用第4~6代细胞进行活性检测。HUVEC接种96孔板于CO_2培养箱培养4 h后加入不同浓度的抗VEGF单克隆抗体——VEGF165混合物孵育48 h,加入CCK8显色4 h,酶标仪读取各孔OD450吸光值,采用四参数拟合绘制标准曲线,计算参比品和样品的IC50值,获取样品的相对活性。结果该方法专属性强,仅在抗VEGF单克隆抗体上呈现相应的剂量关系曲线,标准曲线拟合度r^2>0.99,精密度样品相对活性RSD<20%,方法在50%~200%活性范围内具有良好的准确性。用该方法对两个候选药分别进行6次重复性检测,候选药相对活性值分别为(95.80±3.29)%,(101.10±3.81)%。结论本研究建立的HUVEC增殖抑制法特异性高、重复性好,并具有良好的准确性及精密度,可用于抗VEGF单克隆抗体生物学活性的评估。