肿瘤相关巨噬细胞外泌体调控KRAS信号通路影响胰腺癌细胞糖酵解功能

目的 探究肿瘤相关巨噬细胞外泌体对胰腺癌细胞糖酵解的影响及机制。方法 THP-1细胞诱导分化为M0型和M2型巨噬细胞,并提取二者分泌的外泌体(M0 exo和M2 exo)。将胰腺癌细胞CAPAN-2和ASPC-1分为PBS组、M0 exo组、M2 exo组、M2 exo+siKRAS组,分别与等体积PBS、10μg/mL M0 exo、10μg/mL M2 exo、转染KRAS siRNA+10μg/mL M2 exo共孵育。透射电镜观察外泌体结构;CCK-8法检测各组细胞增殖能力;试剂盒检测葡萄糖摄取率和乳酸生成水平;Western blot检测外泌体标志物、KRAS蛋白表达和ERK1/2磷酸化水平。结果 THP-1诱导分化为表达标志蛋白Arg-1和IL-10的M2型巨噬细胞,M0 exo和M2 exo具有双层膜结构,粒径100 nm左右,表达外泌体标志蛋白CD9、CD81、TSG101。与PBS组比较,M2 exo组CAPAN-2和ASPC-1细胞增殖能力、葡萄糖摄取率力、乳酸生成水平显著增加(P<0.05),KRAS表达以及ERK1/2磷酸化水平显著增加(P<0.001)。与M2 exo组比较,M2 exo+siKRAS组CAPAN-2和ASPC-1细胞增殖能力、葡萄糖摄取率以及乳酸生成水平均显著下降(P<0.05)。结论 肿瘤相关巨噬细胞外泌体可通过激活KRAS信号通路促进胰腺癌细胞糖酵解。

VEGF/Akt信号通路在骨折大鼠愈合中作用机制及对炎症因子IL-6、TNF-α的影响

目的 观察血管内皮生长因子(VEGF)/蛋白激酶B(Akt)信号通路在骨折大鼠愈合中的作用机制及对炎症因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α的影响。方法 选取健康清洁级SD雄性大鼠30只,按随机原则分为假手术组、模型组与对照组,每组10只。其中假手术组行假手术,模型组与对照组建立大鼠股骨骨折模型,对照组通过尾静脉注射经慢病毒转染高表达VEGF的骨髓间充质干细胞处理。4 w后通过四点断裂实验分析愈合后股骨的力学参数,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中成骨标记物骨源性碱性磷酸酶(BALP)、IL-6与TNF-α水平,通过苏木素-伊红(HE)染色观察股骨标本病理学变化,通过RT-聚合酶链反应(PCR)检测VEGF与p-Akt水平,通过Western印迹检测骨痂组织中p-Akt、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、IL-6、TNF-α蛋白水平。结果 对照组骨折部位承受的最大力及韧性均显著高于模型组(P<0.05)。对照组外周血中BALP水平显著高于模型组,IL-6与TNF-α水平显著低于模型组(P<0.05)。与模型组相比,对照组骨折部位能观察到广泛的新骨生成,且骨组织中VEGF、p-Akt mRNA水平明显升高(P<0.05)。与模型组相比,对照组骨痂组织中eNOS与p-Akt蛋白表达显著上调,IL-6与TNF-α蛋白表达显著下调(P<0.05)。结论 激活VEGF/Akt信号通路能促进骨折大鼠的愈合,且能够抑制炎症反应。

祛腐生肌外治法对糖尿病溃疡大鼠血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其相关信号通路影响的meta分析和系统评价

目的:系统评价中药外用祛腐生肌法对糖尿足溃疡(DFU)大鼠模型血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其相关信号通路的影响并进行Meta分析。方法:在中国知网、万方、PubMed等数据库进行文献检索,检索时间自建库至2022年4月。根据SYRCLE的偏倚风险工具对每一篇纳入文献的研究质量进行评价。使用Review Manager 5.4.1软件根据Cochrane系统评价方法进行Meta分析。结果:包括508只大鼠的19项研究,纳入研究的质量分数都在3~5分。Meta分析结果显示,无论是促进糖尿病溃疡大鼠创面组织中VEGF蛋白表达、增加创面组织中VEGF mRNA水平还是提高大鼠血清中VEFG因子含量,与对照组相比,祛腐生肌治疗组都具有明显的优势[SMD=1.39,95%CI(0.67,2.10),P=0.0002;SMD=5.53,95%CI(0.58,10.11),P=0.03;SMD=1.91,95%CI(0.73,3.09),P=0.002]。亚组分析显示,当对照组为常规换药组时,中药外用促进创面组织中VEGF蛋白表达的优势明显[SMD=2.02,95%CI(1.27,2.78),P=0.0002;SMD=2.06,95%CI(0.16,3.96),P=0.03],当对照组为生长因子换药组时,尚不能证明二者在促进创面组织中VEGF蛋白表达方面有差异[SMD=0.04,95%CI(-0.52,0.61),P=0.88]。同时研究表明,中药外用可能是通过调控HIF-1/VEGF/VEGFR-2信号通路、PI3K/AKT信号通路、Wnt/β-catenin信号通路中的上下游分子的表达,从而影响尿病溃疡大鼠创面组织及血清中VEGF的表达水平,这些分子包括HIF-1α[SMD=2.35,95%CI(1.11,3.59),P=0.0002]、VEGFR-2[SMD=4.52,95%CI(0.63,8.42),P=0.02]、PI3K[SMD=-0.94,95%CI(-1.08,-0.80),P=0.00001]、AKT[SMD=0.28,95%CI(0.22,0.34),P<0.00001]、β-catenin[SMD=0.23,95%CI(0.19,0.27),P<0.00001]、GS3K-β[SMD=0.44,95%CI(0.06,0.82),P=0.02]、Cym-c[SMD=-0.47,95%CI(-0.72,-0.22),P=0.0002]。结论:中药外用祛腐生肌法治疗DFU大鼠创面与其促进VEGF在创面和血清中的表达相关,其机理可能与影响HIF-1α/VEGF/VEGFR-2、Wnt/β-catenin、PI3K/AKT等信号通路的上下游分子有关,但仍需更多的大样本、高治疗、设计更合理的实验来进一步验证。

Hippo信号通路及其相关miRNA在阿尔茨海默病与帕金森病中的潜在作用机制

以阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)和帕金森病(Parkinson’s disease,PD)为代表的神经退行性疾病主要特征是神经元进行性的不可逆丢失,导致不同程度的病理变化和认知功能的丧失,目前仍无有效的治疗方法。随着全球老龄化问题的加重,神经退行性疾病的患病人数正在快速上升,已发展成为严重的全球公共卫生事件,迫切需要开发有效的治疗手段。Hippo信号通路是一种高度进化保守的途径,在细胞增殖、分化、发育以及凋亡等生物过程中发挥重要作用,并与miRNA互相作用产生广泛的生物效应,在多种疾病的发生中发挥作用。但在神经退行性疾病中对Hippo信号通路与miRNA的探讨相对缺乏。本文通过梳理Hippo信号通路以及相关miRNA在AD与PD中的作用机制,探讨其内在联系,以期拓展神经退行性疾病的治疗视野,为神经退行性疾病的防治提供新的思路和视角。

HIPPO信号通路与T2DM和恶性肿瘤相关性的研究进展

2型糖尿病(T2DM)与多种恶性肿瘤的风险升高及不良预后具有相关性,但针对两种疾病关联机制的研究较少。HIPPO信号通路在细胞的增殖、生长、凋亡及肿瘤的发生中起着关键作用。本文通过总结多项研究,提出T2DM可调节HIPPO信号通路并进一步影响恶性肿瘤发生及发展的观点。HIPPO信号通路可受糖代谢调节,在T2DM患者及小鼠模型的不同组织中观察到,HIPPO信号通路的核心成分Yes-相关蛋白(YAP)表达增加及活性提高,且YAP的表达与T2DM的一些临床表现具有相关性。在恶性肿瘤中,YAP被认为是可促进肿瘤的发生及发展的癌基因。在一些恶性肿瘤中,合并T2DM的患者相比未合并T2DM的患者,其YAP的表达增加,并且具有一些恶性进展的表现。因此,HIPPO信号通路极可能是T2DM影响恶性肿瘤的中间信号通路。

茯苓酸调节PI3K/AKT/NF-κB信号通路对大鼠幽门螺旋杆菌相关性胃炎的治疗作用

目的 探讨茯苓酸(PA)对大鼠幽门螺旋杆菌(Hp)相关性胃炎的治疗效果及作用机制。方法 建立Hp相关性胃炎大鼠模型;所有大鼠分为对照组(CT组)、模型组(M组)、PA低剂量组(PA L组)和PA高剂量组(PA H组)、PA H+磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)激活剂(740 Y-P)组;评估各组大鼠胃黏膜损伤指数(UI),透射电子显微镜观察胃黏膜细胞形态学,HE染色评价胃黏膜病理学特征,ELISA检测胃组织白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-10、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、超氧化物歧化酶(SOD)的水平,Western blot法检测PI3K、磷酸化-PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT、核因子(NF)-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达。结果 与CT组比较,M组大鼠胃黏膜糜烂,上皮水肿、充血、溃疡严重,上皮细胞固缩,炎性细胞浸润,UI、IL-6、TNF-α、iNOS以及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达水平升高,IL-10和SOD水平降低(P<0.05);与M组比较,PA L组、PA H组大鼠胃黏膜损伤改善,炎性细胞浸润减少,UI、IL-6、TNF-α、iNOS以及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达水平降低,IL-10和SOD水平升高(P<0.05);与PA H组比较,PA H+740 Y-P组大鼠胃黏膜病理损伤加重,上皮细胞固缩,UI、IL-6、TNF-α、iNOS以及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达水平升高,IL-10和SOD水平降低(P<0.05)。结论 PA可能通过抑制PI3K/AKT/NF-κB信号通路发挥对大鼠Hp相关性胃炎的治疗作用。

刺络拔罐联合骨痹散外敷治疗膝骨关节炎疗效观察及对软骨组织相关信号通路的影响

目的:观察刺络拔罐联合骨痹散外敷治疗膝骨关节炎的疗效及对软骨组织相关信号通路的影响。方法:选取72例膝骨关节炎患者作为研究对象,按随机数字表法分为观察组及对照组各36例。对照组给予骨痹散外敷,观察组给予刺络拔罐联合骨痹散外敷治疗,2组均治疗4周。比较2组临床疗效,比较2组治疗前后疼痛视觉模拟评分法(VAS)评分、“起立-行走”计时测试(TUGT)、中医证候积分、最大主动关节活动度(AROM)、膝关节评分表(KSS)、西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎指数(WOMAC)、软骨组织相关信号通路指标值[白细胞介素-1β(IL-1β)、环氧化酶-2(COX-2)]的变化。结果:观察组临床疗效总有效率为97.22%,对照组为83.33%,2组临床疗效比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗2周、4周后,2组VAS评分、TUGT指标值均较治疗前下降(P<0.05),观察组VAS评分、TUGT指标值均低于对照组(P<0.05)。治疗后,2组关节疼痛、胫软膝酸、活动不利、动作牵强中医证候积分均较治疗前下降(P<0.05),观察组上述4项中医证候积分均低于对照组(P<0.05)。治疗2周、4周后,2组AROM活动度、KSS指标值均较治疗前升高(P<0.05),观察组AROM活动度、KSS指标值均高于对照组(P<0.05)。治疗后,2组疼痛、僵硬、日常生活难度WOMAC评分均较治疗前下降(P<0.05),观察组上述3项WOMAC评分均低于对照组(P<0.05)。治疗后,2组IL-1β、COX-2指标值均较治疗前升高(P<0.05),观察组IL-1β、COX-2指标值均高于对照组(P<0.05)。结论:刺络拔罐联合骨痹散外敷治疗膝骨关节炎疗效较好,能减退关节肿痛程度,改善膝关节活动度,促进患者自主生活能力的恢复,有效缓解关节疼痛、活动不利等症状。

桃红四物汤治疗冠心病的疗效及对患者神经体液、HIF-1α/VEGF信号通路的影响

目的:研究桃红四物汤治疗冠心病的疗效及对患者神经体液、缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)/血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)信号通路的影响。方法:选取2020年2月至2023年3月我院收治的200例冠心病患者作为研究对象,按建档编号的单、双号将其分为对照组和观察组,各100例。对照组采用常规西医治疗,观察组在对照组的基础上增加服用桃红四物汤治疗。比较两组临床疗效、动脉弹性、神经体液、HIF-1α/VEGF信号通路相关因子表达和不良反应。结果:治疗4 w后,观察组治疗总有效率明显高于对照组(P<0.05);两组小动脉震荡指数(C2)和大动脉顺应指数(C1)均明显升高,且观察组明显高于对照组(P<0.05);两组醛固酮(Aldosterone,ALD)、心钠素(Atrial natriuretic peptide,ANP)、脑钠素(Brain natriuretic peptide,BNP)均明显降低,且观察组ANP、BNP明显低于对照组(P<0.05),但两组ALD无明显差异(P>0.05);两组HIF-1α、VEGF均明显降低,且观察组明显低于对照组(P<0.05);两组转化生长因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β)均明显升高,且观察组明显高于对照组(P<0.05);两组不良反应发生率无明显差异(P>0.05)。结论:桃红四物汤可增强冠心病患者动脉弹性及临床疗效,调节神经体液,这可能与调节HIF-1α/VEGF信号通路有关,且安全性较高。

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路观察白藜芦醇对炎症相关性结直肠癌的影响

目的基于Toll样受体4/髓样分化因子88/核转录因子κB(TLR4/MyD88/NF-κB)信号通路探究白藜芦醇(Res)对炎症相关性结直肠癌(CAC)的影响。方法小鼠随机分为对照组(Control)、模型组(Vehicle)、低浓度Res组(Res low)、高浓度Res组(Res high)。利用氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠(AOM/DSS)构建小鼠CAC模型,并分别给予Res和蒸馏水灌胃治疗。比较各组小鼠结直肠肿瘤数目和结直肠状态;ELISA检测血清白介素(IL)-1β、IL-6、IL-10和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;免疫组化染色检测结直肠组织环氧化酶2(COX-2)、Ki-67、E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白水平;qRT-PCR和Western blotting法检测结直肠组织TLR4、MyD88、NF-κB水平。结果与Control组比较,Vehicle组小鼠结直肠肿瘤增多、结肠组织损伤严重,血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平明显升高(P<0.05),结直肠组织COX-2、Ki-67、TLR4、MyD88、NF-κB表达水平升高(P<0.05),IL-10、E-cadherin表达水平降低(P<0.05)。与Vehicle组比较,Res low组、Res high组上述指标均有所缓解,具有明显的Res剂量依赖性(P<0.05)。结论Res可通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路,降低结直肠炎症反应,抑制结直肠癌的恶性增殖和转移,从而减轻CAC小鼠肠道损伤。

基于PI3K/PKB信号通路变化探究清胰汤在急性胰腺炎相关性肺损伤治疗中的应用价值及作用机制

目的:基于磷脂酰肌醇3羟激酶(PI3K)/磷酸化蛋白激酶B(PKB)信号通路变化探究清胰汤在急性胰腺炎相关性肺损伤治疗中的应用价值及作用机制。方法:选取2020年8月~2022年11月我院收治的98例急性胰腺炎相关性肺损伤患者,随机分为对照组与观察组各49例,对照组给予常规西药治疗,观察组在对照组基础上加用中药清胰汤治疗,均治疗2周,比较两组患者的临床疗效,肠胃恢复状况(发热、腹胀腹痛、恶心呕吐及肠鸣音恢复时间),血氧指标[血氧分压(PaO_(2))、氧合指数(OI)水平],血清学指标[淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LPS)、PI3K、PKB水平],生活质量[生活质量核心问卷(QLQ-C30)评分]以及不良反应发生情况。结果:治疗后,观察组患者的总有效率为91.84%高于对照组的73.47%(P<0.05);观察组患者恶心呕吐、腹胀腹痛、发热、肠鸣音等肠胃状况恢复时间均短于对照组(P<0.05);观察组患者的PaO_(2)、OI水平均高于对照组(P<0.05);观察组患者的血清AMY、LPS、PI3K、PKB水平均低于对照组(P<0.05);观察组患者的QLQ-C30评分低于对照组(P<0.05);两组患者均未见有明显严重不良反应发生,且两组间不良反应发生率比较无统计学差异(P>0.05)。结论:清胰汤对急性胰腺炎相关性肺损伤有较好的临床治疗效果,可有效缓解患者症状,提高生活质量,用药安全性好,PI3K/PKB信号通路激活被抑制是其主要作用机制之一。

水苏碱调节Hippo-YAP信号通路对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的神经保护作用

目的探究水苏碱(stachydrine,STA)对缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)新生大鼠的神经保护作用,并分析其作用机制。方法将新生SD大鼠随机分为假手术组、HIBD组、STA低剂量(5 mg/kg)组、STA中剂量(10 mg/kg)组、STA高剂量(20 mg/kg)组、维替泊芬(10 mg/kg)+STA高剂量(20 mg/kg)组,除假手术组外,其余大鼠构建HIBD大鼠模型。对各组大鼠进行神经功能缺损评分,采用Morris水迷宫实验进行认知功能评价,测定各组大鼠脑含水量和脑指数,HE染色、尼氏染色观察脑组织神经元损伤,TUNEL染色观察脑组织神经元细胞凋亡情况,Western blot法检测YES相关蛋白(YES associated protein,YAP)、p-YAP、哺乳动物STE20样蛋白激酶1(mammalian sterile 20-like kinase 1,MST1)、p-MST1、具有PDZ基序的转录共激活因子(transcriptional coactivator with PDZ-binding motif,TAZ)蛋白表达。结果与假手术组比较,HIBD组海马组织损伤加重,尼氏小体减少(P<0.05),神经功能缺损评分、逃避潜伏期、脑组织含水量、脑指数、神经元细胞凋亡率、p-YAP/YAP比值、p-MST1/MST1比值显著增加(P<0.05),穿越平台次数、TAZ表达显著降低(P<0.05);与HIBD组相比,STA低、中、高剂量组海马组织损伤改善,尼氏小体增加(P<0.05),神经功能缺损评分、逃避潜伏期、脑组织含水量、脑指数、神经元细胞凋亡率、p-YAP/YAP比值、p-MST1/MST1比值显著降低(P<0.05),穿越平台次数、TAZ表达显著增加(P<0.05);与STA高剂量组相比,维替泊芬+STA高剂量组海马组织损伤加重,尼氏小体减少(P<0.05),神经功能缺损评分、逃避潜伏期、脑组织含水量、脑指数、神经元细胞凋亡率、p-YAP/YAP比值、p-MST1/MST1比值显著增加(P<0.05),穿越平台次数、TAZ表达显著降低(P<0.05)。结论STA可能通过调控Hippo-YAP信号通路、减少神经损伤和神经元细胞凋亡、改善神经功能,发挥对HIBD新生大鼠的神经保护作用。

金合欢素调节Sirt1/AMPK/Nrf2信号通路对糖尿病白内障大鼠氧化应激损伤的影响

目的探讨金合欢素对糖尿病白内障(DC)大鼠氧化应激损伤的影响及其对沉默调节蛋白1(Sirt1)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路的调控作用。方法60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、金合欢素低剂量组、金合欢素高剂量组、金合欢素+Sirt1抑制剂(EX527)组,除对照组以外均构建DC大鼠模型,其中,金合欢素低剂量组、金合欢素高剂量组大鼠分别经颈部皮下注射10 mg·kg^(-1)、20 mg·kg^(-1)的金合欢素,金合欢素+EX527组大鼠经颈部皮下注射20 mg·kg^(-1)金合欢素,均为每天2次,同时金合欢素+EX527组大鼠经皮下埋入渗透微型泵每天泵入3.5 mg·kg^(-1)EX527,其余组别均泵入等量生理盐水,给药持续4周。给药结束后,测量血压和空腹血糖(FBG),裂隙灯照射法观察大鼠晶状体混浊状况,HE染色观察晶状体组织病理学变化,ELISA测定血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β的含量,Western blot检测Sirt1、p-AMPK、AMPK、Nrf2蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组大鼠晶状体上皮细胞呈片状、条索状,发生迁移性聚集,收缩压、FBG、晶状体混浊评分、MDA、IL-6、IL-1β水平均升高,SOD、GSH-Px含量及Sirt1、p-AMPK/AMPK、Nrf2蛋白表达水平均降低(均为P<0.05);与模型组比较,金合欢素低、高剂量组大鼠晶状体上皮细胞迁移性聚集现象改善,收缩压、FBG、晶状体混浊评分、MDA、IL-6、IL-1β水平均降低,SOD、GSH-Px含量及Sirt1、p-AMPK/AMPK、Nrf2蛋白表达水平均升高(均为P<0.05);与金合欢素高剂量组比较,金合欢素+EX527组晶状体上皮细胞形态改变和聚集现象加重,收缩压、FBG、晶状体混浊评分、MDA、IL-6、IL-1β水平均升高,SOD、GSH-Px含量及Sirt1、p-AMPK/AMPK、Nrf2蛋白表达水平均降低(均为P<0.05)。结论金合欢素可能通过激活Sirt1/AMPK/Nrf2通路保护DC大鼠免受氧化应激损伤。

紫铆因通过激活SIRT1介导FOXO1/NF-κB信号通路改善坐骨神经损伤

目的探讨紫铆因诱导SIRT1激活对大鼠坐骨神经损伤的影响及其可能的机制。方法将30只大鼠随机分为假手术组、坐骨神经损伤组和紫铆因组,每组10只。分别于建立大鼠坐骨神经损伤模型手术当天、术后第7天和第14天检测各组大鼠BBB运动评分和坐骨神经功能指数;术后第14天取材,通过HE染色观察各组大鼠坐骨神经病理学改变,通过TUNEL实验检测各组大鼠坐骨神经细胞凋亡水平,通过Western blotting检测各组大鼠坐骨神经BDNF、MBP、GAP-43、SIRT1、FOXO1、Keap1和NF-κB蛋白表达水平。结果与坐骨神经损伤组大鼠相比,紫铆因组坐骨神经损伤大鼠BBB运动评分和坐骨神经功能指数增加,坐骨神经病理损伤改善,坐骨神经细胞凋亡水平降低,坐骨神经BDNF、MBP、GAP-43和SIRT1蛋白表达水平增高,FOXO1、Keap1和NF-κB蛋白表达水平降低。结论紫铆因可通过上调坐骨神经损伤大鼠SIRT1表达抑制FOXO1/NF-κB信号通路激活,继而改善大鼠坐骨神经病理损伤。

槲皮素预处理ALI大鼠肺组织损伤、炎症/氧化应激反应、铁死亡及Nrf2/HO-1信号通路激活情况观察

目的观察槲皮素灌胃预处理的LPS诱导急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织损伤、炎症反应、氧化应激反应、铁死亡及Nrf2/HO-1信号通路激活情况,以探讨槲皮素对ALI的预防作用及机制。方法24只SD大鼠分为槲皮素低、中、高剂量组和阳性对照组(地塞米松)、模型组、正常对照组。槲皮素低、中、高剂量组以25、50、100 mg/kg槲皮素灌胃,1次/天,连续7 d;槲皮素灌胃处理的第4天在大鼠气管内滴注5 mg/kg LPS;阳性对照组以地塞米松1.04 mg/kg灌胃,其余处理同槲皮素组;模型组以生理盐水灌胃,1次/天,连续7天,其余处理同槲皮素组;正常对照组以生理盐水连续灌胃7 d。末次灌注给药后,观察各组肺组织损伤(肺功能及肺组织病理改变、纤维组织阳性表达率、肺泡上皮细胞凋亡率)、炎症反应(肺泡灌洗液TNF-α、IL-6、IL-1β)、氧化应激反应(肺泡灌洗液SOD、GSH、MDA,肺组织ROS)、铁死亡(Fe^(2+)水平)及Nrf2/HO-1信号通路激活[肺组织核因子红细胞2相关因子2(Nfr2)、血红素加氧酶1(HO-1)、超氧化物歧化酶2(SOD2)、过氧化氢酶(CAT)蛋白]情况。结果与正常对照组比较,模型组PaCO_(2)水平升高,PaO_(2)、SaO_(2)水平降低(P均<0.01);肺组织可见肺泡上皮细胞变性坏死,纤维组织阳性表达率高;肺泡上皮细胞凋亡率高;肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6、IL-1β水平均升高,SOD、GSH水平降低,MDA水平升高,肺组织ROS表达水平升高,肺泡灌洗液中Fe^(2+)水平升高(P均<0.05)。与模型组相比,槲皮素中、高剂量组和阳性对照组中PaCO_(2)均降低(P均<0.05),槲皮素高剂量组PaO_(2)和SaO_(2)水平升高(P均<0.05);槲皮素高剂量组与阳性对照组肺组织炎性浸润与纤维增生明显减少,肺泡恢复正常生理结构;槲皮素低、中、高剂量组和阳性对照组肺纤维组织阳性表达率均下降(P均<0.05),其中槲皮素高剂量组肺纤维组织阳性表达率最低;槲皮素低、中、高剂量组和阳性对照组肺泡上皮细胞凋亡率均降低(P均<0.01);槲皮素低、中、高剂量组和阳性对照组肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6、IL-1β水平均降低、SOD、GSH水平升高、MDA水平降低,肺组织ROS表达水平降低(P均<0.01),肺泡灌洗液中Fe^(2+)水平降低。与正常对照组比较,模型组肺组织中CAT、HO-1、Nrf2、SOD2蛋白表达水平低(P均<0.01);与模型组比较,槲皮素中、高剂量组和阳性对照组肺组织中CAT、HO-1、Nrf2、SOD2蛋白表达水平高(P均<0.05)。结论槲皮素灌胃预处理的ALI大鼠肺组织损伤、炎症反应、氧化应激反应、铁死亡情况减轻,Nfr2/HO-1信号通路激活;槲皮素灌胃预处理可预防LPS诱导的大鼠ALI,可能通过抑制炎症反应、氧化应激反应及铁死亡而起作用;槲皮素可能通过上调Nfr2/HO-1信号通路而抑制炎症反应、氧化应激反应及铁死亡;50、100 mg/kg槲皮素均对LPS诱导的大鼠ALI起预防作用,以100 mg/kg槲皮素的作用效果更佳。

紫草素调节Nrf2/HO-1信号通路对实验性大鼠肉芽肿性小叶性乳腺炎的治疗作用研究

目的探究紫草素(Shikonin,SHI)通过调节核因子-红细胞2型相关因子2/血红素加氧酶(Nrf2/HO-1)信号通路对肉芽肿性小叶性乳腺炎模型大鼠的影响及作用机制。方法建立肉芽肿性小叶性乳腺炎(GLM)大鼠模型,将大鼠分为对照组(Control组)、模型组(GLM组)、紫草素低剂量组(SHI-L组,17.5 mg·kg^(-1)·d^(-1)SHI)、紫草素中剂量组(SHI-M组,35 mg·kg^(-1)·d^(-1)SHI)、紫草素高剂量组(SHI-H组,70mg·kg^(-1)·d^(-1)SHI)和紫草素高剂量+Nrf2抑制剂ML385组(SHI-H+ML385组,70 mg·kg^(-1)·d^(-1)SHI+14 mg·kg^(-1)·d^(-1)ML385)。HE染色观察乳腺组织病理变化情况;ELISA检测乳腺组织中IL-1β、TNF-α、IL-8、T-AOC、SOD、GSH、MPO、NAGase和ROS水平;免疫荧光检测NLRP3表达;Western blotting检测Nrf2和HO-1蛋白表达。结果与Control组相比,GLM组大鼠乳腺小叶完全被破坏、大片结节样慢性肉芽肿炎性病灶生成,乳腺小叶组织边界不清,腺叶内出现空泡,伴有大量淋巴细胞及中性粒细胞浸润;IL-8、IL-1β、TNF-α、ROS、MPO和NAGase水平、NLRP3阳性表达率显著增加(P<0.05),T-AOC、SOD和GSH水平、Nrf2和HO-1蛋白表达显著降低(P<0.05)。与GLM组相比,SHI-L组、SHI-M组和SHI-H组乳腺组织病变逐渐减轻;IL-8、IL-1β、TNF-α、ROS、MPO和NAGase水平、NLRP3阳性表达率依次降低(P<0.05),T-AOC、SOD和GSH水平、Nrf2和HO-1蛋白表达依次升高(P<0.05)。与SHI-H组相比,SHI-H+ML385组乳腺组织病变加重;IL-8、IL-1β、TNF-α、ROS、MPO和NAGase水平、NLRP3阳性表达率显著增加(P<0.05),T-AOC、SOD和GSH水平、Nrf2和HO-1蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论紫草素发挥抗炎抗氧化作用改善大鼠肉芽肿性小叶性乳腺炎,其机制可能与激活Nrf2信号通路,上调HO-1表达有关。

扁蒴藤素调节YAP/TAZ信号通路对创伤性关节炎大鼠的治疗作用研究

目的探究扁蒴藤素(PM)调节Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)信号通路对创伤性关节炎(PTOA)大鼠的治疗作用。方法将SD雄性大鼠随机分为对照组、PTOA组、低剂量PM组(PM-L组,100 mg/kg PM)、高剂量PM组(PM-H组,200 mg/kg PM)和高剂量PM+YAP抑制剂VTPF组(PM-H+VTPF组,200 mg/kg PM+10 mg/kg VTPF),每组12只。记录大鼠热痛阈值、压痛阈值的变化。HE染色观察大鼠软骨组织病理学变化,并进行Mankin s评分,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠软骨组织中炎症因子一氧化氮(NO)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-3水平。TUNEL染色观察大鼠软骨组织细胞凋亡的情况。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测大鼠软骨组织TAZ、IL-1β、TNF-αmRNA水平。Western Blot检测大鼠软骨组织YAP/TAZ信号通路相关蛋白的表达情况。结果与对照组相比,PTOA组大鼠热痛阈值、压痛阈值、软骨组织YAP磷酸化水平、TAZ蛋白水平与mRNA水平显著降低(P<0.05),软骨组织IL-1β、TNF-α及其mRNA水平、NO、MMP-1、MMP3水平、细胞凋亡率、Mankin s评分显著升高(P<0.05),HE显示软骨层变薄,结构不清晰,软骨细胞大量丢失、排列紊乱。与PTOA组相比,PM-L组、PM-H组大鼠相关指标变化与上述相反(P<0.05),软骨组织病变减轻。YAP抑制剂VTPF减轻了PM对PTOA的治疗作用。结论PM可能通过激活YAP/TAZ信号通路,对PTOA大鼠具有一定的治疗作用。

常压高浓度氧对新生大鼠脑微血管内皮细胞损伤与Nrf2/HO-1信号通路的影响分析

目的探究常压高浓度氧(NBO)对新生大鼠脑微血管内皮细胞损伤及核因子E2相关因子2/血红素氧合酶-1(Nrf2/HO-1)信号通路的影响。方法取新生SD大鼠45只,采用随机数字表法分为常氧组、NBO组和NBO+Nrf2激活剂组,每组各15只。常氧组大鼠置于普通空气(21%氧气)中饲养,NBO组和NBO+Nrf2激活剂组大鼠置于90%常压氧气饲养,NBO+Nrf2激活剂组每日灌胃5 mg/kg Nrf2激动剂莱菔硫烷。测定脑组织伊文思蓝(EB)含量,采用酶联免疫法检测血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)含量,干湿重法检测脑组织含水量,HE染色和TUNEL染色观察脑组织病理变化,蛋白质印迹法检测海马组织Nrf2/HO-1信号通路蛋白表达,水迷宫检测大鼠认知功能。结果与常氧组比较,NBO组脑组织EB、VEGF、MMP-9含量及脑组织含水量升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与NBO组比较,NBO+Nrf2激活剂组脑组织EB、VEGF、MMP-9含量及脑组织含水量降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。病理染色结果显示,常氧组大鼠神经细胞形态及结构完整,未见明显病理变化和细胞凋亡;NBO组神经细胞形态及结构不规则,出现明显的水肿和空泡,并伴有大量的凋亡细胞;NBO+Nrf2激活剂组脑组织病理损伤较NBO组明显减轻。与常氧组比较,NBO组脑组织Nrf2、HO-1蛋白相对表达量降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与NBO组比较,NBO+Nrf2激活剂组Nrf2、HO-1蛋白相对表达量升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与常氧组比较,NBO组第2~4天逃避潜伏期延长,穿越平台次数减少,差异均有统计学意义(P<0.05);与NBO组比较,NBO+Nrf2激活剂组第2~4天逃避潜伏期缩短,穿越平台次数增多,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论NBO可诱导新生大鼠脑微血管内皮细胞损伤,导致远期认知功能障碍,可能与下调Nrf2/HO-1信号通路表达有关。

苦参碱调节RhoA-ROCK信号通路对冠心病模型大鼠Th17/Treg细胞平衡的影响

目的探讨苦参碱(Matrine)对冠心病(coronary heart disease,CHD)大鼠辅助T细胞17(helper T cell 17,Th17)/调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)细胞平衡及Ras同源基因家族成员A(RhoA)-Rho相关的卷曲螺旋激酶(ROCK)信号通路的影响。方法建立冠心病模型,将实验大鼠分为对照组、模型组、苦参碱低剂量(50 mg·kg^(-1))组、苦参碱高剂量(200 mg·kg^(-1))组及苦参碱高剂量(200 mg·kg^(-1))+LPA组(10 mg·kg^(-1))。超声心动图进行大鼠心功能检测;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法进行白细胞介素17(IL-17)、转化生长因子β(TGF-β)水平检测;流式细胞术检测Th17、Treg数量及Th17/Treg比值;免疫组化进行内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、内皮素1(ET-1)蛋白表达水平检测;Masson染色进行大鼠心肌组织的病理形态变化观察;TTC染色检测各组大鼠心肌梗死情况;TUNEL染色进行心肌组织中细胞凋亡情况检测;试剂盒检测RhoA活性;Western Blot法进行半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达水平检测。结果与对照组比较,模型组心肌组织有大量蓝色胶原纤维沉积,左室舒张末期容积(left ventricular end-diastolic volume,LVEDV)、左室收缩末期容积(left ventricular end-systolic volume,LVESV)、IL-17、Th17、Th17/Treg、ET-1、心肌梗死面积、细胞凋亡率、TUNEL阳性率、Bax、Caspase-3、RhoA活性、RhoA、ROCK1、ROCK2表达水平明显升高,左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左室缩短分数(left ventricular shortening fraction,LVFS)、TGF-β、Treg、eNOS、Bcl-2表达水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较,Matrine-L组、苦参碱高剂量组心肌组织蓝色胶原纤维逐渐减少,LVEDV、LVESV、IL-17、Th17、Th17/Treg、ET-1、心肌梗死面积、细胞凋亡率、TUNEL阳性率、Bax、Caspase-3、RhoA活性、RhoA、ROCK1、ROCK2表达水平依次明显降低,LVEF、LVFS、TGF-β、Treg、eNOS、Bcl-2表达水平依次明显升高(P<0.05)。与苦参碱高剂量组比较,苦参碱高剂量+LPA组心肌组织蓝色胶原纤维增多,LVEDV、LVESV、IL-17、Th17、Th17/Treg、ET-1、心肌梗死面积、细胞凋亡率、TUNEL阳性率、Bax、Caspase-3、RhoA活性、RhoA、ROCK1、ROCK2表达水平明显升高,LVEF、LVFS、TGF-β、Treg、eNOS、Bcl-2表达水平明显降低(P<0.05)。结论苦参碱通过抑制RhoAROCK信号通路调节Th17/Treg细胞平衡,改善冠心病大鼠心肌损伤。

鳖甲煎丸经AT1R/VEGF信号通路对肝癌血管生成的影响

目的 探讨鳖甲煎丸通过AT1R/VEGF信号通路影响肝癌血管生成的相关机制。方法 将40只BALB/c小鼠分为正常组、模型组、阿霉素干预组(DOX组)及鳖甲煎丸干预组(BJJW组),每组各10只。除正常组外,余下3组小鼠均立肝癌HepG2移植瘤模型,造模期间各组给予生理盐水和相应的药物治疗(腹腔注射给药),连续治疗10 d。测量各组小鼠的瘤体体积和瘤体肿瘤,并计算抑瘤率;采用免疫组织化学法检测CD34的表达情况来反映肿瘤组织的微血管密度,并采用Wstern blot法检测各组小鼠肿瘤组织中血管生成相关蛋白——缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、金属基质蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9水平的表达情况,及血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)通路相关蛋白含量。结果 与正常对照组相比,模型组与各治疗组小鼠均形成瘤体组织,表示造模成功。其中模型组小鼠肿瘤体积、瘤体肿瘤[分别为(245.32±122.51)cm^(3)、(1.08±0.78)g]均明显大于治疗组[DOX组体积分别为(83.41±12.04)cm^(3)、(110.04±48.07)g;BJJW组分别为(110.04±48.07)cm^(3)、(0.63±0.34)g](P<0.05),肿瘤细胞凋亡率较DOX组和BJJW组明显偏低(P<0.05)。模型组MVD、CD34阳性表达率、VEGF、HIF-1α、MMP-2、MPP-9蛋白含量及AT1R通路相关蛋白含量均较正常对照组明显升高(P<0.05);而DOX组及BJJW组的MVD、CD34阳性表达率、VEGF、HIF-1α、MMP-2、MPP-9蛋白及AT1R通路相关蛋白含量均明显低于模型组(均P<0.05)。结论 鳖甲煎丸可通过抑制肝癌血管的生成来起到抑癌效果,这可能与AT1R/VEGF信号通路被抑制有关。

瑞戈非尼通过CSF1-R信号通路调节肿瘤相关巨噬细胞增强PD-1抗体在结直肠癌中疗效的研究

目的探讨瑞戈非尼(Reg)通过集落刺激因子(CSF1-R)信号通路调节肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)增强PD-1抗体(PD-1 antibody,anti-PD-1)在结直肠癌中的疗效,并分析其机制。方法接种结肠癌细胞CT26于24只BALB/c小鼠,建立结直肠癌移植瘤模型,模型小鼠采用随机数字表法分为CT26组、CT26+Reg组、CT26+anti-PD-1组和CT26+Reg+anti-PD-1组4个组,每组6只,进行药物治疗后观察荷瘤小鼠移植瘤的生长情况。取肿瘤组织,通过Western Blot和免疫组化检测瘤内磷酸化CSF1-R(p-CSF1-R)和CSF1-R表达,流式细胞术检测肿瘤单细胞悬液中TAMs并区分M1、M2表型。提取小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDMs),分别诱导成M1、M2型巨噬细胞,并用Reg处理细胞,qRT-PCR检测相关基因表达水平,Western blot检测巨噬细胞表面CSF1-R蛋白表达。结果与CT26组比较,药物处理后肿瘤体积[(1174.33±56.84)mm3、(1221.00±42.42)mm3、(949.50±15.92)mm3比(1451.00±43.10)mm3]和重量[(2.32±0.08)g、(2.40±0.10)g、(1.73±0.08)g比(3.04±0.06)g]均显著减小,与单独使用Reg或anti-PD-1比较,Reg和anti-PD-1联合用药物使移植瘤的体积[(949.50±15.92)mm3比(1174.33±56.84)mm3、(1221.00±42.42)mm3]和重量[(1.73±0.08)g比(2.32±0.08)g、(2.40±0.10)g]进一步减小;Western blot和免疫组化结果显示,Reg处理后,瘤内p-CSF1-R表达显著下调(P<0.05);流式结果显示Reg处理后,M2型巨噬细胞比例显著下降[(13.67±1.80)%比(35.33±2.21)%、(21.33±2.36)%、(28.67±1.89)%,(P<0.05)],M1型巨噬细胞比例显著增加[(19.00±2.00)%比(5.50±0.96)%、(12.50±1.71)%、(8.00±0.82)%,(P<0.05)];qRT-PCR结果也表明,Reg处理能增加BMDMs中M1表型比例[IL-23:(1.98±0.08)比(1.00±0.05);IL-12:(3.10±0.12)比(1.00±0.10);CD86:(2.56±0.13)比(1.00±0.10)],并下调M2表型比例[Arg1:(0.57±0.04)比(1.00±0.09);CD206,(0.73±0.08)比(1.00±0.15);CD163:(0.81±0.07)比(1.00±0.20)],同时Western blot结果显示,Reg处理能显著下调M2型巨噬细胞表面p-CSF1-R蛋白的表达水平(P<0.05)。结论Reg可能通过CSF1-R信号通路调控TAMs,增强anti-PD-1在结直肠癌中的疗效。