VEGF-ASODN对唾液腺腺样囊性癌的影响

目的:研究血管内皮细胞生长因子反义寡核苷酸(VEGF-ASODN)对裸鼠荷人唾液腺腺样囊性癌的生长抑制作用。方法:20只BALB/c裸鼠随机分为4组,每组5只,实验1～3组建立人唾液腺腺样囊性癌荷瘤裸鼠移植瘤模型,并注射相应试剂。第4组为无荷瘤对照组。VEGF-ASODN组于瘤体及瘤周注射VEGF-ASODN 66μg。错义寡核苷酸组注射错义寡核苷酸66μg。生理盐水组注射生理盐水。每3 d 1次,共注射7次。实验结束后2 d,处死动物,取血清,测VEGF蛋白,测量肿瘤大小及重量,取肿瘤组织切片,免疫组化分析VEGF、PCNA、CD34表达,计算微血管密度(microvessel density,MVD)和增殖细胞核抗原标记指数(PCNA Label index,PLI),分子原位杂交检测VEGF mRNA表达。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:VEGF-ASODN组荷瘤裸鼠血清VEGF蛋白水平、肿瘤体积和重量、VEGF mRNA及其蛋白和PCNA、CD34表达均较对照组显著降低。结论:VEGF-ASODN通过抑制VEGF表达,从而抑制唾液腺腺样囊性癌细胞的生长。

转染VEGF-ASODN对胃癌细胞Survivin表达的影响

目的了解转染VEGF-ASODN(血管内皮生长因子反义寡核苷酸)对胃癌细胞Survivin(生存素)表达、细胞生长的作用.方法人工合成硫代磷酸化VEGF-ASODN,转染胃癌细胞SGC-7901,用Western-blot法检测细胞Survivin蛋白表达量、用流式细胞仪检测转染后细胞凋亡情况、用MTT检测转染后细胞生存力、细胞生长曲线检测转染后细胞生长情况.结果转染VEGF-ASODN能降低细胞Survivin蛋白,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),转染后细胞凋亡与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),能降低细胞的生存力及抑制细胞生长.结论VEGF-ASODN能抑制Survivin蛋白表达、抑制胃癌细胞生长、增加胃癌细胞的凋亡.

VEGF-ASODN抑制裸鼠胃癌移植瘤微血管生长

目的研究血管内皮细胞生长因子反义寡核苷酸(VEGF-ASODN)对裸鼠荷人胃癌移植瘤微血管的生长抑制作用。方法人工合成硫代磷酸化VEGF-ASODN,转染胃癌细胞SGC-7901,实时荧光定量RT-PCR检测细胞RNA起始拷贝数,ELESA法检测VEGF蛋白含量,MTT检测细胞生存力,细胞生长曲线检测细胞生长。建立裸鼠荷胃癌移植瘤模型。实验分为4组:(1)VEGF-ASODN组,(2)错义寡核苷酸组,(3)生理盐水组,(4)无荷瘤对照组。结果VEGF-ASODN能降低胃癌细胞VEGFmRNA的水平,显著降低胃癌细胞及培养液VEGF蛋白含量,降低细胞生存力、抑制细胞生长。VEGF-ASODN还能显著降低荷瘤裸鼠血清VEGF蛋白水平、减小移植瘤的体积和重量、降低移植瘤微血管密度。结论VEGF-ASODN抑制移植瘤微血管的生长。

VEGF-ASODN转染对胃癌细胞VEGF和survivin表达的影响

目的观察血管内皮细胞生长因子反义寡核苷酸(VEGF-ASODN)转染胃癌细胞SGC-7901对血管内皮生长因子(VEGF)和生存素(survivin)表达的影响。方法人工合成硫代磷酸化VEGF-ASODN。实验分为5组:对照组,错义组,实验1组(转染浓度为100ng/mL),实验2组(转染浓度为400ng/mL)及实验3组(转染浓度为700ng/mL)。转染后实时荧光定量RT-PCR检测细胞RNA起始拷贝数;ELESA法检测细胞及培养上清液VEGF蛋白含量;Western-blot法检测细胞生存素蛋白表达量;流式细胞仪检测细胞凋亡;细胞生长曲线检测转染对细胞生长的影响。结果3个实验组VEGF mRNA水平和VEGF蛋白表达量及培养上清液VEGF蛋白含量均明显降低,survivin蛋白的表达水平随转染浓度的升高而降低,转染VEGF-ASODN能使胃癌细胞凋亡增加、细胞生长减缓。结论VEGF-ASODN转染胃癌细胞SGC-7901能显著抑制细胞VEGF的表达,促进细胞凋亡,抑制细胞增殖。

血管内皮生长因子反义寡核苷酸在人甲状腺髓样癌裸鼠模型中的抑瘤作用

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(antisenseoligode-oxyribonucleotide,ASODN)在人甲状腺髓样癌(MTC)裸鼠模型中的抑瘤作用。方法构建12只MTC裸鼠模型,随机分为三组。治疗结束后1周,杀死全部瘤鼠,切取瘤体,测算瘤质量和IR以评价肿瘤生长情况,瘤组织石腊切片分别行HE、免疫组化(IHC)和DNA末端原位标记法(TUNEL法)染色以评价组织病理构造、VEGF与Survivin蛋白表达和细胞凋亡的变化。结果HE染色显示ASODN组具有明显减低的血管新生特点。此外,相对于正常组和SODN组,ASODN组具有显著的VEGF[(0.12±0.02)、(0.15±0.02)、(0.08±0.02)]和Sur-vivin[(0.17±0.03),(0.18±0.02),(0.09±0.02)]低表达、低瘤质量[(0.53±0.02)g,(0.54±0.03)g,(0.45±0.02)g]、高抑瘤率[(0±3.44)%,(-2.36±4.72)%、(15.57±3.22)%]和高凋亡[(4.91±0.67)%,(4.46±1.01)%,(24.68±1.22)%]特点(各P<0.01),而正常组与SODN组间未见上述各特点的统计学差异(各P>0.05)。结论针对人MTCVEGF基因沉默治疗能够达到明显抑瘤效果,此效果至少部分通过抑制肿瘤血管新生和促进肿瘤调亡而实现。这提示VEGF基因在人MTC中具有重要意义,可能成为人MTC基因靶向沉默治疗的重要候选基因之一。

VEGF反义寡核苷酸对舌鳞癌影响的实验研究

目的:研究血管内皮细胞生长因子反义寡核苷酸(VEGF-ASODN)对裸鼠荷人舌癌肿瘤的生长抑制作用。方法:20只BALB/C裸鼠分为4组,每组5只,实验1～3组建立人舌癌荷瘤裸鼠移植瘤模型,并注射相应试剂;第4组为未荷瘤对照组。①VEGF-ASODN组:于瘤体及瘤周注射VEGF-ASODN66μg。②错义寡核苷酸组:注射错义寡核苷酸66μg。③生理盐水组:注射生理盐水。各组每3天注射1次,共注射7次。实验结束后2d,处死动物,取血清测VEGF蛋白,测量肿瘤大小及重量,取肿瘤组织切片用免疫组织化学方法检测VEGF、PCNA、CD34的表达,计算微血管密度(microvesseldensity,MVD)和增殖细胞核抗原标记指数(PCNALabelindex,PLI),分子原位杂交测VEGFmRNA表达。结果:VEGF-ASODN组荷瘤裸鼠血清VEGF蛋白水平,肿瘤的体积和重量,VEGFmRNA及其蛋白和PCNA、CD34的表达均显著低于对照组。结论:VEGF-ASODN通过抑制VEGF表达,从而抑制舌癌细胞的生长、增殖。

脂质体转染VEGF-C反义寡核苷酸对人胃癌OCUM-2MD3细胞VEGF-C表达的影响

目的探讨脂质体转染VEGF-C反义寡核苷酸在人胃癌OCUM-2MD3细胞中的转染效率及对VEGF-C表达的影响。方法以VEGF-C基因翻译起始区为靶点合成反义寡核苷酸,脂质体介导转染人胃癌OCUM-2MD3细胞,荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR检测转染后VEGF-CmRNA表达水平,流式细胞术检测VEGF-C蛋白表达。结果经脂质体介导可成功将VEGF-C反义寡核苷酸转染至胃癌OCUM-2MD3细胞,12 h达其峰值87.93%。反义组VEGF-CmRNA相对吸光度值为0.38±0.11,显著低于正义组(0.83±0.17)和对照组(0.80±0.14)(P<0.01)。反义组VEGF-C蛋白表达水平(31.26±5.17)%,较正义组(41.83±7.49)%和对照组(38.65±7.11)%亦明显下降(P<0.01)。结论VEGF-C反义寡核苷酸经脂质体介导转染胃癌OCUM-2MD3细胞,可降低胃癌细胞VEGF-CmRNA及其蛋白表达水平。

反义血管内皮生长因子(VEGF)转染体内抑制胆囊癌VEGF及其受体表达的研究

目的:探讨Oligofectamine介导的血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ASODN)转染对人胆囊癌GBC-SD细胞裸鼠移植瘤的生长及VEGF、Flt-1和KDR表达的影响。方法:通过裸鼠皮下接种体外培养的人胆囊癌GBC-SD细胞建立人胆囊癌裸鼠移植瘤模型,并将裸鼠分为对照组(A组)、VEGF SODN+Oligifectamine组(B组)和VEGF ASODN+Oligifectamine组(C组),各组裸鼠在接种后24h内,在接种部位皮下分别缓慢注射200μl磷酸缓冲液(PBS)、VEGF SODN100μg+Oligofectamine0.5μl(总体积为200μl)及VEGF ASODN100μg+Oligofectamine0.5μl(总体积为200μl),每3天1次,连续治疗5周,观察各组裸鼠的成瘤性、体积及瘤重的变化,并运用免疫组化技术检测胆囊癌裸鼠移植瘤中VEGF、Flt-1和KDR的表达变化。结果:A、B、C组裸鼠2周时的成瘤率分别为87.5%、87.5%和37.5%,C组显著低于A、B组(P<0.05),5周时各组的成瘤率均为100%。各组裸鼠移植瘤5周时的体积和瘤重分别为:A组(253.49±27.11)mm3和(1.96±0.17)g,B组(255.84±26.51)mm3和(1.86±0.21)g,C组(125.45±17.49)mm3和(0.97±0.13)g,C组显著低于A、B组(P<0.05),C组的抑瘤率为(50.79±9.19)%。A、B组裸鼠移植瘤VEGF、Flt-1和KDR的表达均无统计学差异(P>0.05),而C组裸鼠移植瘤VEGF、Flt-1和KDR的表达较A、B组明显减弱(P<0.05)。结论:VEGF ASODN在体内能显著抑制人胆囊癌裸鼠移植瘤的增殖,降低其在裸鼠体内的成瘤性,抑制VEGF、Flt-1和KDR在蛋白水平的表达,抑制裸鼠移植瘤的生长及血管的形成。

VEGF反义寡核苷酸对裸鼠荷胃癌肿瘤的生长抑制作用研究

目的研究血管内皮细胞生长因子反义寡核苷酸(VEGF-ASODN)对裸鼠荷人胃癌肿瘤的生长抑制作用.方法人工合成硫代磷酸化VEGF-ASODN,建立人胃癌荷瘤裸鼠移植瘤模型(共3组),实验分为4组,(1)VEGF-ASODN组:于瘤体及瘤周注射VEGF-ASODN66μg;(2)错义寡核苷酸组:注射错义寡核苷酸66μg;(3)生理盐水组:注射生理盐水,每3d1次,共治疗7次;(4)另设无荷瘤对照组.实验结束后2d,处死动物,取血清测VEGF蛋白,测量肿瘤大小及重量,取肿瘤组织用流式细胞技术测增殖细胞核抗原(PCNA)及HE切片染色检查.结果VEGF-ASODN能抑制VEGF的表达,显著降低荷瘤裸鼠血清VEGF蛋白水平,减小肿瘤的体积和重量,PCNA表达量VEGF反义治疗组76.16%,错义寡核苷酸组87.50%,生理盐水组91.16%.结论VEGF-ASODN通过抑制VEGF表达,从而能抑制胃癌细胞的生长、增值.

VEGF反义寡核苷酸抑制胆囊癌生长增殖和凋亡的体外实验研究

目的:探讨VEGF反义寡核苷酸转染对人胆囊癌GBC-SD细胞生长、增殖和凋亡的影响。方法:运用Oligofectamine介导VEGF反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)和错义寡核苷酸(Scrambled Oligodeoxynucleotide,SODN)转染人胆囊癌(GBC-SD)细胞。采用MTT法测定转染后各组细胞的生长曲线及抑制率,流式细胞术检测转染后不同时间各组细胞凋亡情况。结果:SODN组、SODN十Oligofectamine组对GBC-SD细胞生长无显著影响(P>0.05),ASODN组及ASODN十Oligofectamine组则能显著抑制GBC-SD细胞生长(P<0.05),且ASODN十Oligofectamine组对GBC-SD细胞生长增殖抑制作用较ASODN组更为强(P<0.05)。流式细胞术检测结果发现ASODN十Oligofectamine组能促进GBC-SD细胞凋亡(P<0.05)。结论:VEGFASODN转染能抑制胆囊癌GBC-SD细胞生长和增殖,Oligofectamine介导能明显增强VEGF ASODN的抑制作用;Oligofectamine介导VEGF反义寡核苷酸转染能促进胆囊癌GBC-SD细胞的凋亡。

血管内皮生长因子反义寡核苷酸抑制胆囊癌血管生成的研究

目的探讨Oligofectamine介导的血管内皮生长因子(vascular endothelial cell growthfactor,VEGF)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)转染对人胆囊癌细胞GBC-SD裸鼠移植瘤的VEGF表达和血管形成的影响。方法裸鼠接种GBC-SD细胞建立移植瘤模型,随机分为A、B、C三组,各组裸鼠在接种1周后,分别给于200μl磷酸缓冲液(PBS)、VEGFSODN100μg+Oligofectamine0.5μl及VEGF ASODN100μg+Oligofectamine0.5μl,每3天1次,连续治疗5周,观察各组裸鼠的成瘤性、体积及瘤重的变化,各组移植瘤中VEGF表达及微血管密度(MVD)变化。结果三组裸鼠3周时的成瘤率,C组显著低于A、B两组(P<0.05),6周时各组的成瘤率无差异。各组移植瘤6周时的体积和瘤重相比C组显著低于A、B两组(P<0.05),C组的抑瘤率为(50.79±9.19)%。A、B两组移植瘤VEGF表达及MVD均无显著性差异(P>0.05),而C组移植瘤VEGF的表达较A、B两组明显减弱(P<0.05),MVD明显小于A、B两组(P<0.05)。结论VEGF ASODN在体内能显著抑制人胆囊癌裸鼠移植瘤的增殖,降低其在裸鼠体内的成瘤性,抑制VEGF在蛋白水平的表达,减少裸鼠移植瘤中血管的形成,降低微血管密度。