VEGF-Notch信号通路对再生障碍性贫血患者骨髓MSC增殖和凋亡的作用

目的:评估VEGF-Notch信号通路对再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)患者骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)增殖和凋亡的调节作用。方法:收集再生障碍性贫血患者骨髓标本,进行骨髓MSC分离及鉴定,应用Western blot检测AA患者骨髓(BM)中VEGF-Notch信号通路相关蛋白(VEGF,VEGFR,Notch-1,Jagged1,Delta-like1和hes1)的表达。在MSC培养体系中分别加入VEGF(100 ng/ml)和DAPT(γ-secretase inhibitor)(10μmol/L),以活化和抑制MSC中的VEGF-Notch信号传导。利用细胞计数试剂盒8和流式细胞术评估AA患者MSC的细胞增殖、凋亡和细胞周期;应用油红0染色法检测成脂分化。结果:AA患者MSC中VEGF-Notch信号通路受到明显抑制(P<0.05)。VEGF和DAPT的干预分别激活和抑制AA患者MSC中的VEGF-Notch信号传导。CCK8检测结果显示,VEGF的干预明显促进MSC的增殖(P<0.05)。流式细胞仪检测显示,VEGF通过阻断S期细胞显著抑制MSC的凋亡(P<0.05)。结论:VEGF-Notch信号通路的激活有可能恢复AA患者MSC的增殖功能。

参附强心丸对2型心肾综合征模型大鼠肾脏的保护作用及HIF-VEGF-Notch信号通路的影响

目的:参附强心丸对2型心肾综合征模型大鼠肾脏的保护作用及HIF-VEGF-Notch信号通路的影响。方法:采用冠状动脉左前降支结扎联合肾切除的方法构建2型心肾综合征大鼠模型,实验分为4组:假手术对照组、心肾综合征模型组、参附强心丸治疗组、卡托普利组。治疗3周后,检测各组大鼠肾脏功能相关指标,如血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、尿肌酐(Ucr)以及尿硫酸吲哚酚(IS)的表达水平,HE染色观察肾脏细胞形态变化,Masson染色检测大鼠肾脏胶原含量以及纤维化程度,采用qRT-PCR以及Western blot对肾脏组织中HIF、VEGF以及Notch1的mRNA表达以及蛋白水平进行检测。结果:与假手术对照组相比,心肾综合征模型组大鼠肾脏功能相关指标BUN、Scr水平显著上升(P<0.05),Ucr、IS水平显著降低(P<0.05),参附强心丸治疗组大鼠肾脏功能指标BUN、Scr水平显著低于心肾综合征模型组(P<0.05),Ucr、IS水平显著升高(P<0.05)。参附强心丸组的HIF、VEGF以及Notch1的mRNA以及蛋白表达显著高于心肾综合征模型组。结论:参附强心丸对2型心肾综合征模型大鼠肾脏具有保护作用,且该作用可能与HIF-VEGF-Notch信号通路密切相关。

HIF-VEGF-Notch信号通路相关因子在阿霉素肾病大鼠肾小球硬化过程中的表达研究

目的:探讨HIF-VEGF-Notch信号通路相关因子在阿霉素肾病大鼠肾小球硬化过程中的表达。方法:SD大鼠随机分为对照组和模型组(实验组),建立阿霉素肾病大鼠模型,第4、8、12、16周检测大鼠24 h尿蛋白、血清白蛋白(Alb)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr),光镜下观察肾组织病理改变,采用RT-PCR检测肾组织HIF-1 mRNA、VEGF mRNA、Notch1 mRNA表达水平,并采用Western blot法检测肾组织缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、Notch1蛋白表达水平。结果:实验组大鼠肾脏呈典型的肾小球硬化改变。与对照组相比,第4、8、12、16周实验组大鼠尿蛋白明显升高(P <0. 01); Alb均明显下降(P <0. 01); BUN、Scr持续升高,有显著性差异;实验组大鼠肾组织第4、8、12、16周HIF-1 mRNA、VEGF mRNA、Notch1 mRNA均表达升高(P <0. 01);肾组织HIF-1α、VEGF、Notch1蛋白水平也明显升高(P <0. 01)。结论:HIF-VEGF-Notch信号通路相关因子的高表达可能与阿霉素肾病肾小球硬化进展有关。

扶肾方对尿毒症腹膜透析大鼠腹膜超滤功能及VEGF-Notch信号通路的影响

目的探讨扶肾方对尿毒症腹膜透析大鼠的腹膜超滤功能及腹膜组织Notch1、delta-样配体4(Dll4)、Notch胞内域(NICD)、Hes1、血管内皮生长因子(VEGF)及血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)的影响。方法采用随机数字表法将50只雄性SD大鼠分为正常组、模型组、扶肾方低剂量组(模型+扶肾方324 g/L灌胃)、扶肾方高剂量组(模型+扶肾方648 g/L灌胃)和塞来昔布组(模型+塞来昔布1.8 g/L灌胃),每组10只。规律腹腔注射腹膜透析液4周,行腹膜平衡实验计算超滤量后处死大鼠,取腹膜组织,HE染色观察腹膜形态学变化,采用实时荧光定量PCR(q PCR)和蛋白印迹法检测Notch1、Dll4、NICD、Hes1、VEGF、VEGFR-2的mRNA和蛋白表达,蛋白印迹法检测p-VEGFR-2的蛋白水平。结果模型组、扶肾方低剂量组、扶肾方高剂量组及塞来昔布组大鼠腹膜超滤量明显低于正常组,扶肾方高剂量组与塞来昔布组超滤量高于模型组和扶肾方低剂量组,塞来昔布组超滤量低于扶肾方高剂量组(P<0.05)。腹膜HE染色显示,扶肾方低剂量组与高剂量组大鼠腹膜新生血管较模型组明显减少。与正常组比较,模型组大鼠腹膜组织Notch1、Dll4、NICD、Hes1 mRNA及蛋白表达均下调,VEGFR-2、VEGF mRNA及VEGFR-2、p-VEGFR-2、VEGF蛋白表达上调(P<0.05)。与模型组比较,扶肾方低剂量组NICD、Hes1 mRNA及Notch1、Dll4、NICD、Hes1蛋白表达上调,VEGFR-2、VEGF mRNA及VEGFR-2、p-VEGFR-2、VEGF蛋白表达下调(P<0.05);扶肾方高剂量组Notch1、Dll4、NICD、Hes1 mRNA及Dll4、Hes1蛋白表达上调,VEGFR-2、VEGF mRNA及VEGFR-2、p-VEGFR-2、VEGF蛋白表达下调(P<0.05);塞来昔布组Notch1 mRNA及Notch1、Dll4蛋白表达上调,VEGFR-2、VEGF mRNA及p-VEGFR-2、VEGFR-2、VEGF蛋白表达下调(P<0.05)。结论扶肾方可改善腹膜超滤功能,该作用可能与上调腹膜组织Notch1、Dll4、NICD、Hes1 mRNA及蛋白表达,下调VEGFR-2、VEGF mRNA及VEGFR-2、p-VEGFR-2、VEGF蛋白表达有关。

基于HIF-VEGF-Notch通路探讨通脉活血汤对局灶性脑缺血再灌注大鼠的保护作用

目的探讨通脉活血汤通过影响大鼠低氧诱导因子(HIF)-血管内皮生长因子(VEGF)-Notch通路对局灶性脑缺血再灌注损伤(FCIRI)的保护作用。方法将54只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、抑制剂组[HIF-1α抑制剂YC-1,2.5 mg/(kg·d)]和通脉活血汤低、中、高剂量组[20、40、80 mg/(kg·d)]。线栓法构建大鼠脑中动脉阻塞(MACO)模型,模拟局灶性脑缺血再灌注。建模后假手术组和模型组腹膜注射2.5 ml/d 5%葡萄糖注射液,抑制剂组和通脉活血汤组分别注射对应剂量YC-1和通脉活血汤。对大鼠神经功能进行评分、检测大鼠脑脊液中VEGF水平、检测冰冻切片中胚胎干细胞关键蛋白(Sox2)和胶质酸性蛋白(GAFP)细胞数、RT-PCR检测HIF-1、VEGF、Notch1 mRNA水平、Western印迹检测HIF-1α、Notch1蛋白水平。结果与假手术组相比,模型组脑组织中Sox2、GFAP染色细胞数显著降低(P<0.05);神经功能评分、脑组织中Notch1、VEGF和HIF-1 mRNA水平、脑脊液中VEGF水平、脑组织中HIF-1α和Notch1蛋白水平显著升高(P<0.05)。与模型组相比,抑制剂组和通脉活血汤低、中、高剂量组脑组织中Sox2、GFAP染色细胞数显著升高(P<0.05),且通脉活血汤各剂量组升高水平呈剂量依赖性(P<0.05);神经功能评分、脑组织中Notch1、VEGF和HIF-1 mRNA、脑脊液中VEGF水平、脑组织中HIF-1α和Notch1蛋白水平显著降低(P<0.05),且通脉活血汤各剂量组降低水平呈剂量依赖性(P<0.05)。与抑制剂组相比,通脉活血汤高剂量组神经功能评分、Sox2、GFAP染色细胞数、脑组织中Notch1、VEGF和HIF-1 mRNA、脑脊液中VEGF水平、脑组织中HIF-1α和Notch1蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论在局灶性脑缺血模型大鼠的治疗过程中,通脉活血汤可能通过影响HIF-VEGF-Notch通路来促进神经干细胞增殖分化,从而起到神经保护的作用。

缺氧对人微血管内皮细胞HIF-VEGF-Notch信号通路的影响

目的观察缺氧对人微血管内皮细胞(HMVEC)中HIF-VEGF-Notch信号通路相关分子表达的影响。方法常规方法培养HMVEC细胞,低氧培养箱制备HMVEC缺氧模型,正常细胞作为对照组。采用Western Blot法检测HMVEC中HIF-1α及Notch-1的蛋白表达,ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF蛋白表达水平。结果缺氧组和对照组细胞中Notch1蛋白表达分别为2.07±0.16和0.91±0.04,两者差异有显著意义(P<0.05);HIF-1α蛋白表达缺氧组为2.53±0.19,对照组为0.67±0.08,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组上清液中VEGF表达量为50.04±5.92 ng/L,缺氧组上清液中VEGF表达量为238.04±19.29 ng/L,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论缺氧可上调HMVEC细胞中HIF-VEGF-Notch信号通路相关分子的表达,此可能与重要脏器缺血缺氧性损伤后诱导的血管新生有关。

HIF-VEGF-Notch信号通路在血管生成中的作用

血管生成(angiogenesis)是血管系统的一个重要分支,血管的生成发育参与某些生理与病理的发生发展。其复杂过程包含多种细胞因子、信号通路、基因调控等。本文就缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)以及Notch信号通路在血管生成中的关系及作用进行了综述。

银杏内酯注射液联合氯吡格雷对大鼠局灶性脑缺血侧支循环形成及HIF-VEGF-Notch通路的影响

目的探究银杏内酯注射液联合氯吡格雷对大鼠局灶性脑缺血侧支循环形成及HIF-VEGF-Notch通路的影响.方法将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、银杏内酯注射液组、氯吡格雷组、银杏内酯注射液+氯吡格雷组.除假手术组外,其余各组以大脑中动脉线栓法建立脑缺血再灌注大鼠模型,分组处理后,以Longa分级法对各组大鼠神经功能缺损进行评分,以三苯基氯化四氮唑(TTC)染色观察各组大鼠脑梗死面积,以免疫组织化学染色检测各组大鼠脑组织微血管密度(CD31阳性细胞表达),采用实时荧光定量(qRT-PCR)及蛋白免疫印迹法检测脑组织中HIF-VEGF-Notch通路相关蛋白表达情况.结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死面积、脑组织CD31阳性细胞表达、HIF-1α、VEGF、Notch1 mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05).与模型组比较,银杏内酯注射液组、氯吡格雷组、银杏内酯注射液+氯吡格雷组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死面积均降低(P<0.05),脑组织CD31阳性细胞表达、HIF-1α、VEGF、Notch1 mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05);与银杏内酯注射液组及氯吡格雷组分别比较,银杏内酯注射液+氯吡格雷组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死面积均降低(P<0.05),脑组织CD31阳性细胞表达、HIF-1α、VEGF、Notch1 mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05).结论银杏内酯注射液及氯吡格雷均可促进大鼠局灶性脑缺血侧支循环形成及HIF-VEGF-Notch通路表达,两者合用具有协同作用.

肾缺血对缺氧诱导microRNAs及VEGF-NOTCH信号分子的影响

目的 观察肾缺血性损伤后,缺氧诱导microRNAs及VEGF-NOTCH信号分子的表达变化,探讨肾缺血损伤后血管新生的可能调控途径.方法 选择雄性Balb/c小鼠20只,采用夹闭双侧肾蒂方法制备急性缺血肾损伤模型,假手术组设为对照组.通过观察缺血恢复后24 h小鼠肾功能及肾组织病理学改变确定模型成功.实时定量RT-PCR检测缺血恢复后4 h,24 h时缺氧诱导miRNA-210,miRNA-92a,VEGF,Flk-1及Notch1 mRNA表达水平;Western-blot检测缺血恢复后24 h,72 h时Flk-1蛋白的变化;免疫组织化学染色检测CD31表达,判断缺血组织微血管内皮细胞增生状况.结果 肾缺血恢复24 h小鼠肌酐、尿素氮明显升高（P＜0.05）,光镜下观察大量小管上皮细胞肿胀、空泡变性坏死,肾小管管腔扩张,见上皮细胞碎片和管型,表明成功建立肾缺血损伤模型.肾缺血恢复4 h,24 h后,与正常组比较,肾组织miRNA-210上调倍数分别为（2.02±0.29）,（5.58±0.16）;miRNA-92a的表达上调倍数分别为（3.23±0.74）,（1.53±0.33）,P＜0.05;VEGF,Flk-1及Notch1 mRNA表达水平均升高（P＜0.05）.缺血恢复后24 h,72 h时,Flk-1蛋白水平显著升高（P＜0.05）,肾组织微血管密度明显增加.结论 肾缺血性损伤后可出现代偿性血管新生,且缺氧诱导miRNA如miRNA-92a,miRNA-210表达上调,与血管新生相关的信号分子VEGF及Notch1表达均升高,提示miRNA/VEGF-Notch1可能是肾缺血性损伤后血管新生的主要调控通路,从而为探讨缺血性损伤后血管新生的机制提供了依据.

益气活血化浊解毒方对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织VEGF、Notch1、Dll4表达的影响

目的观察益气活血化浊解毒方对脑缺血再灌注损伤大鼠的治疗作用,初步探讨其保护神经血管单元的机制。方法将SPF级大鼠随机分为假手术组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组和尼莫地平组。采用线栓法制备大脑中动脉闭塞模型,各组予相应干预,3天后计算各组大鼠神经功能评分,TTC染色测定脑梗死面积,免疫组化检测大鼠脑组织血管内皮生长因子(vascular endothelial growth inhibitor,VEGF)蛋白表达,q-PCR检测大鼠脑组织Notch1、Dll4 mRNA表达,Western blot检测大鼠脑组织VEGF、Notch1、Dll4蛋白表达。结果(1)神经功能评分结果显示:中药低、中、高剂量组及尼莫地平组较模型组大鼠神经功能缺失评分均有所降低(P<0.05);(2)脑梗死面积结果显示:中药低、中、高剂量组及尼莫地平组较模型组大鼠脑梗死面积显著缩小(P<0.05);(3)免疫组化结果显示:中药低、中、高剂量组及尼莫地平组较模型组大鼠脑组织VEGF蛋白表达显著增大(P<0.05);(4)q-PCR结果显示:中药低、中、高剂量组及尼莫地平组较模型组大鼠脑组织Notch1、Dll4 mRNA表达明显增加(P<0.05)(5)免疫蛋白印迹法结果显示:中药低、中、高剂量组及尼莫地平组较模型组大鼠脑组织VEGF、Notch1、Dll4蛋白表达增加(P<0.05)。结论益气活血化浊解毒方可以调控脑缺血再灌注损伤大鼠神经血管单元发挥神经保护作用,其机制可能与上调大鼠脑组织VEGF、Notch1、Dll4表达有关。

局灶性脑缺血大鼠VEGF/Notch1信号分子的表达及脑泰方的调节作用

目的从VEGF-Notch1信号通路观察脑泰方对局灶性脑缺血大鼠的治疗性血管新生样作用。方法将65只SD大鼠随机分为假手术组、MCAO组(模型组)、脑泰方组(NTF)、NTF+ED(重组人血管内皮抑制素)组。线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,NTF组及NTF+ED组分别于造模成功后24 h灌胃NTF或灌胃NTF加腹腔注射ED,术后1、7、14、28 d取脑,采用RT-PCR、Western印迹方法观察血管内皮样生长因子(VEGF)、Flk-1、Notch1的表达。结果与MCAO组比较,NTF组大鼠各时间点缺血侧脑组织VEGF、Flk-1、Notch1表达水平升高,在第14天时达高峰,而加用血管内皮生成抑制素恩度后,这种增高效应随即消失。结论脑泰方可能通过上调VEGF-Notch1信号通路的表达以达到治疗性血管新生样作用。

消肿止痛合剂对大鼠缺血皮瓣血管再生及VEGF-Dll4/Notch信号通路的影响

目的:观察消肿止痛合剂对大鼠缺血皮瓣血管再生及VEGF-Dll4/Notch信号通路的影响.方法:将240只SD大鼠随机分为6组,分别为空白组、假手术组、模型组、消肿止痛合剂组(消肿组)、消肿止痛合剂+Notch阻断剂MK-0752组(消肿+MK组)、消肿止痛合剂+VEGF阻断剂Axitinib组(消肿+AXI组).用透明硫酸纸准确描绘各组皮瓣形态,分析皮瓣成活率;用免疫组化法测定皮瓣组织中VEGFA的蛋白表达,Western blot法检测大鼠皮瓣组织中VEGFA、Notch和Dll4蛋白的表达.结果:(1)第5、10、15、20天消肿组皮瓣成活情况显著高于模型组(P<0.05),加入VEGF阻断剂后,消肿+AXI组皮瓣成活率下降(P<0.05),当加入Notch阻断剂后,消肿+MK组皮瓣成活率上升(P<0.05);(2)与模型组相比,消肿止痛合剂干预后,VEGFA、Notch和Dll4蛋白表达量显著升高(P<0.05).与消肿组相比,VEGF阻断剂干预后,VEGFA、Notch和Dll4蛋白表达量降低(P<0.05).Notch阻断剂干预后,VEGFA蛋白表达水平增加,Notch、Dll4蛋白表达增加的趋势被有效抑制(P<0.05).结论:消肿止痛合剂能够促进皮瓣的成活率,可能与影响VEGF-Dll4/Notch信号转导通路有关.

VEGF与Notch信号通路对再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞的调控机制研究

目的观察血管内皮生长因子(VEGF)通过Notch信号通路对再生障碍性贫血(AA)患者骨髓造血微环境的影响,探讨VEGF与Notch信号通路对骨髓间充质干细胞(MSC)的调控机制。方法选取AA患者与健康志愿者的骨髓MSC,VEGF干预后分别采用CCK-8法、流式细胞仪检测MSC细胞增殖、分化情况,分别采用Western blot、qRT-PCR法检测MSC VEGF与Notch信号通路相关蛋白、基因表达情况,采用免疫荧光法检测MSC内皮分化能力。结果 CCK-8法检测显示,VEGF的干预可明显上调AA患者MSC的增殖能力。流式细胞仪检测显示,VEGF通过阻断S期细胞促进AA患者MSC的增殖,抑制其凋亡。Western blot、qRT-PCR法检测显示,AA患者MSC VEGF与Notch信号通路相关蛋白、基因表达受抑制,VEGF的干预可促进MSC的Notch信号通路传导。免疫荧光法检测提示,AA患者MSC内皮分化能力弱于正常MSC。结论 VEGF或可通过Notch信号通路调控AA患者MSC,从而改善骨髓造血微环境。

中医药对子宫内膜损伤修复相关信号通路的影响

子宫内膜损伤是指由于各种宫腔内的手术操作不当或次数过多,损伤子宫内膜的基底层,造成患者术后子宫内膜薄化、宫腔粘连,可引起月经及妊娠异常等表现。近年来研究结果显示,有一些细胞因子参与到了子宫内膜损伤形成过程,细胞因子通过彼此之间的传导通路产生相互作用,进而可以修复受损子宫内膜。针对影响子宫内膜损伤修复的主要细胞因子及重要信号通路的作用进行综述,为进一步探讨子宫内膜损伤的发病机制及临床治疗新手段提供参考。

Dll4-Notch信号传递途径在血管发生中的作用

血管发生(angiogenesis)依赖多种促进血管发生因子和抑制血管发生因子之综合的交互作用所调控。血管内皮生长因子(VEGF)和Notch信号传递途径(Notch signaling pathway)参与此过程。之前研究已证明Notch信号传递途径在胚胎发育和肿瘤血管发生(tumour angiogenesis)中扮演重要的角色,而最近研究则发现在血管发育过程中Dll4-Notch信号传递途径扮演着前所未知的新角色,并阐明因Notch信号传递减少而引起血管缺陷之机制,从而揭示破坏肿瘤血管发生的新药物靶点。本文着重于介绍Notch信号传递途径的组成;Dll4-Notch在血管发生中的作用;以及Dll4-Notch对肿瘤治疗的意义。

Notch1,Jagged1和VEGF蛋白在非小细胞肺癌的表达及其意义

目的:检测Notch1,Jagged1和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)组织的表达及其临床病理学意义。方法:应用免疫组织化学SP法检测65例NSCLC组织、15例正常支气管上皮组织中Notch1,Jagged1和VEGF蛋白的表达并分析它们与临床病理参数间的关系。结果:Notch1,Jagged1和VEGF蛋白在非小细胞肺癌中表达的阳性强度分别为81.5%(53/65),83.1%(54/65)和93.8%(61/65),均明显高于正常支气管上皮组织的阳性强度(P<0.05);NSCLC中Notch1和VEGF蛋白表达与患者临床分期和淋巴结转移密切相关(P<0.05);Jagged1蛋白表达与患者病理类型和淋巴结转移有关。Notch1,Jagged1和VEGF蛋白的表达三者两两间均呈显著正相关。结论:Notch1,Jagged1和VEGF蛋白可能在肺癌发生发展中起重要作用;其高表达有可能作为预测NSCLC侵袭、转移的重要指标。

消肿止痛合剂对大鼠随意皮瓣血管再生的影响

目的:观察消肿止痛合剂对大鼠随意皮瓣血管再生及血管内皮生长因子(VEGF)-Dll4/Notch信号通路的影响。方法:将240只健康SD大鼠随机分为6组,分别为空白组、假手术组、模型组、消肿止痛合剂组(消肿组)、消肿止痛合剂+Notch阻断剂MK-0752(MK)组(消肿+MK组)和消肿止痛合剂组+VEGF受体抑制剂axitinib(AXI)组(消肿+AXI组)。观察皮瓣毛细血管充盈时间;HE染色观察皮瓣组织新生毛细血管的数量、微血管密度、微血管管径及血管成活面积;ELISA法检测血清中VEGF的含量;RT-qPCR检测大鼠皮瓣组织中VEGFA、Notch和Dll4的mRNA表达水平。结果:与模型组相比,消肿组第10天毛细血管充盈时间降低(P<0.05);与消肿组相比,消肿+AXI组的毛细血管充盈时间增加(P<0.05)。模型组大鼠皮瓣组织细胞排列紊乱,细胞核稀疏,可见明显水肿和大量白细胞浸润;消肿组和消肿+MK组水肿明显减轻,组织间隙炎症细胞浸润减少,其中消肿+MK组减轻更为明显。与模型组相比,消肿组微血管数量、密度和面积均显著增加,VEGF的含量显著增加,VEGFA、Notch和Dll4的mRNA表达量显著升高(P<0.05);与消肿组相比,AXI干预后微血管数量、密度和面积均显著减少,VEGF的含量降低,VEGFA、Notch和Dll4的mRNA表达量降低(P<0.05);MK干预后,VEGFA的mRNA表达水平升高,而Notch和Dll4 mRNA表达增加的趋势被有效抑制(P<0.05)。结论:消肿止痛合剂能够促进皮瓣术后血管的再生,从而增强了随意型皮瓣的成活率,可能与影响VEGF-Dll4/Notch信号转导通路有关。

消肿止痛合剂通过VEGF-Dll4/Notch信号通路减轻大鼠血管内皮细胞缺氧损伤

目的:研究消肿止痛合剂对大鼠皮瓣血管内皮细胞功能及VEGF-Dll4/Notch信号通路中相关蛋白表达的影响。方法:体外分离并培养大鼠皮瓣血管内皮细胞,将细胞分为对照组、缺氧组、缺氧+消肿止痛剂组(缺氧+消肿组)、缺氧+消肿止痛剂+axitinib(VEGF受体抑制剂)组及缺氧+消肿止痛剂+MK-0752(Notch通路阻断剂)组。采用ELISA法测定血清中VEGF含量,采用细胞calcein-AM和PI双染色法判断缺氧后1 d、2 d和3 d死活细胞数量,Western blot检测了24 h和48 h细胞内VEGF-A、Notch和Dll4蛋白的表达量。结果:与对照组相比,缺氧24 h和48 h后VEGF含量显著增加,细胞死亡率显著增加,且VEGF-A、Notch和Dll4的蛋白表达量显著增加(P<0.05);与缺氧组细胞相比,消肿止痛合剂干预后,VEGF的含量显著增加,细胞死亡率显著降低,且VEGF-A、Notch和Dll4的蛋白表达量显著升高(P<0.05)。与消肿止痛合剂组相比,VEGF受体抑制剂干预细胞后,消肿止痛合剂对缺氧损伤的血管内皮细胞的保护作用减弱,细胞死亡率明显增加,VEGF的含量降低,且VEGF-A、Notch和Dll4的蛋白表达量降低(P<0.05)。Notch通路阻断剂干预细胞后,细胞存活率不变,VEGF-A的蛋白表达水平增加,Notch和Dll4蛋白表达增加的趋势被有效抑制(P<0.01)。结论:消肿止痛合剂可改善大鼠皮瓣血管内皮细胞的功能,其机制与影响VEGF-Dll4/Notch信号转导通路有关。

中药促进脑缺血血管生成研究进展

单味药及其有效成分、中药复方及中成药对血管的促进、抑制作用为目前研究热点,但中药对脑缺血后促进血管生成的作用及机制相关研究尚未深入。本文对中药促进脑血管生成的中医理论、体外研究、在体研究进行综述,并对通过Notch和Wnt信号通路调控血管生成的机制研究进行重点阐述,为药理作用机制研究及新药研发提供参考。

蒲葵子乙醇提取物对人肝癌Bel-7402细胞增殖和迁移的影响

目的研究蒲葵子乙醇提取物(EELC)对人肝癌Bel-7402细胞增殖和迁移的影响。方法将培养的Bel-7402细胞随机分为5组:对照组、150μg/ml EELC处理组、300μg/ml EELC处理组、10μmol/L Notch抑制剂DAPT处理组和10μg/ml抗血管内皮生长因子(VEGF)抗体处理组,分别处理后,采用MTT和划痕实验检测各组细胞增殖和迁移能力的变化,Western blot检测各组细胞内VEGF、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及Notch胞内片段(NICD)等蛋白表达的变化,ELISA检测各组细胞分泌VEGF水平的变化。结果不同浓度EELC、DAPT和抗VEGF抗体处理Bel-7402细胞后,Notch-VEGF途径相关的VEGF、MMP-2、NICD等蛋白表达水平、VEGF分泌量、细胞的增殖和迁移能力均受到不同程度地抑制(P<0.05)。而且EELC的抑制作用呈现一定的浓度依赖性和时间依赖性。结论蒲葵子乙醇提取物可通过Notch-VEGF途径抑制人肝癌Bel-7402细胞的增殖和迁移。