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题名VEGF111b的表达载体构建及抗体制备
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作者
李秀丽
谷芳
姚元庆
刘忠宇
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机构
中国人民解放军总医院海南分院妇产科
中国人民解放军总医院妇产科
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出处
《海南医学》
CAS
2014年第22期3277-3280,共4页
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基金
国家自然科学基金(编号:81250030)
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文摘
目的克隆VEGF111b基因,构建真核表达载体pc DNA3.1-VEGF111b,并进行测序,制备VEGF111b多克隆抗体。方法丝裂霉素C诱导处理卵巢癌SKOV3细胞24 h,设计VEGF111b酶切引物,以SKOV3细胞的c DNA为模板,通过PCR得到VEGF111b特异性基因产物,克隆入真核表达载体pc DNA3.1中,获得重组真核表达载体pc DNA3.1-VEGF111b,测序验证。用KLH耦联VEGF111b特异性短肽,制备多克隆抗体,Western blot检测其特异性。结果成功扩增了VEGF111b基因,双酶切、测序鉴定证实目的基因成功克隆到真核表达载体pc DNA3.1中,测序结果与预测完全一致,成功制备了VEGF111b多克隆抗体,使用其多克隆抗体,Western blot能够检测到VEGF111b对应分子量的蛋白条带。结论本研究鉴定了pc DNA3.1-VEGF111b真核表达载体,并验证了VEGF111b多克隆抗体的特异性,为进一步研究VEGF111b蛋白的功能奠定了基础。
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关键词
vegf111b
PCDNA3.1
真核表达
多克隆抗体
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Keywords
vegf111b
pc DNA3.1
Karyotic expression
Polyclonal antibody
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分类号
R737.31
[医药卫生—肿瘤]
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