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牦牛VEGFA双荧光素酶载体构建及与miR-200b的靶向验证
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作者 谢建鹏 陈平 +1 位作者 王斐 何振富 《寒旱农业科学》 2023年第8期745-749,共5页
为探究微小RNA(miR-200b)与血管内皮生长因子A(VEGFA)基因之间的靶向关系,采用miRanda和Targetscan软件预测牦牛miR-200b与VEGFA可能存在结合位点,构建了VEGFA基因3′UTR区的野生型和突变型双荧光素酶载体。利用与目的miRNA靶种子序列... 为探究微小RNA(miR-200b)与血管内皮生长因子A(VEGFA)基因之间的靶向关系,采用miRanda和Targetscan软件预测牦牛miR-200b与VEGFA可能存在结合位点,构建了VEGFA基因3′UTR区的野生型和突变型双荧光素酶载体。利用与目的miRNA靶种子序列相结合基因的突变序列,构建该靶基因的突变型重组质粒(pGL3-promoter-mut VEGFA),再进行重组质粒和目的miRNA的miRNA mimic的共转染实验。结果表明,预测到的miR-200b与VEGFA基因的3′UTR区存在结合位点。PCR进行扩增和测序之后,VEGFA基因3′UTR区的野生型、突变型载体构建成功。共转染VEGFA野生型载体和miR-200b mimic的双荧光素酶活性极显著低于对照组(P<0.05),VEGFA突变型载体和miR-200b mimic共转染的双荧光素酶活性与对照组无显著差异(P>0.05)。说明VEGFA基因的3′UTR区能与miR-200b结合并抑制双荧光素酶活性,验证了VEGFA是miR-200b的靶基因。 展开更多
关键词 牦牛 载体构建 双荧光素酶 vegfa基因 miR-200b
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Gene expression of vascular endothelial growth factor A and hypoxic adaptation in Tibetan pig 被引量:5
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作者 Bo Zhang Yangzong Qiangba +4 位作者 Peng Shang Yunfeng Lu Yuzeng Yang Zhixiu Wang Hao Zhang 《Journal of Animal Science and Biotechnology》 SCIE CAS CSCD 2016年第4期474-481,共8页
Background: Vascular endothelial growth factor A (VEGFA) can induce endothelial cell proliferation, promote cell migration, and inhibit apoptosis. These processes play key roles in physiological blood vessel format... Background: Vascular endothelial growth factor A (VEGFA) can induce endothelial cell proliferation, promote cell migration, and inhibit apoptosis. These processes play key roles in physiological blood vessel formation and pathological angiogenesis. Methods: In this study, we examined VEGFA gene expression in the heart, liver, and kidney of Tibetan pigs (-I-P), Yorkshire pigs that migrated to high altitudes (YH), and Yorkshire pigs that lived at low altitudes (YL). We used PCR and Sanger sequencing to screen for single nucleotide polymorphisms (SNPs) in 5'-flanking DNA and exons of the VEGFA gene. Quantitative real-time PCR and western blots were used to measure expression levels and PCR products were sequenced. Results: Results showed that the VEGFA mRNA and protein expression in heart, liver and kidney of TP was higher than that in YH and YL. In addition, the mRNA sequence of the pig VEGFA gene was conserved among pig breeds, and only five SNPs were found in the 5'-flanking region of the VEGFA gene, the allele frequency distributions of the 5 SNPs were not significantly different between the TP, Yorkshire (YL), and Diannan small-ear (DN) pig populations. Conclusion: In conclusion, the Tibetan pig showed high tissues, which suggests that the VEGFA gene may play a levels of VEGFA gene expression in several hypoxic major functional role in hypoxic adaptation. 展开更多
关键词 gene expression Hypoxic adaptation Tibetan pig vegfa gene
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樱桃谷鸭TYR和VEGFA基因的表达研究
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作者 李华 谭淑雯 +2 位作者 叶定泽 谭旭茹 谭旭杰 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2015年第23期21-24,共4页
本实验旨在探讨0~28日龄樱桃谷鸭的羽色变化及换羽的分子机制,用荧光定量PCR方法研究了酪氨酸酶基因(TYR)与血管内皮生长因子A基因(VEGFA)的m RNA表达谱。结果表明:0~7日龄绒羽色由黄变浅,21~28日龄绒羽逐渐变白并被幼羽取代;随着... 本实验旨在探讨0~28日龄樱桃谷鸭的羽色变化及换羽的分子机制,用荧光定量PCR方法研究了酪氨酸酶基因(TYR)与血管内皮生长因子A基因(VEGFA)的m RNA表达谱。结果表明:0~7日龄绒羽色由黄变浅,21~28日龄绒羽逐渐变白并被幼羽取代;随着日龄增长,TYR基因在心、肝的表达量被抑制(P〈0.05),而眼、肌肉、脑则大量表达(P〈0.01);皮肤TYR基因呈先升后降的趋势,在肺、肾的表达则是先升后降再升的波动表达。VEGFA基因在0~7日龄樱桃谷鸭的肝、皮肤、肺、肾、眼、肌肉中表达明显增加(P〈0.01),而心、脑降低(P〈0.05);21~28日龄,在心、肝、皮肤、肺、肾VEGFA表达下调(P〈0.01),在眼、肌肉、脑中的表达却上调(P〈0.05)。综上,0~28日龄的樱桃谷鸭羽毛颜色和换羽与TYR基因和VEGFA的抑制表达有关,两者之间有一定协同性。 展开更多
关键词 樱桃谷鸭 TYR基因 vegfa基因 基因表达
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布氏鲳鲹VEGFA基因克隆与组织表达分析 被引量:1
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作者 李岩强 郭辰浩 +4 位作者 叶恒振 朱凡 王茜 周智 骆剑 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期1020-1027,共8页
血管内皮生长因子A (vascular endothelial growth factor A, VEGFA)主要生理功能是增加小静脉血管与微血管的通透性,是血管生成过程最重要的正向调控因子。本研究采用RACE技术克隆布氏鲳鲹VEGFA基因和实时荧光定量PCR方法对该基因进行... 血管内皮生长因子A (vascular endothelial growth factor A, VEGFA)主要生理功能是增加小静脉血管与微血管的通透性,是血管生成过程最重要的正向调控因子。本研究采用RACE技术克隆布氏鲳鲹VEGFA基因和实时荧光定量PCR方法对该基因进行组织分布表达分析。结果显示,该VEGFA基因cDNA序列全长1 470 bp,5’UTR、3’UTR长度分别为617 bp和208 bp,ORF为645 bp,共编码214个氨基酸,其中包括一个信号肽和两个N-糖基化位点。理论分子量为25.23 kD,等电点为8.91。同源性分析结果表明,布氏鲳鲹VEGFA基因与同属鲈形目鱼类高体鰤的同源性最高(96.1%)。荧光定量PCR分析显示,VEGFA在布氏鲳鲹组织中均有表达,其中肝脏表达水平最高,其次是心脏,在小脑、胃、肠表达较低,在肾脏组织中的表达量最低,说明布氏鲳鲹VEGFA基因在生理代谢以及血管生成过程中可能发挥重要调节作用。本研究结果为深入研究布氏鲳鲹VEGFA基因的生理代谢调控功能提供理论依据。 展开更多
关键词 布氏鲳鲹 vegfa 基因克隆 组织表达
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慢性儿童免疫性血小板减少症差异表达基因的生物信息学分析 被引量:2
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作者 夏悦昕 王霓 +4 位作者 张力 宋文倩 邵林楠 戚凝 于卫建 《临床血液学杂志(输血与检验)》 CAS 2019年第5期751-755,共5页
目的:探究慢性儿童免疫性血小板减少症(ITP)的关键基因和信号通路,为研究慢性ITP的潜在分子机制提供新的思路。方法:从GEO数据库获得mRNA表达芯片数据集GSE46922,利用GEO2R筛选出DEGs,并利用DAVID对DEGs进行GO功能富集分析和KEGG信号转... 目的:探究慢性儿童免疫性血小板减少症(ITP)的关键基因和信号通路,为研究慢性ITP的潜在分子机制提供新的思路。方法:从GEO数据库获得mRNA表达芯片数据集GSE46922,利用GEO2R筛选出DEGs,并利用DAVID对DEGs进行GO功能富集分析和KEGG信号转导通路富集分析。随后,构建PPI蛋白互作网络,筛选核心靶标。结果:筛选出274个表达上调基因,主要参与细胞骨架组构,基于肌动蛋白丝的过程,肌动蛋白纤维组织等生物过程。筛选出496个表达下调基因,主要参与动作电位和肌肉收缩等过程。KEGG分析发现,上调基因主要参与HIF-1信号通路。下调基因主要涉及焦点黏附、Rap1信号通路、PI3K-Akt信号通路、神经信号传递通路、肌动蛋白细胞骨架调控等信号通路。获得11个核心靶标:VEGFA,CCND1,ESR1,MYH14,ERBB2,CDKN3,PVALB,CDC20,CHEK1,MTOR和CFTR。结论:本研究通过生物信息学分析获得慢性ITP的关键基因和信号通路,为研究慢性ITP的发病机制提供了新的思路。核心靶标基因可作为诊断和预后评估的生物标志物。 展开更多
关键词 生物信息学分析 慢性儿童免疫性血小板减少症 差异表达基因 血管内皮生长因子A
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