血府逐瘀胶囊联合顺铂对小鼠Lewis肺癌移植瘤血管新生及VEGFA、VEGFR2表达的影响

目的探讨血府逐瘀胶囊联合顺铂对小鼠Lewis肺癌移植瘤血管新生及血管内皮生长因子A(VEGFA)、血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)表达的影响。方法从75只C57BL/6小鼠中随机取15只作为正常组,其余小鼠均进行Lewis肺癌荷瘤造模。将造模成功的60只小鼠随机分为模型组、顺铂组、血府逐瘀胶囊组、血府逐瘀胶囊联合顺铂组,每组15只。血府逐瘀胶囊组给予血府逐瘀胶囊0.36 g/kg灌胃,模型组给予生理盐水灌胃,均2次/d;顺铂组给予2 mg/kg的顺铂腹腔注射,2 d 1次;血府逐瘀胶囊联合顺铂组给予0.36 g/kg血府逐瘀胶囊灌胃(2次/d)和2 mg/kg的顺铂腹腔注射(2 d 1次);正常组不给予任何干预。各组连续干预15 d后,统计存活率,摘取瘤组织并称量瘤重,计算抑瘤率,免疫组化法检测肿瘤组织中微血管数量,ELISA法测定血浆VEGFA、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)水平,免疫印迹法检测肿瘤组织中VEGFA、VEGFR2蛋白表达情况。结果顺铂组和血府逐瘀胶囊联合顺铂组小鼠存活率明显高于模型组和血府逐瘀胶囊组(P均<0.05);血府逐瘀胶囊联合顺铂组瘤重明显低于其他组(P均<0.05),抑瘤率明显高于顺铂组和血府逐瘀胶囊组(P均<0.05),肿瘤组织中微血管数明显少于模型组和血府逐瘀胶囊组(P均<0.05);顺铂组瘤重明显低于模型组和血府逐瘀胶囊组(P均<0.05),抑瘤率明显高于血府逐瘀胶囊组(P<0.05),肿瘤组织中微血管数明显少于其他组(P均<0.05)。顺铂组血浆VEGFA、bFGF水平和肿瘤组织中VEGFA、VEGFR2蛋白相对表达量均明显低于模型组(P均<0.05);血府逐瘀胶囊联合顺铂组血浆bFGF水平和肿瘤组织中VEGFR2蛋白相对表达量均明显低于模型组(P均<0.05)。结论血府逐瘀胶囊联合顺铂对Lewis肺癌荷瘤小鼠具有显著的抑瘤及抑制肿瘤血管新生的作用,其机制可能与VEGFA/VEGFR2信号通路相关。

miR-545-3p抑制VEGFA/VEGFR2信号通路对前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨微小RNA-545-3p(miR-545-3p)对前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其对血管内皮生长因子A(VEGFA)/血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)信号通路的调控作用。方法qRT-PCR检测miR-545-3p在不同前列腺癌细胞中的表达情况;双荧光素酶报告基因检测miR-545-3p与VEGFA的相互作用;MTT实验与流式细胞术检测miR-545-3p过表达及VEGFA过表达后前列腺癌细胞增殖能力及凋亡行为的变化;Western blot检测miR-545-3p过表达及VEGFA过表达后前列腺癌细胞CDK1、Bcl2、Bax及VEGFA/VEGFR2信号通路蛋白的表达水平变化。结果miR-545-3p在前列腺癌细胞中的表达水平降低,与其他前列腺癌细胞相比,DU145细胞中miR-545-3p的表达水平较低;双荧光素酶实验证实miR-545-3p可调控VEGFA的表达及活性;miR-545-3p过表达可减弱前列腺癌细胞增殖能力,促进细胞凋亡;miR-545-3p过表达可下调VEGFA、p-VEGFR2、CDK1、Bcl2的表达,同时过表达VEGFA后可逆转miR-545-3p对前列腺癌细胞增殖及凋亡的作用。结论miR-545-3p过表达可通过抑制VEGFA/VEGFR2信号通路而抑制前列腺癌细胞增殖及诱导癌细胞凋亡。

Tetramethylpyrazine and paeoniflorin combination(TMP-PF)inhibits angiogenesis in atherosclerosis via miR-126/VEGF/VEGFR2 signaling pathway

Angiogenesis in atherosclerosis(AS)promotes plaque destabilization.miR-126 has a significant role in angiogenesis.Tetramethylpyrazine(TMP)and paeoniflorin(PF)have anti-atherosclerotic effects.However,the miR-126-related mechanisms of TMP and PF combination(TMP-PF)on angiogenesis in AS have not been understood.To explore the mechanism of TMP-PF on angiogenesis in AS targeting miR-126.Human umbilical vein endothelial cells(HUVECs)were assigned into the control,model,TMP-PF,TMP-PF+miR-126 inhibitor,and simvastatin groups.HUVECs were transfected with miR-126 inhibitor or negative control,incubated with oxidized low-density lipoprotein(ox-LDL)to establish AS model,and then treated with TMP-PF or simvastatin.Cell proliferation,migration,and tube formation assays are conducted,and the expression of angiogenesis-related factors were detected by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)and Western blotting.The expression level of miR-126 was confirmed by polymerase chain reaction(PCR).0x-LDL promoted HUVECs proliferation,migration,and tube formation,downregulated miR-126 expression,and increased the expression of VEGF,VEGFR2,bFGF,and FGFR1.TMP-PF inhibited proliferation,migration,and tube formation,upregulated miR-126 expression and decreased the expression of VEGF,VEGFR2,bFGF,and FGFR1 in ox-LDL-induced HUVECs.However,the effects of TMP-PF on angiogenesis and the expression of miR-126,VEGF,VEGFR2,and FGFR1 were abolished by miR-126 inhibitor.TMP-PF suppressed angiogenesis in AS by regulating miR-126/VEGF/VEGFR2 pathway,which might elucidate the underlying mechanism of TMP-PF in alleviating AS.

连翘苷对体内外鼻咽癌血管新生的影响

【目的】观察连翘苷抗鼻咽癌效应及机制。【方法】(1)体外实验:不同浓度(0.625、1.25、2.5、5、10μmol/L)连翘苷作用于体外人脐静脉内皮细胞(HUVECs)、人鼻咽正常上皮细胞系NP69和鼻咽癌细胞系HNE1和SUNE-1后,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞活力,小管形成实验测定HUVECs血管新生活性,Transwell小室实验测定HUVECs侵袭活性,Western Blot法测定HNE1和SUNE-1细胞、HUVECs中血管内皮生长因子A(VEGFA)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、Wnt和β-catenin表达水平。(2)体内实验:以连翘苷(10 mg/kg)对鼻咽癌异种移植瘤裸鼠进行干预后,采用血管造影法检测裸鼠鼻咽癌异种移植瘤的血管密度,免疫组织化学法检测鼻咽癌异种移植瘤中CD34、VEGFA和Wnt的表达。【结果】(1)连翘苷(0.625~10μmol/L)对体外HNE1和SUNE-1细胞活力有显著抑制效果,但对体外HUVECs和NP69的细胞活力无显著抑制效果;连翘苷(0.625~10μmol/L)可明显抑制HUVECs血管新生和侵袭活性,VEGFA(20μg/L)可削弱连翘苷对体外HUVECs血管新生和侵袭活性的抑制作用;连翘苷可下调VEGFA、Wnt和β-catenin在HNE1和SUNE-1细胞中的含量;连翘苷可诱导HUVECs中VEGFR2表达下调。(2)连翘苷(10 mg/kg)对裸鼠无明显毒副作用,但可显著抑制鼻咽癌异种移植瘤生长和血管新生,抑制鼻咽癌异种移植瘤组织中的CD34、VEGFA和Wnt的阳性表达。【结论】连翘苷对体内外鼻咽癌血管新生有显著抑制作用,其主要作用机制可能与调控Wnt/β-catenin/VEGFA/VEGFR2信号通路有关。

食道通结方对人食管癌裸鼠移植瘤微血管生成的影响

目的观察食道通结方对人食管癌裸鼠移植瘤微血管生成的影响。方法通过皮下接种人食管癌TE-1细胞株建立人食管癌裸鼠移植瘤模型。将40只荷瘤鼠随机分为模型组、顺铂组、中药组、中药+顺铂组。各组分别予0.9%NaCl溶液、中药食道通结方(18 g·kg^-1·d^-1,灌胃,28 d)、顺铂(1 mg·kg^-1·d^-1,腹腔注射,d1、d3、d5)、食道通结方(18 g·kg^-1·d^-1,灌胃,28 d)+顺铂(1 mg·kg^-1·d^-1,腹腔注射,d1、d3、d5)干预。观察各组裸鼠移植瘤的生长情况,免疫组化法检测肿瘤组织CD34的表达,计算肿瘤微血管密度(MVD),免疫组化法检测肿瘤组织血管内皮细胞生长因子A(VEGFA)的表达,采用Western blot法检测肿瘤组织血管内皮细胞生长因子A(VEGFA)、血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)、磷酸化血管内皮生长因子受体2(p-VEGFR2)蛋白的表达。结果与模型组比较,各给药组移植瘤的体积及瘤重均明显减小(P<0.01),以中药+顺铂组的抑瘤作用最强(P<0.05)。与模型组比较,中药组、顺铂组、中药+顺铂组肿瘤MVD及VEGFA、p-VEGFR2的表达均明显降低(P<0.05),且中药+顺铂组下调MVD及VEGFA、p-VEGFR2蛋白表达的作用较顺铂组更为显著(P<0.05)。结论食道通结方具有拮抗食管癌血管新生的作用,该作用与抑制VEGFA/VEGFR2通路有关。

莪术醇对斑马鱼的血管生成活性及作用机制研究

目的:初步研究莪术醇促进血管生成的活性及作用机制,为临床用药提供依据。方法:采用斑马鱼生物模式,观察莪术醇对斑马鱼胚胎体节间血管生长、成鱼剪尾后血管再生和仔鱼切尾后组织再生情况。采用相对荧光定量PCR法检测仔鱼切尾后体内血管内皮生长因子(VEGFA)及受体(VEGFR2)基因的表达。结果:莪术醇能使斑马鱼胚胎体节间血管侧生出新的血管,使成鱼剪尾后血管再生加快,使仔鱼切尾后尾部再生加快。且莪术醇能提高仔鱼体内VEGFA及VEGFR2基因的表达量,促进仔鱼切尾后的尾部再生。结论:莪术醇能促进斑马鱼的血管生成,提高仔鱼切尾后体内VEGFA及VEGFR2基因的表达量,促进尾部再生。

白藜芦醇对斑马鱼尾鳍再生的促进作用及机制研究

目的研究白藜芦醇促进斑马鱼尾鳍再生的活性及作用机制,并研究其对斑马鱼胚胎发育的影响,为白藜芦醇药效的进一步开发和安全用药提供依据。方法采用斑马鱼(Fli1-GFP)模型,研究白藜芦醇对斑马鱼尾鳍切除后血管和组织再生的影响,用相对荧光定量PCR法检测仔鱼切尾后体内血管内皮生长因子(VEGFA)和受体(VEGFR2)基因的表达量;研究白藜芦醇对斑马鱼胚胎发育的影响,检测其对斑马鱼胚胎自主运动、心率、孵化率的效应。结果白藜芦醇具有血管生成活性,可促进斑马鱼尾鳍再生,能提高仔鱼切尾后体内VEGFA及VEGFR2基因的表达量;白藜芦醇对斑马鱼胚胎发育有一定影响,主要表现为低浓度时促进自主运动和孵化率但高浓度时呈抑制效应,且可降低心率。结论白藜芦醇可促进斑马鱼尾鳍再生,作用机制可能与促进VEGFA和VEGFR2基因表达有关。白藜芦醇对斑马鱼胚胎发育有一定毒性。