VEGFR1基因特异性siRNA的筛选

[目的]筛选血管内皮生长因子受体(VEGRF)基因特异性小干扰RNA(Small Interference RNA,siRNA),为肿瘤等疾病的基因治疗寻找一种新途径。[方法]以高表达VEGFR1的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)为模型,采用RNA干扰技术,化学合成了3条针对血管内皮生长因子受体1(VEGFR1)的特异性siRNA,用Lipofectamine2000TM转染HUVEC细胞株,通过Real time RT-PCR技术检测HUVEC细胞VEGFR1基因mRNA的表达。并对效果最好的VEGFR1 siRNA-2进行siRNA的浓度梯度效果检测。[结果]结果表明,与对照组相比,所设计的3条siRNA均能不同程度地抑制VEGFR1 mRNA的表达,其中siRNA-2号最有效,浓度为50 nmol/L时抑制率达到95%左右。在浓度梯度试验中,VEGFR1 siRNA-2转染浓度为50 pmol/L时,对VEGFR1基因的沉默效果还能达到50%左右。[结论]所设计的siRNA能有效抑制VEGFR1基因的表达,为RNAi用于靶向VEGFR1的基因治疗提供了非常有效的siRNA序列。

努比亚山羊妊娠前期饲喂N-乙酰半胱氨酸对VEGFD、VEGFR1基因表达量的影响

N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)作为一种优良的饲料添加剂与抗氧化剂,在提高山羊繁殖性能中有重要的作用。为探究VEGFD与VEGFR1基因在NAC饲喂前后努比亚山羊下丘脑、垂体、子宫、输卵管、卵巢组织中的表达水平。试验以妊娠前期努比亚山羊为研究对象,将其分为NAC饲喂组和空白组。提取NAC饲喂前后努比亚山羊性腺组织的RNA,逆转录合成cDNA第一链,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测VEGFD与VEGFR1基因在2个试验组山羊性腺组织中的表达水平。结果表明,VEGFD与VEGFR1基因mRNA在NAC饲喂组和空白组山羊的性腺组织中均有不同程度的表达,其中VEGFD基因在努比亚山羊NAC饲喂组表达量的顺序依次为:垂体>下丘脑>子宫>卵巢>输卵管,在空白组中的表达量依次为:垂体>子宫>输卵管>卵巢>下丘脑;NAC饲喂组中VEGFD基因在卵巢中的表达量极显著高于空白组(P<0.01)。VEGFR1基因在NAC饲喂组中表达量由高到低依次为输卵管>子宫>下丘脑>垂体>卵巢,而在空白组中的表达量由高到低依次为:输卵管>垂体>下丘脑>子宫>卵巢。且在NAC饲喂组中,VEGFR1基因在下丘脑、子宫以及输卵管中的表达量极显著高于空白组(P<0.01)。研究显示,NAC饲喂后VEGFD与VEGFR1基因在努比亚山羊性腺组织中的表达量均有不同程度提高,初步表明NAC可促进努比亚山羊的繁殖,这为今后进一步探究NAC饲喂对山羊繁殖性能及VEGFD与VEGFR1基因功能奠定基础。