Versican在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床病理学意义

目的研究Versican在食管鳞状细胞癌组织中的表达,并探讨其临床病理学意义。方法收集郑州人民医院接受食管癌根治手术治疗的47例患者食管鳞状细胞癌组织及癌旁组织,采用免疫组化法及原位杂交法检测Versican的表达情况,分析其与临床病理特征的相关性。结果Versican蛋白及Versican mRNA在食管鳞状细胞癌组织中的表达均高于癌旁组织(P<0.05);Versican蛋白及Versican mRNA在食管鳞状细胞癌组织中的高表达与患者癌组织的浸润深度达外膜或周围组织、淋巴结有转移、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期均有关(P<0.05);Versican蛋白与Versican mRNA在食管鳞状细胞癌组织中的表达有相关性(r=0.530,P<0.05)。结论食管鳞状细胞癌中Versican的表达与浸润、转移相关,可能促进了食管鳞状细胞癌的发生发展。

沉默Versican V0/V1对小鼠牙乳头细胞生物学行为的影响

目的探究多功能蛋白聚糖(Versican)V0/V1对小鼠牙乳头细胞(mouse dental papilla cells,mDPCs)生物学行为的影响。方法体外培养E16.5d胎鼠mDPCs,使用小干扰RNA(siRNA)沉默mDPCs的Versican V0/V1基因,通过qRT-PCR和免疫荧光染色验证沉默效率;通过EdU实验检测细胞增殖率,划痕实验及Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移能力;碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红染色分别评估mDPCs的矿化情况,并利用qRT-PCR检测其成牙和矿化相关基因表达水平。结果siRNA转染后,与si-NC组相比,si-Versican V0/V1组mDPCs的增殖能力及迁移能力减弱(P<0.01),si-Versican V0/V1组碱性磷酸酶染色更深且矿化结节数量增加,si-Versican V0/V1组成牙和矿化相关的基因表达量增加(P<0.05)。结论沉默Versican V0/V1抑制mDPCs增殖和迁移,但促进mDPCs成牙分化和矿化。

Versican和TGF-β1在胃癌中的表达及临床意义

目的:研究胃癌组织中Versican和TGF-β1的表达及其与胃癌细胞增殖的关系。方法:用免疫组织化学方法检测80例胃癌组织和30例癌旁正常组织中Versican、TGF-β1和Ki-67的表达。结果:Versican在胃癌中的阳性率显著高于正常胃黏膜(P=0.001)。主要表达于胃癌间质纤维母细胞的胞浆,且与胃癌的分化程度、临床分期及淋巴结转移显著相关(P<0.05);胃癌中TGF-β1的阳性率和Ki-67表达均显著高于正常胃黏膜(P<0.001),且均与浸润深度、临床分期和淋巴结转移相关(P<0.05);在胃癌组织中Versican与TGF-β1的表达呈正相关(r=0.256,P=0.022)。结论:胃癌组织中Versican和TGF-β1的表达异常增高,二者均可促进胃癌细胞的生长,并且与胃癌的临床病理特征有关,为胃癌的治疗提供了潜在的靶点。

实时荧光PCR检测γ-干扰素对大鼠神经干细胞versican基因表达的调控

目的建立检测硫酸软骨素蛋白多糖versican不同亚型mRNA的SYBR Green实时PCR方法,观察炎症因子γ-干扰素对大鼠神经干细胞中不同versican亚型基因表达的调控。方法分离孕大鼠胚胎的神经干细胞,在含有营养因子的基质中进行体外培养。当加入处理因素γ-干扰素并作用48h后,收集细胞,抽提RNA进行反转录。同时根据versican不同亚型的基因序列,设计特异性不同的引物,利用ABI7900PCR仪和SYBR Green,建立优化的实时荧光PCR反应条件,通过比较Ct(△△Ct)进行基因表达的相对定量分析。结果熔解曲线分析和琼脂糖凝胶电泳结果证实了PCR反应的特异性;相对定量结果显示,γ-干扰素可以上调versican V2基因的表达,但对versican V1的表达无影响。结论应用SYBR Green实时荧光PCR可以特异、准确、快速地分析versican不同亚型的基因表达差异,为系统研究其复杂的调控机制创造了有力条件。

大鼠脊髓半横断损伤对脊髓versican、CD44表达的影响

目的：观察大鼠脊髓半横断损伤（HSCI）对硫酸软骨素蛋白多糖versican及CD44在脊髓中表达的影响，为进一步探索脊髓损伤后的再生修复机制提供实验依据。方法：成年SD大鼠随机分为假手术对照组和HSCI3、7和14d组。建立成年大鼠HSCI（胸9-10）模型。取损伤位点头尾段胸9、胸10节段制作冷冻切片，用免疫组织化学ABC法和图像分析技术检测脊髓内versican和CD44的表达。结果：Versican阳性产物主要分布于细胞外基质中，腹角神经元和胶质细胞的胞质中也有分布CD44阳性产物主要分布于细胞外基质及腹角神经元和胶质细胞的胞质中。损伤后脊髓内versiean表达较对照组明显增加，CD44表达也较对照组明显增加。结论：HSCI后versican与CD44表达都增加，两者可能相互作用共同参与损伤后轴突生长被抑制这一过程。

蛋白聚糖Versican V1区诱导小鼠脊柱炎和骶髂关节炎模型的建立

目的 建立自身免疫性强直性脊柱炎(AS)实验动物模型 ,并探讨重组人蛋白聚糖Versican的G1区多肽 (VG1 )在其脊柱和骶髂关节炎发病中的作用。方法 用自然折叠的VG1和完全弗氏佐剂免疫BALB/c小鼠 ,诱导产生脊柱炎和骶髂关节炎 ,建立自身免疫性AS实验动物模型。采用组织病理学方法显示脊柱炎小鼠的发病程度和病理学特征。结果 用VG1和完全弗氏佐剂免疫的实验组小鼠脊柱炎和骶髂关节炎的发病率分别为 35 0 %和 1 2 5 % ,未出现外周炎的临床症状。组织病理学结果显示 ,脊柱韧带与椎间盘连接处、椎间盘和骶髂关节有大量的单个核细胞浸润。结论 成功建立了VG1诱导的小鼠脊柱炎模型 ,并发现针对蛋白聚糖Versican的免疫反应参与了BALB/c小鼠脊柱炎和骶髂关节炎的发病 。

胃癌组织中Versican与WTAP的表达及其对术后复发或转移的影响研究

目的探讨胃癌组织中Versican与成肾细胞瘤1-结合蛋白(WTAP)的表达及其对术后复发或转移的影响。方法选取2016年4月—2018年11月淮安市第一人民医院分院收治101例胃癌患者。患者均行手术切除,术后随访3年。采用免疫组织化学法检测癌组织、癌旁组织中Versican和WTAP的表达,分析癌组织中Versican和WTAP表达情况与临床病理特征的关系,分析影响胃癌患者术后复发转移的因素,Kapaln-Meier法绘制生存曲线,比较Versican和WTAP阳性表达与阴性表达患者的无病生存率。结果癌组织Versican与WTAP阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05)。低分化、肿瘤分期为Ⅲ期、突破浆膜、淋巴结转移的胃癌患者癌组织Versican、WTAP阳性表达率分别高于中、高分化,Ⅰ或Ⅱ期,未突破浆膜,无淋巴结转移患者(P<0.05)。单因素分析显示:病理分级、肿瘤分期、浸润深度、淋巴结转移、Versican阳性、WTAP阳性是影响胃癌患者术后复发转移的影响因素(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示:病理分级[RR=4.943(95%CI:2.034,12.013)]、肿瘤分期[RR=5.058(95%CI:2.081,12.293)]、淋巴结转移[RR=3.991(95 CI:1.642,9.699)]、Versican阳性表达[RR=4.263(95%CI:1.754,10.361)]和WTAP阳性表达[RR=5.038(95%CI:2.073,12.244)]是影响胃癌患者术后复发转移的独立因素(P<0.05)。Versican、WTAP阳性表达患者与阴性表达患者的无病生存率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论胃癌患者癌组织中Versican及WTAP蛋白表达与临床病理特征及预后有关,Versican、WTAP阳性表达患者术后复发转移风险高。

Versican在ICR胎鼠下颌第一磨牙牙胚发育过程中的表达

目的:检测Versican核心蛋白及其mRNA在胎鼠磨牙牙胚发育早期的表达,探讨其在牙胚发育过程中的作用。方法:制备胎鼠磨牙牙胚各发育阶段标本,用免疫组化和原位杂交方法分析Versican核心蛋白及其mRNA在牙胚组织中的表达与分布。结果:Versican核心蛋白及其mRNA在胎鼠磨牙牙胚不同发育阶段表达各异,在细胞增生活跃区如增生的牙板、内外釉上皮细胞、颈环以及牙乳头等区域表达明显,而在已分化细胞如成牙本质细胞、成釉细胞等区域无表达,在星网状细胞所在区域也未检测到。结论:Versican核心蛋白及其mRNA在牙胚发生过程中呈时间-空间特异性模式表达。它可能与上皮-间充质相互作用以及相关细胞的增殖和分化有关。

Versican与胃癌上皮-间质转化相关蛋白的表达及意义

目的探讨胃癌组织中Versican与上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)的表达及其相关性,并分析其临床意义。方法用免疫组织化学EliVision法和qRT-PCR检测胃癌组织和相应癌旁正常胃黏膜组织中Versican、E-cadherin和N-cadherin蛋白和mRNA的表达情况,分析上述蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系及蛋白之间的相关性,利用Kaplan-Meier法评估Versican蛋白表达与胃癌患者预后的关系,用COX比例风险模型分析影响胃癌患者的预后因素。结果胃癌组织中Versican和N-cadherin蛋白表达的阳性率显著高于癌旁胃黏膜(P<0.001),而E-cadherin蛋白表达的阳性率显著低于癌旁胃黏膜(P<0.001)。qRT-PCR结果显示,胃癌中Versican和N-cadherin mRNA水平高于癌旁胃黏膜,E-cadherin mRNA水平低于癌旁胃黏膜(P<0.05)。Versican高表达与胃癌的分化程度、临床分期、浸润深度及淋巴结转移显著相关(P<0.05),E-cadherin的阳性率与胃癌的Lauren分型、分化程度、浸润深度、临床分期和淋巴结转移相关(P<0.05),N-cadherin的阳性率与胃癌Lauren分型、浸润深度、临床分期和淋巴结转移相关(P<0.05)。Kaplan-Meier分析显示,Versican蛋白高表达者的无病生存期低于低表达者。COX比例风险模型分析显示,Versican是影响胃癌患者预后的独立危险因素。Spearman相关性分析结果显示,Versican与E-cadherin的表达呈负相关(r=-0.638,P<0.001),与N-cadherin的表达呈正相关(r=0.313,P<0.001)。结论胃癌组织中Versican蛋白高表达,与胃癌EMT相关蛋白密切相关,笔者推测Versican可能是通过调节胃癌上皮-间质转化而促进胃癌侵袭转移的,Versican是胃癌患者预后的独立危险因素。

Versican在肝细胞癌中的表达

肝癌是我国常见恶性肿瘤之一，死亡率高。早期诊断、早期治疗、根据不同病情进行综合治疗是提高疗效的关键，但总体疗效不甚理想，治疗失败和死亡的主要原因是肝癌细胞具有转移的特性。其中survivin、cappase-3、NF～kB等参与了肝癌发生、

Versican对牙根发育影响的动物实验研究

目的:检测Versican有小鼠牙根发育期牙髓组织中的表达,探讨其在牙根发育过程中的作用。方法:制备小鼠磨牙牙根各发育阶段标本,用免疫组织化学方法检测Versican核心蛋白及其硫酸软骨素多糖链有牙根发育期间牙髓组织中的表达与分布。结果:Versican在小鼠磨牙上皮根鞘、切牙根尖牙乳头区域的牙髓细胞增生活跃区表达明显;在牙本质、前期牙本质以及已分化的成牙本质细胞所在区域无表达,而在其深层具有分化潜能的牙髓细胞则强表达;同时其在牙髓组织中的表达随着小鼠牙根发育的成熟而逐渐减少。结论:Versican在牙根发育期间的牙髓组织中呈时间-空间特异性模式表达,它可能与牙根的发育与成熟有关。

硫酸软骨素蛋白多糖Versican V1和V2亚型在大鼠损伤脊髓中的表达

目的探讨硫酸软骨素蛋白多糖Versican V1和V2亚型在成年大鼠损伤脊髓中的表达规律。方法 39只成年大鼠随机分为对照组(假手术组,n=9)和实验组(n=30)。利用纽约大学重物坠落装置建立实验组大鼠脊髓损伤模型。采用实时定量PCR、免疫组织化学法和免疫荧光法,分别观察大鼠脊髓损伤后Versi can V1和V2亚型的表达变化。结果实时定量PCR显示,与对照组比较,实验组Versican V1 mRNA的表达在脊髓损伤后4 h略有升高(P>0.05),损伤后1 d达到峰值(P<0.01),其高表达可维持至损伤后7 d(P<0.01);Versican V2 mRNA的表达升高较迟缓,脊髓损伤后1 d略有升高(P>0.05),峰值出现在损伤后7 d(P<0.01),然后迅速降低,损伤后14 d接近对照组水平(P>0.05)。免疫组织化学检测显示,脊髓损伤后3 d,包括损伤中心在内的10 mm全长脊髓都可观察到Versican表达明显增强;免疫荧光染色显示,高表达Versican的细胞为βⅢ-tubulin阳性神经元、GFAP阳性星型胶质细胞和MBP阳性少突胶质细胞。结论 Versican表达增强可能与脊髓损伤后形成抑制神经再生的微环境有关;消除其影响作用时,应考虑在不同时间采用不同方法处理表达模式不同的Versican亚型。

子宫内膜样腺癌中Versican和VEGF的表达及其相关性

目的:探讨多功能蛋白聚糖(Versican)和血管内皮生长子(VEGF)在子宫内膜样腺癌、不典型子宫内膜增殖症和正常子宫内膜组织中的表达及其相关性。方法:在子宫内膜样腺癌、不典型子宫内膜增殖症和正常子宫内膜组织中,免疫组织化学方法分别检测Versican和VEGF的表达。结果:Versican在子宫内膜样腺癌、不典型子宫内膜增殖症和正常子宫内膜组织中阳性率分别为78.0%、57.5%和5.0%;VEGF在子宫内膜样腺癌、不典型子宫内膜增殖症和正常子宫内膜组织中阳性率分别为86.0%、55.0%和10.0%。Versican和VEGF分别在子宫内膜样腺癌和不典型子宫内膜增殖症中的表达均高于正常子宫内膜组织,差异有统计学意义(P<0.05)。Versican与肿瘤分期、浸润深度和淋巴结转移相关,差异有统计学意义(P<0.05);VEGF与肿瘤分级、浸润深度相关,差异有统计学意义(P<0.05)。Versican与VEGF表达呈正相关(P<0.05)。结论:在子宫内膜样腺癌间质中富于Versican和VEGF,其表达可能与肿瘤发生、增殖和侵袭有关。

小鼠磨牙牙胚发育过程中Versican之多糖链的时空变化

目的检测versican之多糖链在小鼠磨牙牙胚发育过程中的时空变化。方法取胎龄分别为E11.5,E12.0,E13.5,E15.0,E16.5和E18.5 d的ICR胎鼠头部,常规组织学处理,制备5μm厚矢状或冠状切片,用免疫组织化学方法检测versican核心蛋白与其硫酸软骨素多糖链在下颌第一磨牙牙胚组织中的时空表达。结果从小鼠下颌第一磨牙牙胚开始发生到钟状晚期,versican核心蛋白与4-硫酸软骨素在牙源性上皮及其衍生组织共表达。在牙乳头间充质细胞中versican核心蛋白开始与6-硫酸软骨素共表达,从钟状早期4-硫酸软骨素开始在内釉细胞深层的牙乳头间充质细胞间表达,且其与6-硫酸软骨素呈互补表达模式。结论 versican之硫酸软骨素多糖链在牙胚发生过程中硫酸化模式呈现时间-空间特异性改变,这种特异性改变可能与小鼠磨牙牙胚的形态发生以及细胞增殖与分化密切相关。

大鼠脊髓半横断损伤后Versican及其受体CD44的表达变化

目的探讨大鼠脊髓半横断（hemisected spinal cord injury，hSCI）损伤后14d硫酸软骨素蛋白多糖Versican及其受体CD44的表达变化。方法10只成年SD大鼠随机分为正常对照组和术后14d组。建立成年SD大鼠脊髓半横断（T9-T10）模型。14d后取损伤位点头尾段T9、T10节段制作冰冻切片，运用Versican、CD44抗血清进行免疫组化ABC法染色。分别观察并计数脊髓腹角和Ⅰ、Ⅱ板层内Versican、CD44的免疫反应阳性细胞数。结果Vetsican主要分布于正常大鼠脊髓腹角，CD44主要分布于正常大鼠脊髓Ⅰ、Ⅱ板层和腹角。损伤后14d腹角Versican阳性细胞数较正常组明显下降（P〈0．05），Ⅰ、Ⅱ板层和腹角的CD44阳性细胞数也较正常组明显下降（P〈0．05）。而手术组损伤侧与未损伤侧Versican和CD44表达水平均无明显差异（P〉0．05）。结论大鼠脊髓半横断损伤14d后Versican、CD44表达均明显下降，提示脊髓半横断损伤对脊髓灰质内细胞表达Versican、CD44有影响。

体外培养毛乳头细胞的versican基因表达变化

目的探讨versican基因及蛋白在体外培养的毛乳头细胞(dermal papilla cells,DPC)中的表达变化,并研究其对DPC凝集性生长特性的影响。方法利用酶消化法分离培养DPC,并进行体外培养传代,观察不同代次DPC凝集性生长特性的变化。应用Western blot、RT-PCR检测DPC的β-catenin、versican的表达情况,对比研究其与DPC凝集性生长的关系。结果随着DPC由低代向高代分化,其凝集性生长特性逐渐减弱,versican表达水平逐渐降低。Wnt途径上调versican基因的表达,能够使高代DPC表达β-catenin、versican增强。结论versican基因和蛋白水平的表达与DPC凝集性生长呈正相关;versican基因是调控DPC凝集性生长的重要基因,versican的表达对毛囊(hair follicle,HF)的形成起着十分重要的作用,并在维护HF周期中扮演重要角色。

硫酸软骨素蛋白多糖Versican V2-小干扰RNA表达载体的构建及鉴定

目的构建硫酸软骨素蛋白多糖Versican V-2小干扰RNA(SiRNA)的表达载体,转染大鼠神经干细胞,并从基因表达水平验证其抑制效果。方法利用专门软件,设计针对Versican V2 mRNA序列的特异性SiRNA插入序列,体外合成该序列后将其定向克隆入真核表达载体pRNAT-H1.1/Neo,用电穿孔法将Versican V2-SiRNA表达载体转至大鼠神经干细胞中,并以表达载体中带有的绿色荧光蛋白(GFP)的表达作为转染效率的评价指标,利用反转录-聚合酶链反应鉴定Versican V2-SiRNA对Versican V2基因表达的抑制效果。结果构建的干扰表达载体转染大鼠神经干细胞后可特异性抑制该细胞中内源性Versican V2的表达,而优化的转染条件使转染效率及转染后的细胞特性及活力均能满足下一步研究的需要。结论该干扰表达载体的成功构建,以及转染后在大鼠神经干细胞中抑制功能的有效发挥,为日后开展Versican V2在神经干细胞中表达的功能研究奠定了基础。

大鼠脊髓半横断损伤后硫酸软骨素蛋白多糖Versican的变化

目的观察大鼠脊髓半横断损伤(hSCI)位点头尾段硫酸软骨素蛋白多糖Versican的表达变化,探讨其与脊髓损伤修复的关系。方法20只成年健康SD大鼠随机分为假手术对照组和脊髓半横断损伤3d、7d和14d组。建立成年SD大鼠脊髓半横断(T9～T10)模型。取损伤位点头尾段T9、T10节段制作冰冻切片,运用Versican抗血清进行免疫组化ABC法染色。分别观察并计数各组前角中Versican阳性细胞数,采用计算机图像分析技术测量免疫阳性产物的平均光密度(A)值。结果Versican阳性产物主要分布于细胞外基质中,前角神经元和胶质细胞的胞浆中也有分布;损伤后前角中Versican阳性神经元和胶质细胞数较对照组明显减少(P<0.05),免疫阳性产物平均A值较对照组明显增加(P<0.05)。结论脊髓半横断损伤后,表达增加的Versican很可能参与损伤后轴突生长被抑制的过程。

Versican在肿瘤中的生物学作用

Versican是蛋白聚糖家族之一,其表达水平增高与许多肿瘤的不良预后有关。肿瘤的类型不同,其表达部位也不同,可以表达在肿瘤细胞本身,也可以表达在肿瘤周围的间质中。Versican在细胞黏附、增殖、迁移和血管生成中都起作用,这些特点与肿瘤的侵袭和转移有关。这些功能特点有赖于Versican的中间氨基葡聚糖结合区以及两末端的球状区域与许多细胞外基质和细胞表面成分的相互作用。本文对最近发现的调控Versican表达的机制以及它在肿瘤侵袭和转移中的生物学作用作一综述。