人黑色素瘤单抗VH-TNF融合蛋白基因的构建和表达

目的：在大肠杆菌中表达人黑色素瘤单抗ＶＨＴＮＦ融合蛋白基因．方法：在人肿瘤坏死因子基因上游插入了抗黑色素瘤单抗Ｍｅｌ３的重链可变区基因，将此融合基因插入大肠杆菌表达系统ｐＧＥＸ２Ｔ的ＧＳＴ基因下游，ＩＰＴＧ诱导表达，表达产物经凝血酶消化后，测定其对Ｌ９２９细胞的杀伤活性，并进行ＳＤＳＰＡＧＥ，用抗ＴＮＦ抗体进行蛋白印迹分析．结果：序列分析表明融合基因拼接点有正确读框，可表达ＶＨＴＮＦ融合蛋白．将融合的基因插入融合性表达载体ｐＧＥＸ２Ｔ的ＧＳＴ基因下游，表达出预期的５５ｋｕＧＳＴＶＨＴＮＦ融合蛋白．Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ证明可用凝血酶从该蛋白切下２９ｋｕ的ＶＨＴＮＦ蛋白．活性分析表明这一融合蛋白仍具有对Ｌ９２９细胞的杀伤活性．结论：构建并在大肠杆菌中表达了人黑色素瘤单抗ＶＨＴＮＦ融合蛋白基因，表达产物具有对Ｌ９２９细胞的杀伤活性．