梭梭VHA-B基因克隆及序列分析

采用RT-PCR和RACE法从超旱生、耐盐植物梭梭(Haloxylon ammodendron)中扩增出VHA-B基因cDNA序列,其开放阅读框为1 413bp,推测编码全长为471个氨基酸残基的氨基酸序列,该蛋白分子量约为52.304ku,等电点为5.08。运用SMART、DNAMAN、GOR4、TMPred等生物信息学软件对梭梭VHA-B功能域、跨膜结构进行分析显示,梭梭VHA-B含有3个ATP-synt_ab_N、ATP-synt_ab、ATP-synt_ab_C结构域,但是不含跨膜结构域和信号肽。氨基酸序列同源性结果显示,HaVHA-B与盐爪爪、盐穗木、碱蓬等同源性高达89.68%。说明VHA-B基因是一个高度保守基因。

柳树液泡膜ATP酶B亚基基因克隆及在盐胁迫下的表达分析

参照毛果杨(Populus trichocarpa)VHA-B基因设计1对引物,采用同源克隆法从耐盐柳树L0911中扩增出泡膜ATP酶B亚基基因(VHA-B)的全长cDNA序列,其核苷酸序列全长1 566 bp,共编码518个氨基酸。氨基酸序列与杨树、水稻、拟南芥、冰叶日中花、碱蓬、盐爪爪等高等植物的相应氨基酸序列一致性达到90%以上,说明VHA-B基因是一种较高保守的基因。用不同浓度NaCl胁迫相同时间和相同浓度NaCl胁迫不同时间分别处理L0911植株,采用实时荧光定量PCR检测L0911叶片中VHA-B基因的表达情况,结果表明,VHA-B基因的表达受到盐胁迫诱导,说明VHA-B基因与盐胁迫存在紧密关联。