1型和4型马疱疹病毒VHS蛋白在HeLa细胞中的表达与定位

为了研究1型和4型马疱疹病毒(EHV)VHS蛋白在真核细胞中的表达与亚细胞定位,试验将1型和4型马疱疹病毒VHS基因片段与p3×Flag载体连接,构建p3×Flag-VHS-1和p3×Flag-VHS-4重组表达质粒,经脂质体转染HeLa细胞后,用Western-blot验证该蛋白在HeLa细胞中的表达情况,并以激光共聚焦显微成像技术确定VHS蛋白在真核细胞中的分布及亚细胞定位。结果表明:重组质粒p3×Flag-VHS-1和p3×Flag-VHS-4在HeLa细胞中获得了表达,且主要聚集于细胞浆。说明VHS蛋白能够在外源真核细胞HeLa中表达,蛋白主要位于HeLa的细胞浆中。

VHS蛋白,一种具有mRNA剪切活性的多种功能蛋白质

单纯疱疹病毒UL41基因编码的病毒宿主关闭蛋白(VHS蛋白)是一种核酸酶,具有mRNA剪切活性,可引起宿主细胞蛋白质合成的快速关闭。通过干扰IFN-α/β介导的抗病毒免疫反应、降低宿主细胞MHCⅠ和MHCⅡ类分子的表达、减少免疫系统中病毒抗原的提呈以及抑制宿主先天免疫反应等,VHS蛋白在α疱疹病毒的发病机制和免疫逃避过程中发挥重要作用。

伪狂犬病病毒宿主关闭蛋白的基因克隆及结构分析

为研究伪狂犬病病毒 (pseudorabiesvires ,PRV)UL4 1基因编码的病毒宿主关闭蛋白 (VHS)的结构与功能 ,通过PCR扩增得到含UL4 1基因完整编码区的 1174bp片段 ,将该片段克隆到表达载体pGEX KG中GST下游 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中实现了GST VHS融合蛋白的高效表达 .序列分析发现VHS蛋白具有 4个保守区 ,并且第 3个保守区与核酸内切酶结构域FEN 1(1A76 )高度同源 .PROSPECT软件预测的伪狂犬病病毒VHS蛋白三维结构中含有 10个α螺旋和 2 2个β折叠 ,与单纯疱疹病毒Ⅰ型的VHS蛋白三维结构十分相似 .