四君子汤对脾虚大鼠腮腺唾液淀粉酶分泌障碍及VIP-cAMP信号通路的影响

目的:观察四君子汤对脾虚大鼠唾液淀粉酶分泌障碍治疗效果,并揭示其作用机制。方法:大鼠皮下注射利血平0.5 mg/kg,正常对照组大鼠注射等量生理盐水,共8 d;造模结束后模型动物分为模型组和四君子汤组,四君子汤组灌胃给予四君子汤,模型组和正常对照组灌胃给予等量双蒸水,给药4 w后进行取材。麻醉动物,取左侧腮腺,缝合伤口,大鼠稍清醒时,用10%冰乙酸溶液20μL刺激大鼠舌尖,1次/min,共刺激30次;处死,取下右侧腮腺。检测腮腺组织唾液淀粉酶活性(sAA)c、AMP及VIP含量、PKA活性和VAMP8、SNAP-23蛋白表达。结果:四君子汤组大鼠腮腺内sAA与正常对照组大鼠无显著差异,模型组大鼠酸刺激后sAA活性显著高于正常对照组大鼠,酸刺激前VIP含量、PKA活性各组大鼠无显著差异;酸刺激后,正常对照组大鼠VIP及cAMP含量、PKA活性显著升高,模型组大鼠VIP轻微升高,cAMP含量、PKA活性显著低于正常对照组,四君子汤组大鼠VIP及cAMP含量、PKA活性有一定程度恢复。模型组VAMP-8蛋白表达与正常对照组比较无显著差异,SNAP-23蛋白表达有所下降;与模型组比较,四君子汤组大鼠SNAP-23、VAMP-8蛋白表达增强。结论:四君子汤对利血平脾虚大鼠唾液淀粉酶分泌障碍有一定疗效,可能通过恢复脾虚大鼠腮腺细胞VIP-cAMP信号通路改变起到治疗作用,包括提高VIP含量和提高SNAP-23和VAMP-8蛋白表达。

血管活性肠肽对便秘大鼠排便及结肠组织中VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路的影响

目的:观察血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)对便秘大鼠肠道水液代谢、环磷酸腺苷-蛋白激酶A信号通路(cyclic AMP protein kinase A signaling pathway,c AMP-PKA)和水通道蛋白3(water channel protein 3,AQP3)的影响,探讨VIP治疗便秘的作用及机制。方法:45只健康成年Sprague-Dawley大鼠随机分为空白对照组、模型组、模型+VIP组。给药4周后,墨汁灌胃法检测大鼠首粒黑便排出时间;根据大鼠粪便干湿重计算粪便含水率;HE染色观察各组大鼠结肠组织形态学变化;Western印迹检测各组大鼠结肠组织中VIP和AQP3蛋白表达水平;定量即时聚合酶链锁反应(quantitative real time polymerase chain reaction,q PCR)检测各组大鼠结肠组织中c AMP,PKA和AQP3 m RNA的表达水平。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠首粒黑便出现时间延长,粪便含水率明显减少(均P<0.01);结肠黏膜上皮部分破坏,杯状细胞体积减小,数量明显减少;结肠组织中VIP和AQP3蛋白含量明显减少,AQP3,c AMP和PKA m RNA相对表达水平均有所降低(均P<0.05)。与模型组比较,模型+VIP组大鼠首粒黑便出现时间缩短,粪便含水率明显增加(均P<0.05);结肠黏膜上皮完整性明显改善,杯状细胞体积增大,数量增多;结肠组织中VIP和AQP3蛋白含量增多,CAMP,PKA和AQP3 m RNA相对表达水平升高(均P<0.05)。结论:VIP静脉注射能够调节肠道水液代谢,改善大鼠便秘症状,其机制可能与调节VIP-c AMP-PKA-AQP3信号通路有关。

VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路与肺肠合治法治疗支气管哮喘的研究进展

肺肠合治法是中医临床治疗支气管哮喘的常用方法之一,中医的肺和大肠属于功能概念,包涵西医学的"肺"和"大肠",两脏在功能上相互联系,在治疗上相互为用,从系统生物学的角度,两者之间应当存在着共同的物质基础和相关的信号传导通路,但目前尚不十分清楚。文献研究表明,VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路既参与支气管哮喘(肺病)的发病,又在功能性便秘(肠病)的发病机制中发挥重要作用,VIP和AQP3既是治疗支气管哮喘的重要靶点,又是通肠泻下法治疗功能性便秘的作用靶点,这一结果提示该信号通路可能是肺与大肠之间相互联系的物质基础。本文以该通路为切入点,分析其在哮喘发病中的作用以及肺肠合治法对该通路的影响,以期为哮喘的治疗提供新的靶点。

基于大肠主津理论助阳通便膏对便秘模型小鼠结肠组织VIP-CAMP-PKA-AQP3通路的影响

目的观察助阳通便膏对便秘模型小鼠结肠组织VIP-CAMP-PKA-AQP3信号通路的影响。方法将作为实验对象的96只雄性BALB/C小鼠随机分成4组,即正常对照组、模型对照组、助阳通便膏组以及麻仁软胶囊组,24只/组。造模予以复方地芬诺酯片混悬液灌胃的方法进行。在模型建立后,每组小鼠对应给予蒸馏水、助阳通便膏及麻仁软胶囊连续行2周灌胃,结束后取材,应用不同方法——RT-PCR法、Wester Blot法及免疫荧光双标法,观测各组小鼠的结肠组织中血管活性肠肽(VIP)、环磷酸腺苷(CAMP)、蛋白激酶(PKA)和水通道蛋白3(AQP3)的表达。结果通过RT-PCR的方法发现,助阳通便膏组VIP、AQP3mRNA表达水平显著高于模型对照组(P<0.05)。通过Wester Blot的方法发现,助阳通便膏组VIP、CAMP、PKA、AQP3蛋白相对表达水平灰度值均显著高于模型对照组(P<0.05),且助阳通便膏组AQP3、CAMP蛋白相对表达水平灰度值较麻仁软胶囊组显著增高(P<0.05),与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。通过免疫荧光双标的方法发现,助阳通便膏组VIP-AQP3、CAMP-PKA免疫荧光双标表达双阳性细胞数均显著高于模型对照组(P<0.05)。且助阳通便膏组VIP-AQP3双阳性细胞数与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论助阳通便膏治疗慢传输型便秘的作用机制可能是通过提高结肠组织中VIP-CAMP-PKA-AQP3通路表达水平来实现的。

基于VIP-cAMP-PKA-AQP8通路探讨痛泻要方对腹泻型肠易激综合征的治疗机制

目的基于VIP-cAMP-PKA-AQP8通路探讨痛泻要方对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)的治疗机制。方法选取2020年7月~2021年8月在我院治疗的106例肠易激综合征(IBS)患者为研究对象,根据罗马Ⅲ诊断标准和IBS亚型分型标准将其分为腹泻型(IBS-D组,n=74)和便秘型(IBS-C组,n=32),同期选取30例健康志愿者作为健康对照组。采用RT-PCR检测三组研究对象AQP8 mRNA、VIP mRNA表达,分析AQP8、VIP基因表达的相关性。IBS-D组患者给予痛泻要方治疗,比较治疗前后AQP8 mRNA、VIP mRNA、蛋白激酶A(PKA)及环磷酸腺苷(cAMP)表达水平,并分析各指标与疗效的相关性。结果IBS-D组AQP8 mRNA表达水平低于IBS-C组和健康对照组,VIP mRNA表达水平高于IBS-C组和健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。AQP8 mRNA与VIP mRNA表达量呈负相关(r=-0.534,P=0.000)。治疗后,IBS-D组患者AQP8 mRNA表达水平高于治疗前,VIP mRNA、PKA、cAMP表达水平低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05)。AQP8 mRNA表达水平与疗效呈正相关(r=0.671,P<0.05),而VIP mRNA、PKA、cAMP表达水平与疗效呈负相关(r=-0.423、-0.545、-0.397,P<0.05)。结论IBS患者症状与AQP8 mRNA、VIP mRNA表达密切相关,痛泻要方可能是基于VIP-cAMP-PKA-AQP8通路发挥其药理作用。

基于VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路探讨益气润肠方治疗气虚型便秘大鼠的作用机制

目的:基于VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路探讨益气润肠方对气虚便秘模型大鼠作用及其机制。方法:选取48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、乳果糖组、益气润肠方低剂量组、益气润肠方中剂量组和益气润肠方高剂量组,每组8只。空白组大鼠正常饮食,每日给予生理盐水灌胃,其余大鼠给予洛哌丁胺混悬液3 mg/(kg·d)灌胃加饥饱饮食2周制作气虚便秘模型。造模成功后,空白组及模型组每日给予生理盐水灌胃,乳果糖组给予乳果糖口服溶液1.67 g/(kg·d)灌胃,益气润肠方高、中、低剂量组分别给予益气润肠方17.5、8.75、4.375 g/(kg·d)灌胃,连续2周。14 d后称量大鼠粪便湿重、粪便干重并计算粪便含水率;留取结肠组织,采用苏木精伊红染色法观察结肠病理变化,qPCR检测大鼠结肠血管活性肠肽(VIP)、环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)、水通道蛋白3(AQP3)mRNA表达水平,Western blot检测大鼠VIP、AQP3蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠体质量明显降低(P<0.01),粪便湿重及粒数明显减少(P<0.01);与模型组比较,益气润肠方低、中、高剂量组和乳果糖组体质量明显增高(P<0.01,P<0.05),粪便湿重增加、粪便粒数增多(P<0.05,P<0.01),但粪便含水率无统计学意义(P>0.05)。与乳果糖组比较,益气润肠方中、高剂量组粪便湿重明显增加、粪便粒数显著增多(P<0.05)。与空白组比较,模型组VIP、cAMP、PKA、AQP3 mRNA表达水平明显降低(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,乳果糖组及益气润肠方各剂量组VIP、cAMP、PKA、AQP3 mRNA表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),益气润肠方高剂量组效果最显著(P<0.01),且优于乳果糖组(P<0.05)。与模型组比较,益气润肠方各剂量组VIP、AQP3的蛋白表达水平升高,且呈剂量依赖性(P<0.05)。益气润肠方可以明显改善咯派丁胺造成的便秘大鼠的肠道病理形态损害。结论:益气润肠方可通过调控VIP-cAMP-PKA-AQP3通路治疗大鼠气虚型便秘。

枳术丸调控VIP、cAMP、PKA、AQP1对慢传输型便秘小鼠肠道水液代谢的影响

目的探讨枳术丸对慢传输型便秘脾虚证小鼠肠道水液代谢的影响。方法用番泻叶灌胃+饥饱失常法建立慢传输型便秘脾虚证小鼠模型并随机分为模型组(蒸馏水)、莫沙必利组(2.5mg·kg^(-1))、枳术丸组(11.7g·kg^(-1)),另设空白组(蒸馏水),每组10只。分组治疗7d后,观察各组小鼠的一般行为学特征,检测各组小鼠肠道推进率、粪便含水量,采用HE染色观察各组小鼠结肠组织病理形态改变,Elisa法检测小鼠结肠血管活性肠肽(VIP)、环磷腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)含量,Western-Blot检测结肠cAMP、PKA、水通道蛋白1(AQP1)蛋白表达。结果与空白组相比,模型组肠道推进率、粪便含水量均减少(P<0.05),Elisa法检测示结肠组织VIP、cAMP、PKA含量均降低(P<0.05或P<0.01),Western-Blot结果示结肠组织cAMP、PKA蛋白表达减少(P>0.05,P<0.01),AQP1蛋白表达增加(P<0.05)。与模型组比较,莫沙必利组和枳术丸组肠道推进率呈增加趋势(P>0.05),粪便含水量增加(P<0.05)。Elisa法检测示结肠组织VIP呈上升趋势(P>0.05),cAMP、PKA含量均明显增加(P<0.01),Western-Blot结果示结肠组织cAMP、PKA蛋白表达增加(P>0.05,P<0.01),AQP1蛋白表达减少(P<0.05)。结论枳术丸可以改善慢传输型脾虚证便秘小鼠的便秘症状,其机制可能与上调VIP-cAMP-PKA通路从而降低结肠AQP1表达,减少肠道水分重吸收,软化大便有关。

硝菔通结方对功能性便秘大鼠结肠组织中VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路的影响

目的:探讨硝菔通结方对功能性便秘大鼠结肠组织中VIP-c AMP-PKA-AQP3信号通路的影响。方法:SD雄性大鼠150只,随机分为5组,分别为正常组、模型组、硝菔通结方高、中、低剂量组(380,190,95 g·kg-1),每组30只,除正常组外采用复方地芬诺酯ig法建立SD大鼠功能性便秘模型,给予不同剂量硝菔通结方ig,共给药4周。检测大鼠首粒黑边排出时间及粪便含水率;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白质免疫印迹(Western blot)分别检测治疗1,2,3周不同时间点大鼠结肠组织中血管活性肠肽(VIP),环磷酸腺苷(c AMP),蛋白激酶A(PKA),水通道蛋白3(AQP3)mRNA及蛋白质的表达变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠首粒黑便排出时间显著延长,粪便含水率显著降低(P<0.01),结肠组织中VIP,c AMP,PKA,AQP3的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,硝菔通结方各剂量组大鼠首粒黑便排出时间显著缩短,粪便含水率明显增加(P<0.05,P<0.01),结肠组织中VIP,c AMP,PKA,AQP3的mRNA和蛋白表达水平均有升高趋势,且高、中剂量组较低剂量组升高更显著,给药后第2,3周较第1周的指标变化更显著(P<0.05,P<0.01)。结论:硝菔通结方能够调节胃肠动力和改善肠道水液代谢治疗功能性便秘,其机制可能是通过干预VIP-c AMP-PKAAQP3通路来实现,并且具有一定的时间和剂量依赖性。

血管活性肠肽及其类似物对大鼠腹腔肥大细胞功能的影响

目的研究血管活性肠肽(VIP)对大鼠腹腔肥大细胞功能的影响。方法分离、纯化SD大鼠腹腔肥大细胞,应用不同浓度的VIP、VIP受体抑制剂(L-8-K)和VIP类似物(VIP6-28)作用于大鼠腹腔肥大细胞后,同位素放射液态闪烁法检测肥大细胞的组胺释放、45Ca内流和细胞内cAMP含量的变化。结果5×106mol/L的VIP、VIP6-28作用后大鼠腹腔肥大细胞组胺释放及45Ca内流明显增加、细胞内cAMP水平明显降低,并且这种变化与VIP、VIP6-28之间呈剂量效应关系;L-8-K对VIP诱导的肥大细胞组胺释放、45Ca内流的变化无明显影响。结论VIP通过非受体依赖途径引起肥大细胞钙内流增加、细胞内cAMP水平下降,进一步诱导肥大细胞脱颗粒、释放组胺等生物活性物质,产生生物学效应。

基于VIP/cAMP/PKA/AQP5信号通路探讨针刺治疗水液缺乏型干眼的作用机制

目的:观察针刺对水液缺乏型干眼(ATD)豚鼠眼表症状及泪腺组织中血管活性肠肽(VIP)/环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/水通道蛋白5(AQP5)信号通路相关蛋白表达的影响,探讨针刺治疗ATD的作用机制。方法:40只豚鼠随机分为空白组、模型组、针刺组、假针组和西药组,每组8只。皮下注射氢溴酸东莨菪碱复制ATD模型。针刺组针刺双侧“睛明”“攒竹”“丝竹空”“太阳”“瞳子髎”,每次15 min,每日1次;假针组每5 min钝针点压上述穴位1次,共3次;西药组双眼滴玻璃酸钠滴眼液,3次/d,每次1滴。以上3组均治疗14 d。分别于造模前、造模后及干预后进行酚红棉线泪液分泌量(PRT)实验、测定泪膜破裂时间(BUT)和角膜荧光素钠染色评分(FLS)。干预后泪腺称重,计算泪腺指数;HE染色法观察泪腺组织病理形态变化;免疫荧光染色法检测泪腺组织AQP5的表达;ELISA法检测泪腺组织VIP和AQP5含量;Western blot法检测泪腺组织VIP、cAMP、PKA、磷酸化(p)-PKA及AQP5蛋白表达。结果:造模后,与空白组比较,其余4组PRT减少、BUT缩短(P<0.01,P<0.05),FLS升高(P<0.05,P<0.01)。干预后,与空白组比较,模型组PRT减少、BUT缩短(P<0.01),FLS升高(P<0.01),泪腺指数降低(P<0.01),泪腺组织VIP含量、AQP5免疫荧光强度及含量降低(P<0.01),VIP、cAMP、PKA、p-PKA和AQP5蛋白表达降低(P<0.01,P<0.05)。干预后,与模型组比较,针刺组和西药组PRT增多、BUT延长(P<0.01,P<0.05),FLS降低(P<0.01,P<0.05),泪腺指数升高(P<0.05),泪腺组织VIP含量、AQP5免疫荧光强度及含量升高(P<0.01);针刺组泪腺组织VIP、cAMP、PKA、p-PKA、AQP5蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01);西药组VIP和AQP5的蛋白表达升高(P<0.05)。与假针组比较,针刺组和西药组PRT增多、BUT延长(P<0.01,P<0.05),FLS降低(P<0.01,P<0.05),泪腺组织VIP含量、AQP5免疫荧光强度及含量升高(P<0.05,P<0.01);针刺组泪腺组织VIP、cAMP、PKA、AQP5蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01);西药组AQP5的蛋白表达升高(P<0.05)。与西药组比较,针刺组PRT增多(P<0.05)。空白组泪腺结构无明显异常;模型组和假针组泪腺上皮细胞明显萎缩,可见淋巴细胞浸润;针刺组和西药组泪腺上皮细胞结构基本正常,部分腺腔扩张,可见少量淋巴细胞浸润。结论:针刺可减轻干眼眼表损伤,促进泪液分泌,其作用机制可能与激活VIP/cAMP/PKA/AQP5信号通路,增强泪腺分泌功能有关。

基于VIP/cAMP/PKA/AQPs信号通路研究肺肠合治法减轻肺水肿治疗急性肺损伤的作用机制

目的:探究肺肠合治法(麻黄汤+大承气汤)减轻脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺水肿的作用和机制。方法:Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、肺肠合治低、中、高剂量组、地塞米松组。采用LPS(10 mg·kg^(-1))腹腔注射复制ALI大鼠模型,造模后开始灌胃给药,正常组给予生理盐水(25 m L·kg;),肺肠合治低(5 g·kg^(-1))、中(7.5 g·kg^(-1))、高(10 g·kg^(-1))剂量组分别给予(麻黄汤+大承气汤)灌胃,阳性药组给予地塞米松(5 mg·kg^(-1)),分别于LPS注射后0、8、16 h给药,共3次。给药结束后取肺组织及血清,肺组织苏木素-伊红(HE)染色,进行肺水肿评分;计算各组大鼠肺组织干/湿(D/W)质量比;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清血管活性肠肽(VIP)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠肺组织水通道蛋白1(AQP1)、水通道蛋白5(AQP5)、VIP、环磷酸腺苷(c AMP)、磷酸化蛋白激酶A(p-PKA)、蛋白激酶A(PKA)蛋白的表达量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组大鼠肺组织中VIP m RNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠肺损伤明显,水肿评分升高,肺组织D/W降低(P<0.01),肺组织AQP1、AQP5、c AMP、p-PKA/PKA明显降低(P<0.05,P<0.01),VIP含量显著升高(P<0.01),肺组织VIP蛋白和m RNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,肺肠合治组大鼠肺损伤减轻,肺组织D/W显著升高(P<0.01),肺组织AQP1、AQP5、VIP、c AMP、p-PKA/PKA升高(P<0.05,P<0.01),肺组织VIP表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论:肺肠合治法能减轻急性肺损伤造成的肺组织水肿,其机制可能通过激活VIP/c AMP/PKA信号通路,进而促进水通道蛋白AQP1、AQP5的表达,增强肺组织的水液代谢有关。

大黄素对术后肠梗阻大鼠胃肠动力、炎症和氧化应激反应的影响及机制研究

目的:探究大黄素(Emo)对术后肠梗阻(POI)大鼠胃肠动力、炎症和氧化应激反应的影响及相关机制。方法:将30只健康成年雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、针灸治疗组、Emo治疗组和通路干预组,每组6只。通过腹部手术在大鼠中诱导POI模型。对照组和模型组大鼠给予0.9%氯化钠溶液。针灸治疗组给予针刺相应腧穴。Emo治疗组给予Emo 80 mg/kg灌胃。通路干预组给予Emo 80 mg/kg灌胃和血管活性肠肽(VIP)激活剂Prepro VIP 5 nmol/kg尾静脉注射。通过胃排空(GE)和胃肠道转运(GIT)实验来确认胃肠道运动。通过检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平和髓过氧化物酶(MPO)活性来确认炎症反应。通过检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)水平来证实氧化应激反应。采用HE染色观察组织病理学变化。采用Western blot检测VIP/环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)信号通路相关蛋白表达情况。结果:与对照组比较,模型组组织结构受损明显,GE、GIT、SOD、GSH-Px水平降低,TNF-α、IL-1β、MDA、VIP、cAMP、水通道蛋白3(AQP3)、磷酸化PKA(p-PKA)水平和MPO活性升高(均P<0.05)。经针灸和Emo治疗后,组织结构损伤得到明显改善,GE、GIT、SOD、GSH-Px水平增加,TNF-α、IL-1β、MDA、VIP、cAMP、AQP3、p-PKA水平和MPO活性降低(均P<0.05)。此外,使用VIP激动剂可明显逆转Emo治疗对POI大鼠的影响。结论:Emo可能通过抑制VIP/cAMP/PKA信号通路防止POI大鼠胃肠动力下降,并降低炎症及氧化应激水平。

双歧杆菌调节VIP/cAMP/PKA和mTOR通路改善溃疡性结肠炎小鼠的实验研究

目的:探讨双歧杆菌MIMBb75通过调节血管活性肠肽(VIP)/环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路对溃疡性结肠炎(UC)小鼠的影响。方法:BALB/c小鼠随机分为正常对照(NC)组、结肠炎模型(UC)组、Mesalazine组和MIMBb75低、高剂量组、MIMBb75高剂量+VIP antagonist组、MIMBb75高剂量+MHY1485组(每组10只),除NC组外均采用5%葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导UC模型。治疗结束后,观察小鼠的一般情况及UC疾病活动指数(DAI),检测小鼠肠道组织病理损伤、结肠组织中髓过氧化物酶(MPO)活性、肠道菌群多样性(Chao指数、Shannon指数和Simpson指数)及结肠组织VIP、cAMP、PKA、水通道蛋白3(AQP3)、mTOR、核糖体蛋白S6激酶(S6K1)的mRNA和蛋白水平。结果:与UC组相比,MIMBb75低、高剂量组和Mesalazine组小鼠的体重升高、DAI评分降低,组织病理损伤得到改善,结肠长度增加,MPO活性降低,Chao指数、Shannon指数和Simpson指数升高;VIP、cAMP、PKA、AQP3的mRNA水平和VIP、cAMP、AQP3蛋白的表达及PKA的磷酸化水平升高,mTOR和S6K1 mRNA及其蛋白的磷酸化水平降低(P<0.05)。与MIMBb75高剂量组相比,MIMBb75高剂量+VIP antagonist组VIP、cAMP、PKA、AQP3的mRNA水平和VIP、cAMP、AQP3蛋白的表达及PKA的磷酸化水平降低(P<0.05);MIMBb75高剂量+MHY1485组mTOR和S6K1 mRNA及其蛋白的磷酸化水平升高(P<0.05)。VIP antagonist和MHY1485均能逆转MIMBb75对UC小鼠的保护作用,使其结肠损伤加重,MPO活性增高(P<0.05)。结论:双歧杆菌可改善UC小鼠的结肠损伤,增加肠道菌群的多样性,这可能与激活VIP/cAMP/PKA通路、抑制mTOR通路有关。

归芪白术方联合奥沙利铂通过调节VIP/cAMP/PKA/AQPs信号通路保护胃癌荷瘤小鼠肠道屏障

目的:探讨归芪白术方联合奥沙利铂通过血管活性肠肽(VIP)/环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)信号通路调控下游水通道蛋白3(AQP3)和水通道蛋白4(AQP4)从而保护胃癌荷瘤小鼠肠道屏障的作用。方法:将密度为1×10^(7)个/mL的胃癌细胞株MFC制成细胞悬液,经荷瘤小鼠右腋下接种细胞悬液0.2 mL,构建胃癌荷瘤小鼠模型,造模成功后将小鼠随机分为5组,模型组、奥沙利铂组(10mg·kg^(-1))、奥沙利铂加归芪白术方高、中、低剂量组(17.68、8.84、4.42 g·kg^(-1)),每组10只,另外余10只作为空白组。各组小鼠经灌胃或腹腔注射中药、奥沙利铂或生理盐水,治疗14 d。末次给药后,次日眼球取血分离血清并取其结肠样本。苏木素-伊红(HE)染色观察组织形态的变化。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中D-乳酸(D-LA)、二胺氧化酶(DAO)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测各组小鼠结肠组织中VIP、cAMP、PKA、AQP3和AQP4 mRNA及蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组黏膜下层水肿,黏膜层中肠腺排列紊乱,杯状细胞缺失,可见大量炎性细胞浸润及绒毛脱落的现象。而各给药组均有不同程度的改善;与正常组比较,模型组血清中DAO和D-LA水平均显著上升(P<0.01),与模型组比较,联合用药高剂量组DAO和D-LA水平及联合用药中剂量组D-LA水平均有所下降(P<0.05,P<0.01),与奥沙利铂组比较,联合用药高、中剂量组D-LA水平有所下降(P<0.05),其余组DAO和D-LA表达水平也有所下降,但差异无统计学意义;与正常组比较,模型组小鼠的VIP、cAMP、PKA、AQP3和AQP4 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,各给药组小鼠的VIP、cAMP、PKA、AQP3和AQP4 mRNA及蛋白表达水平均有所升高,其中联合用药高剂量组VIP、cAMP、PKA、AQP3和AQP4 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),联合用药中剂量组cAMP蛋白表达水平升高(P<0.05);与奥沙利铂组比较,联合用药高剂量组cAMP蛋白表达水平明显升高(P<0.05),其余组mRNA及蛋白表达也有所升高,但差异无统计学意义。结论:归芪白术方联合奥沙利铂通过VIP/cAMP/PKA信号通路调节AQP3和AQP4达到保护胃癌荷瘤小鼠肠道屏障的作用。

附子-肉桂调控结肠VIP/cAMP/PKA/AQP通路改善大鼠阳虚型慢传输型便秘

目的:通过血管活性肠肽(VIP)/环状磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/水通道蛋白(AQP)通路探究附子-肉桂对阳虚型慢传输便秘(STC)大鼠肠道功能的影响及作用机制。方法:将SD大鼠随机分为6组(n=6),包括正常组、模型组、附子-肉桂高剂量组、附子-肉桂中剂量组、附子-肉桂低剂量组及普芦卡必利组。除正常组以外,其余组均采用盐酸洛哌丁胺联合冰水灌胃造模法,建立阳虚型STC大鼠模型。记录各组大鼠首次黑便排出时间,粪便数量,粪便含水量,肠道推进率及粪便性状评分。通过苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织病理形态,阿利新蓝-过碘酸-雪夫(AB-PAS)染色观察结肠黏液分泌情况。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中VIP的水平。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测结肠组织中AQPs mRNA表达水平,免疫组化检测结肠和肾组织中AQPs表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中cAMP、PKA及VIP的蛋白表达水平。结果:与空白组大鼠相比,模型组大鼠首粒黑便排出时间显著加长,粪便粒数及含水量显著减少,粪便性状评分及肠道推进率显著降低(P<0.01);大鼠肠道病变重,黏液分泌减少;血清中VIP含量显著减少,结肠和肾组织中水通道蛋白1(AQP1)表达水平显著增加,水通道蛋白3(AQP3)及水通道蛋白(AQP9)表达水平显著减少(P<0.01);结肠组织中cAMP、PKA及VIP表达降低。与模型组大鼠比较,高剂量附子-肉桂组大鼠首粒黑便排出时间缩短,粪便粒数及含水量增加,粪便性状评分及肠道推进率提高;附子-肉桂高剂量组,大鼠肠道病变减轻,黏液分泌增加;血清中VIP含量增加(P<0.01),结肠和肾组织中AQP1表达水平明显降低,AQP3及AQP9表达水平明显增加(P<0.05,P<0.01)。附子-肉桂高剂量组大鼠结肠组织中cAMP、PKA及VIP表达也显著增加(P<0.01)。结论:附子-肉桂高剂量组可以通过上调VIP/cAMP/PKA/AQP通路提高肠道动力,平衡肠道水液代谢,从而改善阳虚型慢传输便秘大鼠的便秘症状。