番鸭VIPR1和miR-317以及MAP3K7和miR-244靶向关系的研究

试验旨在验证番鸭就巢相关miRNA与靶基因靶向关系。试验利用miRanda、PITA和RNAhybrid三个软件的交集预测miR-317和miR-244靶基因,构建VIPR1-pmirGLO/MAP3K7-pmirGLO野生型和突变型双荧光素酶重组载体,将miR-317/VIPR1-Wt和miR-244/MAP3K7-Wt分别共转染至鸭胚成纤维细胞,检测双荧光素酶活性。结果显示:与miR-NC组相比,miR-317/VIPR1-Wt共转染组相对荧光值显著降低(P<0.05);VIPR1突变后,miR-NC组与miR-317组的相对荧光值不显著(P>0.05),说明突变后完全抑制miR-317对VIPR1的结合作用,VIPR1与miR-317之间存在相互结合作用。与miR-NC组相比,miR-244/MAP3K7-Wt共转染组相对荧光值无显著性差异(P>0.05);MAP3K7突变后,miR-NC组与miR-244组的相对荧光值差异不显著(P>0.05),表明MAP3K7与miR-244之间不存在相互结合作用。研究提示,miR-317与VIPR1存在确切靶向结合位点,即VIPR1是miRNA miR-317的靶基因,而miR-244与MAP3K7不存在靶向关系。

肝癌细胞中VIPR1互作蛋白质谱分析及肝癌预后模型的构建

目的:寻找与血管活性肠肽受体1(vasoactive intestinal peptide receptor 1,VIPR1)相互作用的蛋白并构建肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)预后模型。方法:采用免疫共沉淀技术(Co-immunoprecipitation,Co-IP)筛选Flag标签抗体结合的蛋白复合体,采用SDS-PAGE银染实验和Western blot进行验证,采用质谱分析(liquid chromatograph-mass spectrometer,LC-MS)获得VIPR1的互作蛋白,采用生物信息学软件和癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas project,TCGA)数据库筛选hub互作蛋白、富集分析、构建HCC预后模型并采用国际癌症基因组联盟(International Cancer Genome Consortium,ICGC)中LIHC数据和GSE14520数据集作为外部数据对其预测准确性进行验证。结果:得到196个VIPR1的互作蛋白,筛选出8个关键模块共104个hub互作蛋白,主要与细胞骨架、核糖体的功能和细胞免疫密切相关,获得7个关键蛋白并构建了HCC预后Lasso回归模型,随后在两个外部数据集中验证了该模型在预测HCC预后方面具有可接受的准确性及临床适用性。结论:VIPR1的互作蛋白可促进HCC发生发展,其中关键蛋白构建的HCC预后模型有良好的准确性。

狮头鹅VIPR1基因cDNA全长克隆及组织表达研究

本研究旨在克隆狮头鹅血管活性肠肽I型受体(Vasoactive Intestinal Peptide Type Receptor 1,VIPR1)基因cDNA全长序列,分析其组织表达规律。通过RACE、RT-PCR技术获取狮头鹅VIPR1基因cDNA全长序列,并利用生物信息学手段进行分析;采用qRT-PCR检测该基因在115日龄狮头鹅22个组织中的表达水平。结果表明:成功获得该基因全长cDNA共2402 bp序列,5'-UTR、3'-UTR和ORF分别为203、861、1338 bp,该基因编码445个氨基酸;狮头鹅VIPR1基因与哺乳动物、两栖类和鱼类的一致性在65.5%~75.7%,与禽类的一致性达90.1%以上;各物种VIPR1蛋白进化树符合物种进化规律。蛋白理化性质分析表明VIPR1蛋白为一偏碱性不稳定的疏水性蛋白,具有1个激素受体结构域和7个跨膜域。VIPR1 mRNA在各组织中均有表达,其在垂体和肺组织中表达量较高。综上,本研究成功克隆了狮头鹅VIPR1 cDNA全长序列,与其他禽类VIPR1氨基酸序列高度同源,且该基因在多个组织中广泛表达,在垂体中具有较高表达量。

眼针疗法对D-IBS模型大鼠结肠VIPR1表达的影响

目的观测眼针对腹泻型肠易激综合征(D-IBS)模型大鼠血清、结肠组织中血管活性肠肽(VIP)含量及结肠组织VIP受体1(VIP-R1)表达的变化,探讨眼针治疗D-IBS的作用机制。方法 30只雄性SPF级大鼠,分为对照组、IBS模型组和眼针组,采用慢性应激与束缚相结合的方法复制D-IBS模型后,进行眼针治疗7 d。应用ELISA方法检测VIP含量;采用免疫组化、RT-PCR方法检测VIP-R1表达。结果与对照组比较,模型组血清、结肠组织中VIP含量及VIP-R1表达明显增高和上调(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,眼针组血清、结肠组织中VIP含量及VIP-R1表达明显下降和下调。结论眼针治疗D-IBS的机制之一可能与抑制血清、结肠组织VIP释放、下调VIP-R1表达有关。

薏苡仁多糖不同组分对脾虚水湿不化模型大鼠结肠VIPR1和AQP3表达的影响

目的:研究薏苡仁多糖不同组分对脾虚水湿不化模型大鼠结肠血管活性肠肽受体1(VIPR1)和水通道蛋白3(AQP3)表达的影响,探讨薏苡仁多糖对脾虚水湿不化模型大鼠水液代谢调控的作用机制。方法:复制脾虚水湿不化大鼠模型,用薏苡仁多糖、薏苡仁多糖组分I、薏苡仁多糖组分II干预后,采用Real time-PCR法检测VIPR1、AQP3的mRNA表达水平变化;Western Blot法检测VIPR1、p-CREB、AQP3蛋白表达水平变化。结果:与对照组比较,模型组结肠VIPR1的mRNA和蛋白表达水平显著升高,而结肠AQP3的mRNA和蛋白表达水平显著降低,p-CREB蛋白表达水平显著降低。与模型组比较,0.9113g/kg的薏苡仁多糖不同拆分组分使结肠组织VIPR1的mRNA和蛋白表达水平均有不同程度的降低,而结肠组织AQP3的mRNA和蛋白表达水平以及p-CREB蛋白表达水平有不同程度的升高,薏苡仁多糖组分I组作用最明显。结论:通过下调结肠中VIPR1的表达及上调AQP3的表达,调控结肠水液代谢可能是薏苡仁多糖治疗脾虚水湿不化模型大鼠的作用机制之一。

AR与VIPR1蛋白在不同表型鸡冠的免疫组织化学与比较组织学研究

为了研究下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴相关基因雄激素受体(AR)与血管活性肠肽受体1(VIPR1)对鸡冠发育的影响,试验采用免疫组织化学和比较组织学方法对17羽不同冠型的16周龄宁都黄公鸡的鸡冠组织中AR与VIPR1蛋白的表达规律进行了研究。结果表明:AR与VIPR1蛋白在不同冠型中均有免疫组织化学阳性表达,宁都黄公鸡细齿冠AR与VIPR1蛋白免疫组织化学阳性细胞比率显著低于其他冠型(P<0.05),倒冠AR与VIPR1蛋白的免疫组织化学阳性细胞比率均显著高于其他冠型(P<0.05),并且在鸡冠窦状血管网内皮细胞及生发层细胞中具有较高免疫组织化学阳性反应。鸡冠中间层由于胶原纤维网较为松散,其中散乱分布的成纤维细胞具有AR和VIPR1蛋白的免疫组织化学阳性反应;几种冠型外周层均有血管分布,并具有AR与VIPR1蛋白的免疫组织化学阳性反应,相对于其他冠型细齿冠生发层中血管分布较少。说明AR与VIPR1蛋白的表达水平对鸡冠血管的诱导及扩张具有一定的影响,同时可能对外周层细胞具有迁移趋化作用,从而间接影响了鸡冠生发层的发展趋势,形成不同冠型。

鸡VIPR受体基因多态性与鸡冠性状的关联分析

为探究鸡血管活性肠肽受体基因(VIPR1和VIPR2)多态性与鸡冠性状的关系,采用PCR-SSCP和测序验证技术检测了优质肉鸡F系287只种鸡的SNPs,并进行了关联性分析。结果表明:VIPR1基因发现2个突变位点,分别为g.73352C>T突变,g.68818T>C突变;VIPR2基因发现1个突变,为g.36127A>G突变。χ~2检验发现,3个突变位点并不处于Hardy-Weinberg平衡状态;遗传参数分析发现,g.73352C>T属于高度多态,其余位点均属于中度多态。关联性分析表明:3个突变位点各基因型个体间生长激素(GH)和睾酮激素(TEST)含量无显著差异(P>0.05)。VIPR1基因g.73352C>T突变位点,TT基因型个体冠高、冠面积和肉垂面积显著大于CC基因型个体(P<0.05),g.68818T>C位点各基因型个体间冠高、冠面积、肉垂面积差异显著(P<0.05),VIP2基因g.36127A>G位点GG基因型个体冠高、冠面积和肉垂面积显著大于AA和AG基因型个体(P<0.05)。由此可见,VIPR1和VIPR2可能是影响鸡冠性状的主效基因或与控制该性状的主效基因连锁,能够作为候选基因用于鸡冠的分子标记辅助选择。

匹维溴胺对腹泻型肠易激综合征模型大鼠结肠组织血管活性肠肽及受体1表达的影响

[目的]观察匹维溴胺对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)模型大鼠结肠组织血管活性肠肽(VIP)水平及其受体1(VIP-R1)表达变化,探讨匹维溴胺治疗IBS-D机制。[方法]采用应激与束缚相结合的方法复制IBS-D模型后,应用ELISA、免疫组化、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测结肠组织VIP水平及VIP-R1的表达。[结果]匹维溴胺组结肠组织中VIP及其VIP-R1 mRNA的表达均明显低于模型组和对照组(均P<0.05)。[结论]匹维溴胺治疗IBS-D模型大鼠的药理学作用与VIP水平及VIP-R1表达下调有关。