禽腺病毒血清4型感染的LMH细胞mRNA表达谱分析

禽腺病毒血清4型(FAdV-4)引起的禽肝炎-心包积液综合征已严重危害我国养禽业的发展,迫切需要深入了解FAdV-4的致病机制并制定有效的防控方案。论文旨在利用高通量测序技术分析禽腺病毒血清4型感染鸡肝癌(Leghorn male hepatocellular,LMH)细胞后差异表达的mRNA,以探究mRNA在FAdV-4感染过程中的作用及其调控机制。结果显示,与对照组相比,FAdV-4感染48 h共筛选到2604个上调的差异表达基因,2883个下调的差异表达基因。其中,GNB3、NECTIN4、SFRP4、FABP2、PLPP3、GALR1L和MBL 2等基因之前并没有被报道过与FAdV-4感染相关。通过GO和KEGG分析得知,差异表达基因主要富集在从细胞表面位点和信号受体结合至细胞周期调节、MAPK信号通路、细胞黏附分子作用等;其中,显著下调的差异基因还富集到多种代谢途径中,提示病毒感染会影响宿主细胞的代谢水平。本研究为深入解析FAdV-4感染宿主细胞的致病机制提供了相关的理论基础及科学依据。

外周血TLR4 mRNA及IL-22、NLR联合检测对脓毒症患者预后的评估价值

目的分析外周血Toll样受体4(TLR4)mRNA及白细胞介素-22(IL-22)、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)联合检测对脓毒症患者预后的评估价值。方法选取2020年1月至2023年1月于海南医学院第一附属医院接受治疗的108例脓毒症患者作为研究对象,依据患者入院治疗日起1月内预后情况分为预后良好组(71例)与预后不良组(37例)。收集入组时两组患者的基本资料,性别、年龄、体质量指数(BMI)、入院时感染情况、糖尿病史、高血压史、心血管疾病史、使用血制品、机械通气、是否多器官衰竭等及实验室指标TLR4 mRNA、IL-22、NLR。单因素及多因素Logistic回归分析影响脓毒症预后不良的危险因素,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析TLR4 mRNA、IL-22、NLR单项及联合检测对脓毒症患者预后的评估效能。结果预后良好组与预后不良组年龄、有无高血压史、心血管疾病史、机械通气、多器官衰竭比较差异具有统计学意义(χ^(2)=4.427、5.698、4.618、6.948、7.300,P<0.05),预后不良组TLR4mRNA、IL-22、NLR水平均高于预后良好组,差异有统计学意义(t=7.649、4.205、8.243,P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,有机械通气、多器官衰竭、TLR4 mRNA、IL-22、NLR水平升高为脓毒症患者预后不良独立危险因素(P<0.05);ROC结果显示,TLR4 mRNA、IL-22、NLR单项及联合检测预测毒症患者预后不良曲线下面积(AUC)分别为0.846、0.747、0.669、0.914联合检测优于单一检测(P<0.05)。结论TLR4 mRNA、IL-22、NLR脓毒症患者预后有关,且均对患者预后情况具有良好的预测效能。

基于mRNA高通量测序初探雷帕霉素联合鞭毛蛋白体外抑制4T1乳腺癌细胞的机制

目的:利用mRNA高通量测序初步探讨雷帕霉素(Rapa)联合鞭毛蛋白(FliC)体外抑制4T1乳腺癌细胞的机制。方法:将4T1乳腺癌细胞分为对照(control)组、Rapa组、FliC组、Rapa+FliC组等4组,CCK-8法与流式细胞术检测细胞活力、凋亡的变化情况。同时,通过mRNA高通量测序,对差异表达基因(DEGs)进行KEGG通路分析;此外,通过STRING分析Rapa+FliC组与Rapa组两组间的DEGs,构建DEGs的蛋白相互作用(PPI)网络、筛选Hub基因。结果:CCK-8和流式细胞术检测结果显示,Rapa+FliC对4T1乳腺癌细胞的活力抑制率和凋亡率都显著高于Rapa和FliC(P<0.05)。转录组测序结果显示,Rapa组和control组之间共有579个DEGs,主要富集于PI3K/Akt等信号通路;FliC组和control组之间的DEGs主要富集于Nod样受体等信号通路;Rapa+FliC组与Rapa组之间共有150个DEGs,主要富集于mTOR等信号通路。从PPI网络中,成功筛选出Atm、Itga2等10个Hub基因。结论:Rapa+FliC可能通过PI3K/Akt/mTOR信号通路,在体外抑制4T1乳腺癌细胞活力,促进细胞凋亡;Atm和Itga2基因可能是两者联合作用的关键基因。

补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血患者骨髓VLA-4和VLA-5 mRNA表达的影响

【目的】观察补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血(CAA)患者的骨髓极迟活化抗原4(VLA-4)和极迟活化抗原5(VLA-5)mRNA表达的影响及其可能的作用机制。【方法】选取30例CAA肾阴阳两虚型患者为试验组,另招募10例无血液疾病及免疫系统疾病的健康志愿者为正常对照组。试验组患者给予补髓生血颗粒治疗,疗程6个月。采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(PT-PCR)法检测CAA患者治疗前后骨髓VLA-4和VLA-5 mRNA表达水平,并与正常对照组作比较。【结果】治疗前,CAA患者骨髓VLA-4 mRNA呈低表达状态,VLA-5 mRNA呈高表达状态,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);应用补髓生血颗粒治疗后,试验组患者VLA-4 mRNA表达水平较治疗前升高,VLA-5 mRNA表达水平较治疗前降低,差异均有统计学意义(P<0.05),但均未恢复到正常对照组水平,差异均有统计学意义(P<0.05)。【结论】CAA患者VLA-4和VLA-5 mRNA的异常表达可能参与CAA的发病过程;补髓生血颗粒可能通过调节VLA-4和VLA-5 mRNA的表达来改善CAA患者骨髓造血功能和恢复造血微环境的状态。

补髓生血颗粒对慢性再障患者粘附分子VLA-4mRNA表达的影响

造血干/祖细胞及骨髓造血微环境中粘附分子表达异常,可能参与了再障骨髓造血功能衰竭的病理过程。研究采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测慢性再障患者治疗前后骨髓单个核细胞VLA-4的mRNA表达水平。结果表明,慢性再障患者VLA-4的mRNA蛋白均呈低表达状态,补髓生血颗粒能提高其表达。结论提示,慢性再障患者存在粘附功能异常,补髓生血颗粒可能通过调节骨髓基质细胞粘附分子的表达来改善慢性再障造血细胞与造血微环境的粘附功能状态。

真核翻译起始因子4G1与恶性肿瘤的研究进展

真核翻译起始因子4G1(eIF4G1)是一种大型支架蛋白,在真核生物mRNA翻译起始过程中,可作为蛋白质的对接位点,介导帽依赖性与非帽依赖性翻译启动。eIF4G1是翻译调控中的重要靶标,被认为参与多种肿瘤细胞的生长、迁移、增殖、侵袭和凋亡。近年来,随着对eIF4G1研究的深入,临床对其作用和功能也有了更深的理解,本文总结相关文献,对eIF4G1的功能、研究现状及与肿瘤的关系做一简要综述。

LOXL4在乳腺癌中的表达水平及临床意义

目的探讨赖氨酰氧化酶-4(LOXL4)在乳腺癌患者组织中表达水平及与临床特征之间的关系。方法采用实时荧光定量PCR法检测乳腺癌细胞株及我院收治的30例乳腺癌患者组织样本中LOXL4 mRNA表达水平;采用免疫组化法检测乳腺癌组织LOXL4蛋白表达水平,并对结果进行统计分析。结果MCF-7、SKBR-3、MDA-MB-231、MDA-MB-468四株乳腺癌细胞中LOXL4 mRNA表达量较对照组细胞株MCF10A升高,差异有统计学意义(P<0.05)。30例乳腺癌患者组织样本LOXL4 mRNA表达的阳性率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);LOXL4 mRNA在Ⅲ~Ⅳ期患者中表达量较Ⅰ~Ⅱ期升高,差异有统计学意义(P<0.05);转移组LOXL4基因表达水平较未转移组升高,差异有统计学意义(P<0.05);SP结果表明,乳腺癌患者LOXL4表达阳性率为90.0%(27/30),其中弱阳性和强阳性占总病例数的比例分别为30%(9/30)和60%(18/30);对照组乳腺组织中LOXL4表达阳性率为26.7%(8/30),阳性染色强度均较乳腺癌组弱,乳腺癌患者乳腺组织LOXL4蛋白表达阳性率较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论LOXL4无论在基因水平还是蛋白水平,在乳腺癌患者中高表达,可能参与疾病进展,可作为一种潜在的肿瘤生物标志物。

人肝癌及癌旁组织中Smad4、Smad7mRNA和蛋白表达研究

目的 :分析Smad 4、Smad 7mRNA和蛋白在人肝癌组织中的表达并与癌旁组织比较 ,了解Smad 4mRNA和蛋白与肝癌临床病理特征之间的关系。方法 :用原位杂交和免疫组化方法检测 36例肝癌存档病理标本和其中的 2 8例癌旁组织病理标本Smad 4、Smad 7mRNA和相应的蛋白。结果 :Smad 4mRNA和其蛋白在肝癌组织中的表达低于肝癌癌旁组织 ,癌组织表达率分别为 2 8%和 19% ,癌旁组织表达率分别为 86 %和 75 % ,两者之间差别有统计学意义(P <0 .0 1)。Smad 7mRNA和其蛋白表达则相反 ,癌组织表达强 ,表达率分别为 6 6 %和 6 4 % ,癌旁组织表达率分别为14 %和 36 % ,两者之间差别有统计学意义 (P <0 .0 1和P <0 .0 5 )。Smad 4mRNA和蛋白与肝癌患者年龄、性别和肿瘤大小无关 ,但与肿瘤细胞类型、是否转移存在相关性。结论 :Smad 4和Smad 7蛋白作为转化生长因子 - β(TGF β)信号转导途径的下游分子 ,在肝癌组织中表达发生了改变 ,参与肝癌的发生、发展。

补肾强督方对强直性脊柱炎患者外周血IL-18、IFN-γ、IL-4 mRNA表达水平的影响

目的探讨补肾强督方治疗强直性脊柱炎(AS)的可能作用机制。方法30例AS患者予补肾强督方进行治疗,疗程为6个月。研究AS患者及健康志愿者外周血中白细胞介素18(IL-18)、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素4 mRNA(IL-4 mRNA)表达水平及经补肾强督方治疗前后AS患者外周血中IL-18、IFN-γ、IL-4 mRNA表达水平的变化。结果AS患者外周血单个核细胞IL-18 mRNA、IFN-γ mRNA表达水平及IFN-γ mRNA/IL-4 mRNA较正常对照组显著增高(P<0.001)。经用补肾强督方治疗后,IL-18 mRNA、IFN-γ mRNA表达水平及IFN-γ mRNA/IL-4 mRNA明显下降(P<0.001)。AS患者红细胞沉降率水平与IL-18 mRNA、IFN-γ mRNA、IL-4 mRNA表达水平呈极显著相关(P<0.001);C反应蛋白水平与IL-18 mRNA表达水平呈显著相关(P<0.05),与IFN-γ mRNA表达水平呈非常显著相关(P<0.01)。结论AS患者外周血中IL-18 mRNA、IFN-γ mRNA水平比正常组明显升高;用补肾强督方治疗后,患者IL-18 mRNA、IFN-γ mRNA水平均有明显下降。

过敏性紫癜患者外周血单个核细胞中Tim-1,Tim-3mRNA表达和血清中IL-2和IL-4含量测定

目的研究Tim-l,Tim-3及IL-2,IL-4在过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura,HSP)发病中的作用。方法将28例HSP患者分为单纯组和混合组,采用RT-PCR技术检测两组患者外周血单个核细胞中Tim-1 mRNA和Tim-3 mRNA的表达情况,ELISA法检测血清中IL-2和IL-4的含量,选取健康人20例作为对照组。结果 HSP患者Tim-1 mRNA相对表达量高于正常对照组[RQ值分别为0.974(1.108)和0.760(0.514),P<0.05],而Tim-3 mRNA相对表达量差异无统计学意义[RQ值分别为1.359(1.183)和1.604(1.177),P>0.05];Tim-1 mRNA,Tim-3 mRNA的表达在HSP单纯组和混合组之间差异均无统计学意义(P均>0.05)。HSP患者血清IL-2含量(188.517±12.867)较正常对照组(202.759±20.903)降低,IL-4含量(73.046±8.750)高于正常对照组(62.301±11.232),且HSP患者混合组IL-2含量低于单纯组,IL-4含量高于单纯组,以上差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论Tim蛋白可能参与HSP发病,但与疾病严重程度无关;IL-2和IL-4水平可能与疾病严重程度密切相关。

五苓散对腹泻模型大鼠结肠AQP4及AQP4mRNA表达的影响

目的:观察五苓散对腹泻模型大鼠结肠AQP4及AQP4mRNA表达的作用,揭示五苓散止泻作用的机理。方法:将SD大鼠随机分为正常对照组、腹泻模型组、氢氯噻嗪组、口服盐液组、五苓散低、中、高剂量组7组,观察大鼠腹泻状态并测体重等。分别于第4天上午、第7天上午取大鼠结肠,免疫组化法检测AQP4蛋白的表达,原位杂交方法检测AQP4 mRNA的表达。结果:腹泻模型组、口服盐液组、五苓散低剂量组结肠AQP4及AQP4mRNA表达明显下调,氢氯噻嗪组、五苓散中剂量组AQP4及AQP4mRNA表达下调但明显高于模型组,五苓散高剂量组结肠AQP4及AQP4mRNA表达下调不明显。结论:AQP4及AQP4mRNA表达下调是番泻叶致大鼠腹泻的机制之一,上调腹泻模型大鼠结肠AQP4及AQP4mRNA表达是五苓散的止泻机理之一,但与剂量相关,5.4g/kg灌胃效果较好。

小青龙汤及其加味方对变应性鼻炎大鼠IL-4和IL-4mRNA表达的影响

目的:观察小青龙汤及其加味方对变应性鼻炎(AR)大鼠血浆IL4含量和脾细胞IL4mRNA表达水平的影响。方法:采用卵蛋白全身致敏与局部攻击方法制作AR大鼠模型,观察小青龙汤加味治疗后血浆IL4含量和脾细胞IL4mRNA的表达。结果:模型组血浆IL4含量和脾细胞IL4mRNA的表达明显升高,小青龙汤加味治疗组血浆IL4含量和脾细胞IL4mRNA的表达明显降低,小青龙汤加味治疗组优于小青龙汤治疗组。结论:小青龙汤加味治疗AR的作用途径之一可能是通过降低IL4mRNA的表达水平,间接降低IL4含量,从而减轻鼻粘膜变应性炎症。

实验性胰腺炎小鼠小肠隐凹素-4mRNA表达变化的研究

目的 检测实验性胰腺炎时小鼠小肠隐凹素 - 4 m RNA表达的变化 ,从分子水平上探讨胰腺炎时肠粘膜屏障受损的机制。方法 36只 ICR小鼠随机分成 6组 ,每组 6只。实验组 (A～ E组 )腹腔注射雨蛙素 ,5 0μg/(kg· h) ,共 7次 ,于首次注射后第 9、18、2 4、4 8和 72 h处死 ;对照组 (F组 )注射相应体积的生理盐水 ,于第 18h处死。取血送淀粉酶检查 ,胰腺送病理检查。用 U VI软件分析 PCR产物凝胶图像以检测各组隐凹素 - 4 m RNA的表达变化。结果 大剂量雨蛙素腹腔注射导致了 ICR小鼠急性坏死性胰腺炎 ,胰腺病理损害以首次注射后第 18h最明显。第 9h隐凹素 - 4 m RNA表达轻微下调 ,18h下调最明显 (P<0 .0 5 ) ,2 4 h后逐渐升高 ,72 h接近正常水平。结论隐凹素 - 4的获得性缺陷可能是胰腺炎时发生肠道细菌移位的重要原因之一。

湖羊BMP2、BMP4、BMP6和BMP7基因mRNA表达水平与排卵数关系的研究

【目的】研究湖羊卵巢组织BMP2、BMP4、BMP6和BMP7基因mRNA表达水平与排卵数的相关性,筛选影响湖羊多胎性状的候选基因,为揭示湖羊高繁多胎分子遗传机理提供参考。【方法】选取16只经产湖羊母羊,分为产单羔组和多羔组,发情后24～36h屠宰,取卵巢,计数排卵点,记录排卵数;应用RT-PCR技术检测BMP2、BMP4、BMP6和BMP7基因的组织表达特征,进一步利用实时荧光定量PCR技术分析各基因mRNA在单羔组和多羔组卵巢组织中的表达差异。【结果】BMP2、BMP4和BMP7基因在湖羊母羊卵巢组织内表达,而且在垂体及下丘脑、子宫、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、输卵管组织中均有表达;BMP6基因仅在湖羊母羊卵巢、肾脏、肌肉和输卵管组织中表达。在卵巢组织,多羔组排卵数极显著高于单羔组(P<0.01),且多羔组BMP4基因mRNA表达极显著高于单羔组(P<0.01),而BMP2、BMP6和BMP7基因mRNA表达在单羔组和多羔组间无显著差异(P>0.05);相关分析表明在卵巢组织中,只有BMP4基因mRNA表达与排卵数呈正相关(r=0.741,P<0.05)。【结论】BMP4基因mRNA表达在单羔组和多羔组间差异显著,可能对湖羊排卵数起关键作用,是影响湖羊排卵数的候选基因。

强直性脊柱炎患者PBMC中IP-10、IFN-γ和IL-4 mRNA表达水平及意义

为探讨强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞(PBMC)中诱导蛋白10(IP-10)、干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)mRNA水平及意义。选取强直性脊柱炎患者92例(观察组),其中稳定期42例,活动期50例;同时选取健康体检者100例作为对照组,采用RT-PCR检测PBMC中IP-10、IFN-γ和IL-4mRNA表达。观察组PBMC中IP-10、IFN-γ和IL-4mRNA相对表达量分别为明显高于对照组;观察组活动期患者PBMC中IP-10、IFN-γ和IL-4mRNA相对表达量分别明显高于稳定期;观察组患者ASDAS评分、IP-10、IFN-γ和IL-4mRNA相对表达量与ASDAS评分呈正相关。结果显示强直性脊柱炎患者PBMC中IP-10、IFN-γ和IL-4mRNA表达明显升高,与病情程度有一定关系。

西洋参治疗胰岛素抵抗大鼠活性部位对骨骼肌转运蛋白-4mRNA表达的影响

目的:探讨西洋参治疗胰岛素抵抗大鼠活性部位对骨骼肌转运蛋白-4mRNA(GLUT-4 mRNA)表达的影响。方法:本实验将西洋参的根部用95%EtOH回流得提取物。再将此提取物进行AB-8型大孔树脂柱色谱,按不同浓度洗脱,得到西洋参95%醇提组、西洋参60%醇提组、西洋参30%醇提组和水提组四个部分。通过早期药效学试验证明,西洋参60%醇提组和西洋参30%醇提组为有效部位。之后再以SD大鼠喂以高热饮食加链脲佐菌素(STZ)建立胰岛素抵抗大鼠模型,随机分为模型组、罗格列酮组、西洋参60%醇提组、西洋参30%醇提组。给药4周后,以RT-PCR法检测胰岛素抵抗大鼠骨骼肌GLUT-4 mRNA的表达。结果:与模型组比较,各给药组大鼠骨骼肌中GLUT-4 mRNA的表达相对增强,其中西洋参60%醇提组、30%醇提组与模型组比较有极显著性差异(P<0.01),罗格列酮组与模型组比较差异显著(P<0.05)。结论:西洋参可能通过使胰岛素抵抗大鼠骨骼肌GLUT-4 mRNA的表达增强,从而发挥快速转运葡萄糖的作用而对胰岛素受体InsR后抵抗有改善作用。

川芎嗪对同基因骨髓移植小鼠骨髓中VCAM-1/VLA-4表达的影响

为了探讨同基因骨髓移植 (BMT)小鼠骨髓细胞表面黏附分子VCAM 1 VLA 4 (CD4 9d)的表达及川芎嗪对其影响 ,取健康BALB c小鼠 ,随机分为 3组 :正常组 (不做处理 ) ,骨髓移植对照组 (简称BMT组 )和骨髓移植 +川芎嗪治疗组 (简称川芎嗪组 )。BMT组和川芎嗪组分别胃饲生理盐水 0 .2ml 只和川芎嗪注射液每次 2mg 只 ,2次 天。在BMT后第 7、14、2 1、2 8天处死小鼠 ,采用免疫组织化学方法检测骨髓基质细胞VCAM 1蛋白表达水平 ,用RT PCR检测骨髓基质细胞VCAM 1mRNA表达水平 ;用流式细胞术检测骨髓有核细胞表面VLA 4的表达水平。结果发现 :BMT后第 7、14、2 1、2 8天川芎嗪组VCAM 1 VLA 4的表达水平、骨髓有核细胞计数均高于BMT组 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论 :川芎嗪能提高BMT小鼠骨髓造血细胞和基质细胞黏附分子的表达 ,促进造血干 祖细胞的归巢 ,加速移植后骨髓的造血重建。

Fut8基因通过促进VLA-4/VCAM-1表达影响B细胞发育

目的探讨核心岩藻糖基化修饰对VLA-4/VCAM-1表达及B细胞发育的影响。方法通过RNA干扰技术使前B细胞(70Z/3)和基质细胞(ST2)的Fut8基因沉默,免疫沉淀和Western blot检测Fut8基因沉默效率,以细胞黏附实验和克隆形成实验分别研究Fut8基因对VLA-4/VCAM-1之间亲和力和对B细胞分化发育的影响。结果 Fut8基因沉默使VLA-4/VCAM-1之间的亲和力以及前B细胞和基质细胞之间的黏附作用降低,并使前B细胞的克隆形成能力明显下降。流式细胞仪分析结果也表明,Fut8-/-祖B细胞向前B细胞分化过程受阻。结论本实验揭示了Fut8基因调节VLA-4/VCAM-1之间结合能力以及前B细胞克隆形成的机理,为B细胞分化发育研究提供理论依据。

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中IL-4和IL-13mRNA的表达

目的 :探讨Th2型细胞因子在系统性红斑狼疮 (SLE)发病机制中的作用及其意义。方法 :应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测了 34例活动期SLE患者和 30例正常人外周血单个核细胞 (PBMC)中IL 4和IL 1 3mRNA的表达水平。结果 :活动期SLE患者IL 4和IL 1 3的阳性表达率与正常人对照组相比均无明显差异 ( P >0 0 5) ;活动期SLE患者PBMC中IL 4和IL 1 3mRNA的平均表达水平 ( 0 9386± 0 1 6 89,0 8983± 0 1 1 53)均明显高于正常人对照组 ( 0 54 94± 0 1 51 0 ,0 6 0 85±0 0 90 3) ,差异非常显著 (P <0 0 0 1 )。结论 :Th2型细胞因子IL 4和IL 1 3在SLE患者中呈高水平表达 ,这可能与SLE患者外周血T细胞高度活化、功能异常有关。