重复经颅磁刺激对帕金森模型小鼠纹状体VMAT-2和SYN表达的影响

目的探讨重复经颅磁刺激(repetitive transcranial magnetic,rTMS)对帕金森病(Parkinson’sdisease,PD)模型鼠纹状体多巴胺(dopamine,DA)含量及Ⅱ型单胺囊泡转运体(vesicular monoamine transporter-2,VMAT-2)和突触体素(synaptophysin,SYN)表达的影响。方法65只雄性C57BL/6J小鼠随机分为:对照组、PD模型组、假磁刺激组、rTMS-1组、rTMS-2组,每组13只。小鼠皮下注射MPTP(15mg.kg-1,每小时注射1次,注射4次)复制帕金森病模型,重复经颅磁刺激干预,利用高效液相色谱-电化学(HPLC-ECD)测定纹状体DA含量;免疫组织化学染色检测VMAT-2和SYN的表达变化,并借助图像分析系统对其进行定量分析。结果rTMS-1组和rTMS-2组纹状体DA含量较对照组明显减少(P<0.01),但显著高于PD模型组和假磁刺激组(P<0.01);rTMS-1组和rTMS-2组纹状体VMAT-2和SYN表达均明显少于对照组且显著高于PD模型组和假磁刺激组,其免疫反应产物校正光密度值(COD)均显著低于对照组(P<0.05),并显著高于PD组和假磁刺激组(P<0.05),TMS-1组和rTMS-2组间无显著差异。结论rTMS可诱导PD鼠纹状体区DA释放增加,并使VMAT-2和SYN表达上调。

转基因CHO细胞中VMAT_2抗毒性作用的研究

目的 研究转基因中国仓鼠卵 (CHO)细胞中单胺囊泡转运体 (VMAT2 )的抗毒性作用。方法 利用转 PC1 2 细胞基因到 CHO细胞中形成的转基因 CHO细胞 (c DNACHO) ,采用 MTT比色法检测 1-甲基 -4 -苯基吡啶离子 (MPP+ )对 CHO细胞野生株 (wt CHO)和 c DNACHO细胞的毒性作用 ,并观察利血平——VMAT2 的特异性阻滞剂对 MPP+毒性作用的影响。结果 在 MPP+ 0 .5 m mol/ L 以上浓度 c DNACHO细胞对 MPP+ 敏感性比 wt CHO低得多 ;c DNACHO和 wt CHO对鱼藤酮 (rotenon)的敏感性无显著差异 ;加入VMAT2 的特异性阻滞剂利血平后 ,上述保护作用消失 ,c DNACHO对 MPP+ 敏感性与 wt CHO细胞无差异 ,而单独予以 wt CHO细胞利血平则不能改变它对低浓度 MPP+的敏感性。结论 此保护机制是由转基因细胞中 VMAT2 引起的 ,VMAT2 在转基因的非神经细胞系 (CHO细胞系 )中也能将 MPP+转运至囊泡内 ,从而保护细胞 ;同时也提示 PC1 2

人VMAT_2基因RNA探针制备及其在COS-7细胞中的表达

本研究目的在于制备人 型囊泡单胺转运体 (VMAT2 )基因的反义和正义 RNA探针 ,以检测 VMAT2 基因能否在真核细胞表达。从携带 p GEM-Easy-T-VMAT2 克隆载体中通过限制性酶切反应得到 VMAT2 基因 ,与 p BK-RSV载体重组构建真核表达载体 p BK-RSV-VMAT2 ;分别以 T7和 T3聚合酶制备反义和正义探针 ,通过斑点杂交检测探针浓度。转染猴肾成纤维细胞COS-7,原位杂交及免疫荧光细胞化学检测 VMAT2 的表达。结果证明 ,反义和正义探针浓度分别为 80 ng/μl及 12 0 ng/μl;原位杂交及免疫组织化学证实重组的真核表达载体 p BK-RSV-VMAT2 在 COS-7的表达阳性率为 (10 .6± 1.2 ) %。本研究结果表明获得 VMAT2 基因反义链及正义链 RNA探针 ,并检测到 VMAT2