斑马鱼心脏标记基因VMHC多抗血清的制备

斑马鱼基因VMHC(Ventricular myosin heavy chain)是心脏发育早期的标志基因,制备该基因多抗血清,首先通过生物信息学方法,选择VMHC基因中特异性强、具亲水性的一段核苷酸序列(3 772～4 221 bp),通过PCR扩增,将片段重组到原核表达载体pGEX-4T-1,通过原核诱导表达获得含有表达目的片段的融合蛋白,以该融合蛋白免疫小鼠,获得VMHC多克隆抗鼠血清.对该多抗血清抗体进行验证,结果具有很好特异性和较高效价,可以用作western-blot、免疫印迹等试验分析.

青少年双相障碍躁狂相患者功能磁共振成像镜像同伦连接

目的对青少年双相障碍(pediatric bipolar disorder,PBD)躁狂相患者的功能磁共振成像信号进行分析,考察大脑双侧对称体素之间的镜像同伦功能连接性(voxel-mirrored homotopic connectivity,VMHC),并研究其与临床认知测试之间的相关性。方法纳入17例PBD躁狂相患者与18例正常青少年(正常对照组)进行研究,进行Stroop色词测试、数字广度测试等认知行为学及心理测试,采集功能磁共振成像信号,计算VMHC,提取患者组呈现两组间VMHC显著差异的脑区的VMHC数值,与临床认知测试进行相关性分析。结果与正常对照组相比,PBD躁狂相患者的VMHC值在颞中回、脑岛、罗兰迪克岛盖、颞上回等脑区显著降低。未发现上述脑区的VMHC数值与认知及心理测试指标之间具有相关性。结论 PBD躁狂相患者发生异常镜像同伦功能连接的脑区累及感觉运动网络和语言网络,为理解PBD躁狂相的脑活动异常机制提供了新的线索。

单侧颞叶癫痫患者双侧大脑半球间的功能协同性研究

目的研究单侧颞叶癫痫患者双侧大脑半球间同伦功能连接的变化。方法纳入左侧颞叶癫痫(left temporal lobe epilepsy,LTLE)21例、右侧颞叶癫痫患者(right temporal lobe epilepsy,RTLE)22例以及正常对照(normal control,NC)20例。采用体素-镜像同伦功能连接(voxel-mirrored homotopic connectivity,VMHC)方法分析数据,计算出各组VMHC改变的脑区。结果与NC组相比较,LTLE组双侧辅助运动区(t=-3.35)、颞中回(t=-3.50)、内侧额上回(t=-3.20)、顶下小叶(t=-3.66)VMHC值降低;双侧角回(t=3.03)、枕下回(t=4.25)、顶上回(t=3.62)VMHC值升高(P<0.05,alphasim校正)。与NC组相比较,RTLE组双侧颞中回(t=-4.26)、中央前回(t=-3.29)VMHC值减低;双侧枕下回(t=3.22)、海马旁脑回(t=3.32)和小脑(t=3.50)VMHC值升高(P<0.05,alphasim校正)。结论单侧颞叶癫痫患者两侧半球间部分脑区的功能协同性发生了变化。

基于磁共振脑成像的自闭症儿童镜像同伦功能连接异常研究

目的:基于磁共振成像探究大脑镜像同伦脑区的功能连接强度在自闭症(autism spectrum disorder,ASD)儿童与正常儿童间的差异性,寻找潜在的ASD神经生物学机制。方法:募集83例年龄在2~6岁的ASD患儿(ASD组)和70例相同年龄的典型发育(typically developing,TD)儿童(TD组)。对2组分别进行睡眠状态下功能磁共振成像扫描,分析体素镜像同伦连接(voxel-mirrored homotopic connectivity,VMHC)强度。使用单样本t检验分别得到2组的VMHC强度图谱,最后通过双样本t检验方法研究2组间大脑半球间连接的差异。结果:经错误发现率(false discovery rate,FDR)控制校正后,与TD组相比,ASD组在颞上回、楔前叶、内侧额叶、尾状核的VMHC强度显著降低(P<0.05)。结论:ASD患儿在静息状态下大脑两半球间功能连接降低,交互沟通能力下降。该研究为理解ASD的神经生物学机制提供了新视角。

双侧强化训练对痉挛型偏瘫儿童粗大运动功能和步行功能的影响

目的观察双侧强化训练对痉挛型偏瘫儿童粗大运动和步行功能的疗效。方法以2014年2月至2019年12月河南中医药大学第一附属医院儿童脑病康复诊疗中心诊断收治的30例偏瘫患儿为研究对象,随机分为对照组和观察组各15例。对照组应用常规康复治疗,观察组应用常规康复治疗的基础上,运动疗法应用双侧强化训练,两组均治疗3个疗程。治疗前后对患儿分别采用粗大运动功能评定量表(GMFM-88项)、足印分析法、10 m步行测试、1 min步行测试进行评定。结果两组治疗后GMFM-88项测试评分、步长和步宽、10 m步行时间及1 min步行距离均优于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05),且观察组优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论双侧强化训练结合常规康复治疗可以改善痉挛型偏瘫儿童的粗大运动功能,纠正异常步态,提高步行的速度、耐力和稳定性。

斑马鱼心肌特异性启动子的克隆及其功能鉴定

目的:探讨心室肌球蛋白重链(vmhc)基因启动子的心肌组织特异性。方法:利用PCR技术从斑马鱼基因组中克隆了vmhc编码区5'上游大小为1952bp的调控区域,应用酶切连接方法将vmhc启动子插入pGEFP-N1质粒,成功构建pEGFP-vmhc重组载体。再应用高保真DNA聚合酶PCR扩增包含vmhc启动子序列,增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因序列及3'UTR序列的基因片段,经过纯化后通过显微注射将vmhc-EGFP基因片段导入斑马鱼受精卵中。结果:注射后的斑马鱼心脏中出现绿色荧光,而其他部位无荧光出现。结论:vmhc启动子能够正确有效地驱动外源基因在斑马鱼心脏中特异表达,适合应用于心血管疾病的基因功能研究,基因靶向治疗等。