甜菜碱对鹅胚原代肝细胞脂肪代谢和DNA甲基化的影响及调控机制

本试验旨在研究甜菜碱对鹅胚原代肝细胞脂肪代谢和DNA甲基化的影响及调控机制。以鹅胚原代肝细胞为试验对象,试验1:研究不同浓度[0(对照)、2.5、5.0和10.0 mmol/L]甜菜碱培养液对鹅胚原代肝细胞DNA甲基化相关酶活性和泛酰巯基乙胺酶-1(VNN-1)启动子区域DNA甲基化的影响;试验2:研究不同处理[正常培养液(对照)、5.0μmol/L DNA甲基化酶抑制剂(AZA)、5.0 mmol/L甜菜碱、5.0μmol/L AZA+5.0 mmol/L甜菜碱]培养液对鹅胚原代肝细胞VNN-1和脂肪酸合成酶(FAS)基因表达的影响,探索VNN-1启动子区域甲基化调控基因表达的分子机制。结果表明:1)2.5、5.0和10.0 mmol/L甜菜碱组肝细胞的低密度脂蛋白(LDL)含量显著低于对照组(P<0.05)。2)S-腺苷甲硫氨酸/S-腺苷同型半胱氨酸(SAM/SAH)比值随着甜菜碱浓度的增加呈上升趋势,呈显著一次线性关系(P<0.05)。3)5.0和10.0 mmol/L甜菜碱组肝细胞VNN-1基因表达量显著低于对照组和2.5 mmol/L甜菜碱组(P<0.05);5.0和10.0 mmol/L甜菜碱组肝细胞VNN-1启动子区域DNA甲基化水平显著高于对照组(P<0.05)。4)AZA处理96 h时,AZA组和AZA+甜菜碱组肝细胞中VNN-1基因表达量显著高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,处理48 h时,AZA处理显著提高了肝细胞中FAS基因表达量(P<0.05)。综上所述,鹅胚原代肝细胞培养液中添加甜菜碱能抑制肝细胞的脂质积累,提高细胞总体的DNA甲基化水平,且VNN-1启动子区域的甲基化负反馈调节其基因表达。AZA抑制DNA甲基化后发现VNN-1和FAS的高表达与DNA去甲基化相关。