人绒毛膜癌JAR/VP16多药耐药细胞株的建立及相关基因表达检测

目的:建立人绒毛膜癌鬼臼乙叉甙(VP16)耐药细胞株,检测其生物学特性及耐药和凋亡相关基因的表达,探讨多药耐药性产生与凋亡基因改变之间的相关性。方法:体外采用VP16浓度梯度递增法诱导建立JAR/VP16耐药细胞株,终浓度药物维持培养4个月,MTT法测定多药耐药谱及耐药稳定性;倒置相差显微镜观察并结合HE染色探讨耐药细胞在光镜下的形态学变化,电镜观察细胞的超微结构;基因芯片检测耐药相关基因及凋亡相关基因的表达。结果:①历经14个月、70多代耐药诱导培养,成功构建人绒毛膜癌JAR细胞耐VP16的耐药细胞株,命名为J“AR/VP16耐药细胞株,”与JAR细胞相比有显著的形态学改变,其对VP16的耐药性能稳定,耐药指数(RI)为73.67;并且对紫杉醇(TAX)、甲氨蝶呤(MTX)和更生霉素(KSM)具有显著的交叉耐药性,耐药指数分别为26.18、18.67和14.73;对5-氟尿嘧啶(5-FU)和长春新碱(VCR)的耐受性有所增加(RI∶2.88;3.45);对阿霉素(ADM)则无明显的交叉耐药(RI∶1.39)。②基因芯片结果表明,JAR/VP16细胞MRP1、MRP2、MRP6、BCRP、LRP和Rb等耐药基因表达明显高于亲本细胞,并且Bcl-2、Bcl-x、MyD88、TRAF-4、TRAF-6、Trip等凋亡抑制基因表达上调,Bax、BimL、Blk、Caspase-7-、8、-13-、14以及Fas和FasL等凋亡促进基因表达下调。结论:①JAR/VP16细胞呈现多药耐药性且耐药性能稳定,为研究耐药机制及筛选药物提供了理想的实验模型。②JAR/VP16细胞中凋亡相关基因表达的改变可能是其产生多药耐药性的一个重要机制。

携带pdcd5基因的增殖型腺病毒与VP-16杀伤K562细胞的协同作用

程序性细胞死亡因子5(programmed celldeath5,PDCD5)在多种肿瘤细胞中表达明显降低。携带pdcd5基因的靶向增殖型腺病毒SG611-pdcd5对白血病细胞具有杀伤作用,对正常细胞具有相对保护作用。本研究旨在观察联合应用SG611-pdcd5与低剂量化疗药物依托泊甙(etoposide,VP-16)对白血病细胞系K562的作用。以不同浓度梯度的药物或不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)的病毒液作用于K562细胞,培养48小时后用MTT法检测细胞存活率。结果表明,与SG611-pdcd5(MOI=40)或VP-16(0.5μg/ml)单独作用组相比,SG611-pdcd5(MOI=40)+VP-16(0.5μg/ml)组细胞存活率明显降低(p均<0.05),分别为(59.45±4.12)%、(82.91±3.41)%及(42.00±5.75)%。SG611-pdcd5与VP-16的协同作用强于PDCD5蛋白或携带pdcd5基因的非增殖型腺病毒Ad-pdcd5与VP-16的协同作用(p均<0.05);VP-16浓度为4.0μg/ml时,VP-16+SG611-pdcd5(MOI=40)组、VP-16+proPDCD5(40μg/ml)组及VP-16+Ad-pdcd5(MOI=80)组细胞存活率分别为(37.09±1.89)%、(52.36±1.64)%及(73.64±4.33)%。结论:SG611-pdcd5具有促进低剂量VP-16杀伤K562细胞的作用,二者联合可增强对白血病细胞的杀伤作用。

VP-16与DNA分子间电子转移的光谱学研究

运用脉冲辐解和圆二色谱技术,对用于治疗肿瘤的依托泊甙(VP-16)与鸟苷酸(GMP)和小牛胸腺DNA分子间电子转移的光谱进行了探讨。用脉冲辐解技术发现了VP-16与GMP之间的电子转移,测得两者之间的反应速率常数为3.16×107L.mol-1.s-1,并对它们的吸收光谱进行了归属,同时用圆二色谱技术发现了VP-16与小牛胸腺DNA之间相互作用。从而为医学工作者进一步了解和探讨VP-16的抗肿瘤机理提供了直接的理论依据。

氟维司群联合VP16治疗多线后晚期乳腺癌1例

1 病例资料 患者，女性，49岁。2000年5月行右乳腺癌根治术，术后病理显示为（右乳）浸润性导管癌，肿块直径3cm，腋下淋巴结11枚，3枚见癌浸润，ER（＋）、PR（-）、HER．2、Ki．67不详。术后CEF方案化疗6个周期后序贯三苯氧胺（tamoxifen，TAM）治疗5年。2006年6月发现锁骨上淋巴结转移，行局部放疗联合多西他赛化疗，

荷能^(12)C离子对抗癌药物VP_(16)的效应

本文采用 5 5MeV u1 2 C6+离子注入鬼臼衍生物之一———鬼臼乙叉甙 (VP1 6) ,针对它在临床上的缺点 ,试图利用重离子的能量转移和质量沉积对其分子组成与结构进行改造 ,以增加它的水溶性 ,提高疗效 ,减小毒性。实验样品在离子注入后 ,先后进行了紫外 (UV)、高效液相 (HPLC)和液质联用 (HPLC -MS)分析 ,并对癌细胞K5 6 2和HL- 6 0分别进行了药理活性测定 ,取得了初步结果和进行了简短讨论。

BCL—2蛋白不能抑制VP16诱导的乳腺癌细胞(Bcap37)凋亡

目的 为了解BCL—2在Bcap37细胞表达增高能否抑制足叶乙甙诱导的细胞凋亡,把重组的逆转录表达载体pLXSN—bcl—2和pLXSN—neo转染Bcap37细胞,经G418筛选获得表达细胞(Bcap37—bcl—2,Bcap37—neo)。方法 经RT—PCR和Western blotting检测bcl—2基因的表达,并用不同浓度的VP16处理两种细胞16小时,经细胞形态观察、细胞凋亡原位显示、MTT实验检测细胞的凋亡变化。结果 两种细胞的凋亡变化没有显著差异。结论 BCL—2高表达不能阻滞VP16诱导的Bcap37细胞凋亡,这与我们以前所做的关于BCL—2能阻滞VP16诱导的K562细胞凋亡作用相反,推测BCL—2的抗凋亡作用可能和细胞类型有关,可能还有其它因素参与BCL—2对细胞凋亡的调节。

MiR-18a通过靶定ATM调节白血病细胞HL-60对VP-16和VCR化疗敏感性

目的:研究miR-18a调控白血病细胞HL-60对VP-16和VCR化疗敏感性的分子机制。方法:构建稳定过表达miR-18a的HL-60-pc DNA3.1-miR-18a细胞系,检测其对VP-16和VCR的敏感性;构建ATM 3'UTR区的荧光素酶报告载体,验证miR-18a对ATM的靶向作用;Western blot检测过表达miR-18a的HL-60细胞内ATM的表达水平;siRNA敲减HL-60细胞中ATM水平,CCK-8检测细胞对VP-16和VCR的敏感性;在稳定过表达miR-18a的HL-60细胞内转染miR-18a inhibitor,Western blot检测ATM的表达水平,并检验细胞对VP-16和VCR的敏感性变化。结果:过表达miR-18a后,用相同浓度的VP-16和VCR处理时HL-60细胞存活率降低;荧光素酶活性检测表明,miR-18a能够抑制ATM的荧光素酶活性;过表达miR-18a后HL-60细胞内ATM的表达降低;敲减ATM后的HL-60细胞经VP-16和VCR处理后存活率降低;转染miR-18a inhibitor后,ATM表达水平显著上调,经VP-16和VCR处理的细胞存活率明显高于对照组。结论:miR-18a能够通过靶定ATM而调控白血病细胞HL-60对VP-16和VCR的敏感性。

GRP94表达在肺癌细胞对VP-16化疗耐药中的作用

[目的]检测在Ca2＋拮抗剂A23187诱导下,人肺腺癌细胞SPCA1中GRP94的表达水平,并分析其表达在肺癌细胞对VP-16耐药中的作用。[方法]采用RT-PCR、免疫荧光细胞化学方法检测不同浓度A23187处理组细胞的GRP94核酸及蛋白表达,用MTT法测定细胞在VP-16作用下的生存率。[结果]A23187可明显诱导SPCA1细胞GRP94核酸和蛋白表达,且表达水平随A23187呈浓度依赖性增加。MTT法测定结果显示：诱导组细胞（A23187浓度为0.5~6μmol/L）对VP-16的IC50值明显高于对照组,而且IC50值的升高亦对A23187呈一定的浓度依赖性,当A23187浓度为6μmol/L时IC50值最大。[结论]GRP94的表达与肺腺癌细胞SPCA1对VP-16的耐药性有关,有针对性地抑制GRP94基因表达或功能可能成为肺癌治疗的新方法。

5-FU持续48h静脉滴注联合大剂量醛氢叶酸加VP16方案治疗晚期胃癌的临床观察

目的 :评价 5 FU持续 48h静脉滴注联合大剂量醛氢叶酸加VP16(足叶乙甙 ) (ELF方案 )治疗晚期胃癌的疗效及毒副作用。方法 :对入选的 2 5例晚期胃癌采用 5 FU持续 48h静脉滴注联合大剂量醛氢叶酸加VP16方案进行治疗。结果 :CR 2例 ,PR 11例 ,NC 5例 ,PD 7例 ,有效率 (CR +PR)为 5 2 % (13 /2 5 ) ,主要不良反应为恶心、呕吐、骨髓抑制、口腔黏膜反应以及外周静脉炎 ,除外周静脉炎较严重外 ,多数为Ⅰ～Ⅱ度 ,病人耐受良好。结论 :5 FU持续 48h静脉滴注联合大剂量醛氢叶酸加VP16(ELF方案 )治疗晚期胃癌的疗效较好 ,中心静脉置管或外周静脉插管可明显减少静脉炎的发生。

TNF-α/Vp16系统对胶质瘤基因治疗的实验研究

目的在体外水平（invitro）建立对胶质瘤有杀伤作用的TNF－α基因／Vp16系统，研究该系统的有效性及可行性。方法用逆转录病毒载体将TNF－α基因转染人胶质瘤细胞株SHG－44，经生长抑制试验，比较转TNF－α基因前后SHG－44细胞对Vp16的敏感性。结果生长抑制试验表明，转染TNF－α基因后的SHG－44细胞对Vp16的敏感性是转基因前细胞的10倍（P＜0．01），IC50为0．8μg／ml；TNF－α基因／Vp16系统对胶质瘤的杀伤作用优于TNF－α细胞因子与Vp16的联合应用（P＜0．05），并具有良好的旁观者效应。结论在invitro水平，转TNF－α基因SHG-44细胞对Vp16的敏感性大大增加，小剂量Vp16即可达到杀伤肿瘤细胞的作用，表明TNF－α基因/Vp16系统可成为细胞因子基因联合化学药物治疗胶质瘤的有效方法。

钙离子在VP-16诱导HL-60细胞凋亡的作用

为了研究Ca2 + 在VP 16(etoposide)诱导HL 60细胞凋亡中的作用 ,采用流式细胞术 ,激光共聚焦显微镜和Western印迹方法进行观察。结果显示 ,VP 16可诱导HL 60细胞凋亡 ,并可引起细胞内Ca2 + 浓度的增加 ;细胞外钙离子螯合剂EGTA不抑制其诱导的细胞凋亡 ,而细胞内钙离子螯合剂BAPTA AM可抑制此过程 ,并且可抑制细胞色素C的释放。实验结果提示 ,Ca2 +

铁超载与铁剥夺对VP-16诱导HL-60细胞凋亡的影响

目的 :探讨铁超载与铁剥夺对依托泊甙 (VP 1 6)诱导HL 60细胞凋亡的影响。方法 :选择 1 0 0 μmol/LFeCl3和 1 0 μmol/L去铁胺 (DFO)与VP 1 6共同作用于HL 60细胞 ,并以单用VP 1 6作对照。光镜观察HL 60细胞形态学变化、DNA琼脂糖电泳及流式细胞仪 (FCM )等方法检测HL 60细胞凋亡。观察铁超载与铁剥夺对VP 1 6诱导HL 60细胞凋亡的影响。结果 :①FeCl3(1 0 0 μmol/L) +VP 1 6 (1 0 0mg/L) 6h ,1 2h ,2 4h ,细胞凋亡率(APO % )和亚二倍体峰 (Sub G1 ) ,低于单用VP 1 6(1 0 0mg/L)组 ,2组相比差异有统计学意义 (P <0 .0 5)。DNA电泳显示ladder出现时间滞后、数目减少。②DFO(1 0 μmol/L) +VP 1 6 (1 0 0mg/L )组APO %、DNA电泳ladder数目、Sub G1均比单用VP 1 6高 (P <0 .0 1 )。③等量的DFO与FeCl3和VP 1 6(1 0 0mg/L)与单用VP 1 6(1 0 0mg/L)结果相同。结论 :铁超载抑制化疗药物VP 1 6诱导HL 60细胞凋亡作用 ,铁剥夺可促进VP 1 6诱导HL 60细胞凋亡作用。临床上可采用铁剥夺的方法协同治疗白血病 。

CHOP联合口服VP-16强化方案治疗非霍奇金淋巴瘤临床观察

目的 探讨在小剂量粒细胞集落刺激因子 ( G- CSF)支持下 ,CHOP联合低剂量、长时间口服 VP- 16强化方案治疗中、高度恶性非霍奇金淋巴瘤 ( NHL )的疗效及临床可行性。方法 选择经病理证实的中、高度恶性NHL 39例 (中度恶性 2 6例 ,高度恶性 13例 ) ,在保持标准的 CHOP方案剂量的基础上 ,联合口服 VP- 16胶囊 ( VP-16 10 0 m g,po,d1～ 1 0 ) ,继用 G- CSF 75μg,d1 1～ 2 0 ,疗程每 3周重复。结果 全组 CR 2 4例 ,PR 12例 ,S 2例 ,PD 1例 ,CR率 6 1.5 % ,总缓解率 ( CR+ PR) 92 .3%。全组随访 2年以上 35例 ,2年总生存率 6 5 .7% ( 2 3/ 35 ) ,2年无病生存率 4 5 .7% ( 16 / 35 ) ,中位生存期 5 4 .3个月。不良反应主要为骨髓抑制及胃肠道反应 ,白细胞及血小板降低分别为87.2 % ( 34/ 39)及 33.3% ( 13/ 39) ,恶心、呕吐为 6 1.5 % ( 2 4 / 39) ,方案给药的相对剂量强度为 90 .5 %。结论 本方案对中、高度 NHL能获得优越的近期疗效及远期生存 ,尤其对一些不良预后患者仍能获得良好的效果。骨髓抑制反应较重 ,在小剂量 G- CSF支持下毒性可耐受 ,并能保持较高的剂量强度 。

VP16损害大鼠卵巢组织结构和内分泌功能的实验研究

目的:探讨抗肿瘤药依托泊苷(VP16)对大鼠卵巢组织结构和内分泌功能的影响。方法:选用40只3～4月龄雌性SD大鼠,随机将其分为空白对照组,VP16低、中、高剂量组。用药后比较4组大鼠卵巢、子宫湿重和卵巢组织结构的变化,采用放射免疫方法测定4组大鼠促卵泡素(FSH)、雌二醇(E2)水平,并用免疫组织化学方法观察VP16不同剂量组对半胱天冬酶-3(caspases-3)在卵巢颗粒细胞中表达的影响。结果:与空白对照组相比:光镜下可见VP16高,中剂量组对卵巢组织破坏程度较大,卵泡教明显减少,且血清FSH升高,E2下降,caspases-3蛋白均强表达,差异有统计学意义;VP16低剂量组对卵巢组织破坏程度较小,卵泡数有所减少,且FSH升高、E2下降不显著,caspases-3蛋白呈弱表达,差异无统计学意义。结论:VP16对大鼠卵巢的损害程度与药物剂量成正相关,对卵巢组织的损伤可能与caspases-3凋亡途径有关。

口服VP_(16)联合DDP方案治疗非小细胞肺癌

作者自１９９３年１月采用口服ＶＰ１６联合ＤＤＰ方案治疗非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）３５例，所有病例均由组织学检查证实。结果ＣＲ１例、ＰＲ１６例、Ｓ８例、Ｐ１０例，有效率（ＣＲ＋ＰＲ）４８．６％。全组中位生存期９．８个月。恶心、呕吐发生率为７８．３％，粘膜炎为１０．４％，白细胞和血小板降低发生率分别为５８．１％和１５．２％，大多为轻、中度。作者认为ＶＰ１６对小细胞肺癌（ＳＣＬＣ）的疗效有显著的时间依赖性，长时间、低剂量口服ＶＰ１６对ＳＣＬＣ有较好的疗效，但对ＮＳＣＬＣ的疗效是否更好，本文尚未证明。然而，方便给药，利于门诊化疗是其优点。

rhGM-CSF对VP-16诱导的HL-60细胞凋亡的影响

为探讨rhGM CSF对VP 16诱导的HL 60细胞凋亡的影响 ,我们观察了预先应用rhGM CSF孵育的HL 60细胞由VP 16诱导的凋亡过程及凋亡相关基因bcl 2和fas的表达变化。应用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态和超微结构的变化 ,凝胶电泳检测DNA的碎片 ,流式细胞术检测细胞凋亡率、bcl 2和fas的表达。实验结果显示 ,rhGM CSF可抑制VP 16诱导的HL 60细胞的凋亡 ,它加强了VP 16对bcl 2表达的下调作用 ,抑制了VP 16对fas表达的上调作用。由此推测 ,rhGM CSF可能是通过下调fas表达降低HL 60细胞对VP

VP16/三元LDH复合材料的制备表征及性质

依托泊苷(VP16)是一种广谱性抗癌药物。分别采用共沉淀和离子交换法制备了VP16/三元LDH纳米载药复合材料,以提高药物的抗肿瘤性能,降低药物的生物毒性。研究结果显示,VP16/三元层状氢氧化物纳米复合载药体系呈片层结构,所得纳米粒分布均匀,其中由共沉淀法和离子交换法(即经氨基酸预插层)制备的谷胱甘肽/层状双氢氧化物纳米复合体系的载药量分别为13.69%和20.36%,具有良好的缓释性能。细胞毒性实验结果证明了以三元层状氢氧化物材料作为依托泊苷载体,可降低依托泊苷的细胞毒性,且纳米载药复合体系对肿瘤细胞活性抑制率达60%,远大于药物本身的抑制率32%。结果表明LDH纳米材料作为药物分子VP16的载体,能在提高肿瘤抑制效果的同时降低一定的正常细胞毒性作用,并且实现药物的定量控释传递,可作为一种新型的抗肿瘤复合片剂。

抗癌药物VP-16-213及其类似物圆二色谱的研究

本文测定了抗癌药物 VP—16—213及11个不同立体构型的鬼臼毒衍生物的圆二色谱.研究了鬼臼糖甙类化合物的立体构型与其圆二色谱及抗癌活性之间的关系.

三种小干扰RNA干扰VP16 mRNA对单纯疱疹病毒-1复制的影响研究

目的探讨体外合成小干扰RNA(siRNA),在RNA干扰(RNAi)技术条件下,单纯疱疹病毒-1(HSV-1)感染Vero细胞过程中,病毒间层蛋白VP16的生物学功能。方法用T7RNA聚合酶体外合成针对VP16mRNA的三种siRNA。用脂质体2000转染Vero细胞后接种HSV-1,感染后不同时相点(12,24,36,48,60,72hpi)分别采取实验组(R)和对照组(C)标本,检测病毒滴度值,绘制子代病毒一步生长曲线。用同位素标记新合成的VP16进行免疫沉淀法检测病毒蛋白表达的变化。结果病毒子代一步生长曲线显示,转染siRNA的实验组Vero细胞接种HSV-1后24h(24hpi),病毒滴度明显低于对照组;12hpi也观察到病毒滴度低于对照组的现象;多位点的siRNA具有协同作用;实验组病毒滴度高峰出现时间后移大约12h。siRNA影响了病毒的蛋白表达。结论T7RNA聚合酶体外合成的siRNA可以用于RNAi技术研究;HSV-1间层蛋白VP16对病毒复制和组装、成熟起重要的生物学作用。