湖北罗田方言的“VP-neg”式正反问句

罗田方言的“VP—neg”式正反问句主要有两种：“VP-有？”和“VP-不？”式，这类格式是罗田方言使用频率极高的一种特殊句式，其中否定词“有”“不”一般都可以放置于各类语句末尾形成正反问句，但“VP-有？”和“VP-不？”式各自都蕴含着丰富的体貌特征，因而使用起来有不同的分布特点。

小麦Vp-1基因RNA干扰表达载体的构建及遗传转化

小麦成熟期穗发芽是世界性的自然灾害,严重影响小麦的产量和品质。Viviparous-1(Vp-1)是促进胚成熟和休眠的主要转录调节因子,与小麦穗发芽抗性有着密切的关系。本实验根据小麦Vp-1基因序列,以植物表达载体pAHC25为基础,成功构建了含有反向重复序列的RNA干扰表达载体pAHC-WVpRi。采用基因枪法轰击小麦品种新春9号幼胚材料1825个,共获得34株T0再生植株。利用Bar基因引物和干扰片段特异引物对再生植株进行PCR检测,获得Bar基因和干扰片段均为阳性的植株3株,转化率为0.16%。本研究为深入分析Vp-1基因功能,进而通过分子育种进行小麦穗发芽抗性的遗传改良提供了科学依据。

携带pdcd5基因的增殖型腺病毒与VP-16杀伤K562细胞的协同作用

程序性细胞死亡因子5(programmed celldeath5,PDCD5)在多种肿瘤细胞中表达明显降低。携带pdcd5基因的靶向增殖型腺病毒SG611-pdcd5对白血病细胞具有杀伤作用,对正常细胞具有相对保护作用。本研究旨在观察联合应用SG611-pdcd5与低剂量化疗药物依托泊甙(etoposide,VP-16)对白血病细胞系K562的作用。以不同浓度梯度的药物或不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)的病毒液作用于K562细胞,培养48小时后用MTT法检测细胞存活率。结果表明,与SG611-pdcd5(MOI=40)或VP-16(0.5μg/ml)单独作用组相比,SG611-pdcd5(MOI=40)+VP-16(0.5μg/ml)组细胞存活率明显降低(p均<0.05),分别为(59.45±4.12)%、(82.91±3.41)%及(42.00±5.75)%。SG611-pdcd5与VP-16的协同作用强于PDCD5蛋白或携带pdcd5基因的非增殖型腺病毒Ad-pdcd5与VP-16的协同作用(p均<0.05);VP-16浓度为4.0μg/ml时,VP-16+SG611-pdcd5(MOI=40)组、VP-16+proPDCD5(40μg/ml)组及VP-16+Ad-pdcd5(MOI=80)组细胞存活率分别为(37.09±1.89)%、(52.36±1.64)%及(73.64±4.33)%。结论:SG611-pdcd5具有促进低剂量VP-16杀伤K562细胞的作用,二者联合可增强对白血病细胞的杀伤作用。

新疆小麦品种穗发芽Vp-1基因等位变异的分布

为了给新疆小麦抗穗发芽育种提供理论依据和品种资源,利用Vp-1基因的功能标记Vp1 B3检测了252份新疆小麦品种。结果表明,新疆小麦品种中Vp-1 Ba(感穗发芽)、Vp-1 Bb(抗穗发芽)和Vp-1 Bc(抗穗发芽)基因型的频率分别为54.8%、3.2%和42.0%,以Vp-1 Ba基因型为主。其中,冬小麦中抗、感穗发芽基因型的频率分别为39.2%和60.8%,以感穗发芽基因型为主;而春小麦中抗、感穗发芽基因型的频率分别为55.3%和44.7%,抗穗发芽基因型频率较高。农家品种、引进品种和育成品种中Vp-1 Ba、Vp-1 Bb和Vp-1 Bc基因型的分布频率存在明显差异,依次为80.4%、0.0%和19.6%,39.5%、2.6%和57.9%,54.6%、4.6%和40.8%,农家品种和育成品种都以感穗发芽基因型为主。本研究结果还表明,STS标记Vp1 B3检测方法简单、稳定性好,将其与整穗发芽法和发芽指数法结合使用,有助于提高选择效率。

VP-16与DNA分子间电子转移的光谱学研究

运用脉冲辐解和圆二色谱技术,对用于治疗肿瘤的依托泊甙(VP-16)与鸟苷酸(GMP)和小牛胸腺DNA分子间电子转移的光谱进行了探讨。用脉冲辐解技术发现了VP-16与GMP之间的电子转移,测得两者之间的反应速率常数为3.16×107L.mol-1.s-1,并对它们的吸收光谱进行了归属,同时用圆二色谱技术发现了VP-16与小牛胸腺DNA之间相互作用。从而为医学工作者进一步了解和探讨VP-16的抗肿瘤机理提供了直接的理论依据。

穗发芽相关基因Vp-1等位变异在西部春小麦品种中的分布研究初探

青海、西藏、甘肃、宁夏、陕西位于中国的西北和西南部,属于西部地区,由于各种条件的限制,目前对于该区春小麦穗发芽状况的研究很少。本研究利用Vp-1基因的STS功能标记Vp1B3对233份来自这一地区的春小麦品种进行PCR检测,以期为西部小麦抗穗发芽育种提供理论依据和种质资源。结果表明,西部春小麦品种(系)中,Vp1B3a(感穗发芽)、Vp1B3b(抗穗发芽)、Vp1B3c(抗穗发芽)基因型频率分别为30.04%、12.02%和57.94%,以Vp1B3a和Vp1B3c基因型为主。一般红粒品种较白粒品种抗穗发芽,但在西部地区白粒品种抗穗发芽基因型频率高于红粒品种。农家品种、引进品种、育成品种中Vp1B3a、Vp1B3b和Vp1B3c的基因型频率依次为38.85%、19.42%和41.73%,26.92%、0.00%和73.08%,13.24%、1.47%和85.29%,以抗穗发芽基因型为主。由于地理气候条件的不同,Vp1基因等位变异在3省2区的分布频率也有差异,以西藏地区抗穗发芽基因型分布频率最高。

MVP-300系统及其应用

MVP- 30 0温盐深测量系统是走航式测量系统 ,它可以快速、方便地进行大深度的海水温度、盐度、声速剖面测量。文章分析了 MVP- 30 0系统测量中常遇到的几个问题 ,并提出解决办法 ,为熟练应用该系统提供参考。

MiR-18a通过靶定ATM调节白血病细胞HL-60对VP-16和VCR化疗敏感性

目的:研究miR-18a调控白血病细胞HL-60对VP-16和VCR化疗敏感性的分子机制。方法:构建稳定过表达miR-18a的HL-60-pc DNA3.1-miR-18a细胞系,检测其对VP-16和VCR的敏感性;构建ATM 3'UTR区的荧光素酶报告载体,验证miR-18a对ATM的靶向作用;Western blot检测过表达miR-18a的HL-60细胞内ATM的表达水平;siRNA敲减HL-60细胞中ATM水平,CCK-8检测细胞对VP-16和VCR的敏感性;在稳定过表达miR-18a的HL-60细胞内转染miR-18a inhibitor,Western blot检测ATM的表达水平,并检验细胞对VP-16和VCR的敏感性变化。结果:过表达miR-18a后,用相同浓度的VP-16和VCR处理时HL-60细胞存活率降低;荧光素酶活性检测表明,miR-18a能够抑制ATM的荧光素酶活性;过表达miR-18a后HL-60细胞内ATM的表达降低;敲减ATM后的HL-60细胞经VP-16和VCR处理后存活率降低;转染miR-18a inhibitor后,ATM表达水平显著上调,经VP-16和VCR处理的细胞存活率明显高于对照组。结论:miR-18a能够通过靶定ATM而调控白血病细胞HL-60对VP-16和VCR的敏感性。

米托蒽醌、VP-16、阿糖胞苷联合治疗难治性白血病的临床研究

目的 探索有效的难治性急性白血病的化疗方案;方法 用米托蒽醌、VP—16、阿糖胞苷联合化疗治疗难治性急性白血病12例;结果 米托蒽醌、VP—16、阿糖胞苷联合化疗治疗难治性急性白血病有效率66.7％,明显高于对照组;结论 米托蒽醌、VP—16、阿糖胞苷联合化疗是治疗急性白血病特别是复发患者有效的方案,副作用主要是骨髓抑制。

GRP94表达在肺癌细胞对VP-16化疗耐药中的作用

[目的]检测在Ca2＋拮抗剂A23187诱导下,人肺腺癌细胞SPCA1中GRP94的表达水平,并分析其表达在肺癌细胞对VP-16耐药中的作用。[方法]采用RT-PCR、免疫荧光细胞化学方法检测不同浓度A23187处理组细胞的GRP94核酸及蛋白表达,用MTT法测定细胞在VP-16作用下的生存率。[结果]A23187可明显诱导SPCA1细胞GRP94核酸和蛋白表达,且表达水平随A23187呈浓度依赖性增加。MTT法测定结果显示：诱导组细胞（A23187浓度为0.5~6μmol/L）对VP-16的IC50值明显高于对照组,而且IC50值的升高亦对A23187呈一定的浓度依赖性,当A23187浓度为6μmol/L时IC50值最大。[结论]GRP94的表达与肺腺癌细胞SPCA1对VP-16的耐药性有关,有针对性地抑制GRP94基因表达或功能可能成为肺癌治疗的新方法。

VP-16对鼠尾表皮颗粒层生成及血清IL-2水平的影响

目的 : 观察VP - 16对小鼠尾部表皮颗粒层生成及血清IL - 2水平的影响。方法 : 采用小鼠尾部鳞片表皮颗粒层形成模型 ,不同组别的小鼠以VP - 16或甲氨蝶呤灌胃 ,观察其对鼠尾表皮颗粒细胞生成的调节作用。并用ELISA法测定各组小鼠血清IL - 2水平的变化。结果 : VP- 16可显著促进小鼠尾部鳞片表皮颗粒层形成 ,并抑制血清IL - 2的水平。结论 : VP - 16对银屑病的角化不全具有良好的治疗作用。

铁超载与铁剥夺对VP-16诱导HL-60细胞凋亡的影响

目的 :探讨铁超载与铁剥夺对依托泊甙 (VP 1 6)诱导HL 60细胞凋亡的影响。方法 :选择 1 0 0 μmol/LFeCl3和 1 0 μmol/L去铁胺 (DFO)与VP 1 6共同作用于HL 60细胞 ,并以单用VP 1 6作对照。光镜观察HL 60细胞形态学变化、DNA琼脂糖电泳及流式细胞仪 (FCM )等方法检测HL 60细胞凋亡。观察铁超载与铁剥夺对VP 1 6诱导HL 60细胞凋亡的影响。结果 :①FeCl3(1 0 0 μmol/L) +VP 1 6 (1 0 0mg/L) 6h ,1 2h ,2 4h ,细胞凋亡率(APO % )和亚二倍体峰 (Sub G1 ) ,低于单用VP 1 6(1 0 0mg/L)组 ,2组相比差异有统计学意义 (P <0 .0 5)。DNA电泳显示ladder出现时间滞后、数目减少。②DFO(1 0 μmol/L) +VP 1 6 (1 0 0mg/L )组APO %、DNA电泳ladder数目、Sub G1均比单用VP 1 6高 (P <0 .0 1 )。③等量的DFO与FeCl3和VP 1 6(1 0 0mg/L)与单用VP 1 6(1 0 0mg/L)结果相同。结论 :铁超载抑制化疗药物VP 1 6诱导HL 60细胞凋亡作用 ,铁剥夺可促进VP 1 6诱导HL 60细胞凋亡作用。临床上可采用铁剥夺的方法协同治疗白血病 。

单药VP-16低剂量长疗程口服治疗42例中晚期肺癌疗效分析

自１９９５年～１９９７年对４２例未行其它治疗的原发肺癌进行单药足叶乙甙（ＶＰ－１６）的口服治疗，现将结果报告如下。１材料与方法临床资料全组病例均为经病理学证实的肺癌患者，男３２例，女１０例；年龄３６～７２岁，中位年龄６３岁。其中小细胞肺癌１８例，非小...

肿瘤细胞对DNA拓扑异构酶Ⅱ抑制剂VP-16耐药机理研究进展

VP-16通过DNA拓扑异构酶Ⅱ选择性抑制增殖期DNA合成并广泛用于临床。肿瘤细胞对VP-16耐药错综复杂,表现不一。本文通过对常见耐药机理分析,阐述VP-16与DNA拓扑异构酶Ⅱ的作用和相互关系,拓扑异构酶Ⅱ与耐药的关系。总结对VP-16耐药的检测方法,根据研究进展,提出对VP-16耐药机理的三大方面:①耐药细胞相关基因的改变;②DNA拓扑异构酶Ⅱ含量和活性改变;③DNA拓扑异构酶调控因素的变化。

反相高效液相色谱法测定皮下植入的VP-16血药浓度

试验者为小细胞肺癌患者,于右上臂皮下植入缓释VP 16(又称依托泊苷或鬼臼乙叉苷),按预定时间点采集静脉血并分离出血浆。血浆样品以氯仿萃取,常温下负压挥发至干,然后以流动相溶解,采用反相高效液相色谱法测定。流动相为V(甲醇)∶V(水)=52∶48的溶液,检测波长为UV 228nm,色谱柱为LichrosphereC18(250mm×4 6mmi d ,5μm)。用外标法定量。实验结果表明,该测定方法的检出限为0 02mg/L,绝对回收率为80 4%,相对回收率为94 7%,日内和日间精密度(用相对标准偏差RSD表示)均为8%左右;VP 16与血浆中其他成分(内源性干扰物)达到良好分离。此外还进行了血浆样品的稳定性试验,发现VP 16的萃后残渣于-5～0℃可保存240h。方法灵敏度较高,准确性和实用性好,为临床应用提供了可靠的检测方法。

口服或静滴VP-16联合DDP方案治疗非小细胞肺癌的临床观察

比较口服VP 16联合DDP与静滴VP 16联合DDP方案(EP方案)治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的临床疗效和毒性。方法 :选择经病理证实的NSCLC78例 ,随机分为两组。治疗组(40例) :VP 16100mg,静滴 ,d1,VP 16100mg,口服 ,d2～11,DDP80mg/m2,静滴 ,d1。对照组(38例) :VP 16100mg,静滴 ,d1～5,DDP剂量及用法同治疗组。两组均每3～4周为一疗程。结果 :治疗组及对照组的总有效率分别为45 0 %(18/40)和36 8 %(14/38) ,中位生存期分别为9 5月及8 4月 ,均无显著差异(P>0 05)。两组毒副反应主要为胃肠道反应及白细胞减少(P>0 05)。但治疗组粘膜反应及Ⅳ度白细胞减少 ,血小板减少均比对照组严重(P<0 05)。结论 :口服VP 16联合DDP是治疗NSCLC较为有效的方案 ,且给药简便、易行 。

直肠黏膜下植入VP-16缓释剂的HPLC测定及药动学研究

目的研究直肠癌患者术前直肠黏膜下植入VP-16缓释剂后,药物在肿瘤局部的分布、及药代动力学特征。方法10例采取根治性手术的直肠癌患者,术前直肠黏膜下植入VP-16缓释剂,按预订时间点抽取外周静脉血,168 h后手术,术中抽取肠系膜下静脉血和外周静脉血,并取癌组织癌旁近段的肠壁组织,HPLC检测VP-16药物浓度。结果外周血VP-16浓度遵从缓释制剂释放规律。168 h肠系膜下静脉血VP-16浓度约(0.110±0.045)mg.L-1,显著高于同时外周静脉血VP-16浓度(0.058±0.029)mg.L-1,癌组织VP-16浓度(373.64±269.51)μg.g-1,显著高于癌旁组织浓度VP-16浓度(115.98±98.68)μg.g-1,10例患者癌组织出现变性、坏死等改变;全组未出现全身和给药局部毒副作用。结论直肠癌患者术前直肠黏膜下植入VP-16缓释剂化疗,局部药物浓度高,可使瘤体变性、坏死而缩小,癌细胞与化疗药物的化疗作用维持较长时间;是术前区域性化疗的最佳途径之一;体现了明显的区域性化疗的药动学优势和显著的药效学结果,可望提高大肠癌根治术后的远期疗效。