含鸡传染性贫血病毒VP1、VP2基因重组火鸡疱疹病毒的构建

采用PCR方法 ,以传染性贫血病毒 (CIAV)DNA为模板 ,扩增并克隆了CIAV的VP1、VP2基因 ,并进行了序列分析。经基因修饰 ,将这两个基因分别加上表达元件后连接作为目的基因。通过同源重组技术 ,将目的基因插入到火鸡疱疹病毒 (HVT)gC基因区 ,构建了一株含CIAVVP1、VP2基因表达单元的重组HVT(VP1VP2_rHVT)。体内、体外传代结果表明该重组病毒性状稳定。采用PCR扩增及Southernblot杂交检测 ,证实了CIAVVP1、VP2基因的插入。

鸡传染性贫血病毒VP1、VP2基因在杆状病毒表达系统中的表达

将鸡传染性贫血病毒M990 5株VP1、VP2基因分别或同时克隆到杆状病毒转移载体pFastBacDUAL中 ,然后转化到DH10BAC感受态细胞中与Bacmid杆状病毒穿梭载体进行转座重组 ,最后将重组子转染Sf9昆虫细胞 ,得到分别或同时含VP1、VP2基因的重组杆状病毒rBacVP1、rBacVP2及rBacVP1_2。PCR扩增结果证实VP1、VP2基因重组到杆状病毒基因组中 ;SDS_PAGE电泳分析和间接免疫荧光试验结果表明VP1、VP2基因在重组病毒中得到了表达。