鸡群中鸡传染性贫血病原与抗体检测及分离株VP1基因序列分析

为了解鸡群中鸡传染性贫血病毒(CAV)感染及抗体产生情况,从黑龙江省两个无临床症状鸡群(B群和S群)中,分别采集血清通过ELISA方法进行抗体检测,采集抗凝血并分离淋巴细胞,针对基因组保守序列设计引物,通过PCR方法进行病原检测,并对从B群病原阳性鸡分离到的分离株进行VP1基因序列分析。结果显示,B群和S群CAV抗体阳性率分别为62.7%(79/126)和68.2%(88/129),病原阳性率分别为43.0%(49/114)和62.3%(48/77),其中,B群和S群中抗体和病原双阴性的鸡分别为23.7%(27/114)和15.6%(12/77),而抗体和病原双阳性的鸡分别高达28.1%(32/114)和46.8%(36/77);在双阳性鸡中,B群和S群分别有62.5%(20/32)和58.3%(21/36)抗体滴度在1.0×10^(4)及以上,从B群病原阳性鸡全血中分离到一株CAV(HLJ/2022株),分离株HLJ/2022第394位氨基酸为谷氨酰胺,具有强毒的分子特征;两个鸡群的环境拭子CAV阳性率为10.0%(3/30),存在于消毒前的鸡蛋表面、更衣处和鞋底。研究表明,检测鸡群的CAV抗体阳性率在62.7%以上,病原阳性率在43.0%以上,抗体滴度在1.0×104及以上CAV仍可存在,CAV流行株(HLJ/2022)具有强毒分子特征,鸡群环境中存在CAV污染,结果为CIA防控提供重要的参考意见。

鸭病毒性肝炎病毒分离鉴定及VP1基因序列分析

应用无母源抗体的鸭胚从疑似病毒性鸭肝炎的病麻鸭肝脏中分离到1株病毒。该分离毒能致死鸡胚、番鸭胚和麻鸭胚,死胚尿囊液均无血凝性;病毒能被鸭病毒性肝炎高免血清特异性中和;病毒人工感染3日龄麻鸭发病率和死亡率均达50%,并从病死鸭肝脏中回收到分离毒;RT-PCR扩增结果表明分离毒为I型DHV阳性,同时将此扩增的1 052 bp目的片段克隆到pMD18-T载体,对重组阳性质粒进行序列测定和分析表明分离毒的VP1基因与台湾省分离株DHV-03D的亲缘关系最近,同源率为95.7%,对VP1氨基酸潜在位点分析发现该分离毒具有野毒的分子特征。上述结果表明该分离毒为Ⅰ型鸭肝炎病毒,命名为DHV-NA株。

肠道病毒中枢神经系统感染患儿脑脊液中VP1序列的分子分型研究

目的探讨肠道病毒（EV）中枢神经系统感染患儿脑脊液（CSF）中VP1序列分子分型研究的临床价值。方法2003年1月至2005年12月青岛大学附属医院和滨州医学院附属医院采用通用引物和VP1段分子分型引物分别对63例无菌性脑膜炎和脑炎患儿急性期和恢复期的CSF标本进行扩增,对VP1分型引物扩增阳性片段进行克隆、测序及分型研究。结果采用通用引物经2次PCR检测急性期患儿的CSF标本共47例（47/63,74.6%）阳性,恢复期仅3例（3/57,5.3%）阳性。采用分型引物经2次PCR检测通用引物扩增阳性的47例急性期的CSF标本共31例（62.0%）阳性,其中4例脑炎和20例脑膜炎进行了序列测定。测序结果通过BLAST软件进行同源性对比分析,发现同一型别内序列同源性在97%～99%,不同型别之间同源性只有74%～76%,其中COX B3（9例）、ECHO 12（7例）、ECHO 30（3例）、COX A7（2例）、COX A9（1例）、COX B5（1例）、COX A11（1例）。所有CSF进行病毒分离,11例（11/63,17.5%）阳性,阳性率明显低于VP1段分子分型的检测结果,除1例CSF标本病毒分离为ECHO 7的患儿,通用引物扩增阳性而VP1分型引物扩增失败外,其余血清型别与VP1段分子分型研究结果完全一致。结论EV是儿童无菌性脑膜炎和脑炎最重要的病原体;采用通用引物所建的RT-PCR是快速检测EV中枢神经系统感染的有效方法;分型引物扩增VP1部分序列并测序,与GENBANK中的EV标准毒株进行对比,根据基因序列的同源性进行EV分型,为EV的分型研究提供了新的方法和思路。

深圳地区2014年柯萨奇病毒A组4型VP1区基因特征分析

目的对2014年深圳市罗湖区一起疱疹性咽峡炎疫情的病原体进行鉴定,并对鉴定的柯萨奇A4病毒（CVA4）的VP1基因进行序列测定和遗传进化特征分析。方法采集疫情中患儿的咽拭子样本8份,提取病毒核酸,利用荧光RTPCR法检测样本总肠道病毒（EV）、人肠道病毒71型（EV71）、柯萨奇病毒A组16型（CVAl6）、CVA4、CVA6和CVAl0等,对CVA4阳性样本采用RT-PCR方法扩增其VP1区全长序列,并进行核苷酸序列测定和遗传进化分析。结果引起此次疱疹性咽峡炎暴发的病原体为GIB亚型的CVA4病毒。同源性分析显示,深圳2014年CVA4病毒株与云南2004年分离株（AB268278）、以及台湾2008年分离株（AB571570）核苷酸同源性达94.1%~94.8%,而与CVA4原型株HIGHPOINT同源性最低,为84.3%。在氨基酸序列上与台湾2006年分离株（AB571563）、吉林2006年分离株（JQ715709）同源性最高,达99.3%;而与山东省2006年分离株（GQ253375）同源性最低,为97.1%。相比深圳2009年分离株（HQ728260）,共有6个氨基酸突变位点：N22S,T34A,N63S,A165D,T200A和V126A;而进化树分析显示,深圳2014年CVA4病毒株虽属于CVA4的GIB亚型,但在进化走势上,已经不同于GIB亚型中其他地区早期的分离株。结论 2014年深圳地区CVA4病毒属于GIB亚型,但在VP1区变异较大。

2007～2009年华南地区鸭肝炎病毒流行病学调查及分离株的VP1基因变异分析

为了分析华南地区鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus,DHV)的遗传进化情况,本试验对2007～2009年华南地区各鸭场发病雏鸭进行DHV的病原学检测以及VP1基因扩增、克隆和测序,并运用生物信息学软件对VP1基因进行了序列分析。结果表明:所分离的R、SS1、ZJ株为DHV-A、VP1 DHV-A参考毒株核苷酸序列相似性分别为93.8%～100%、93.7%～99.6%、91.7%～98.9%,氨基酸序列相似性分别为94.5%～100.0%、94.1%～99.2%、95.0%～99.2%。其余15株DHV-C分离病毒株与台湾新型DHV核苷酸和氨基酸序列相似性均在71.4%～72.0%和78.2%～79.0%之间,与韩国新型DHV相似性在94.0%～95.1%和91.6%～93.3%之间,与国内分离的新型DHV相似性均在97.9%～100.0%和97.5%～100.0%之间。VP1氨基酸序列比对分析表明:VP1的高变区主要分布在46～64、95～149、180～223位,尤其是C′末端,存在点突变或连续变异。在第145～146位,15株新型DHV毒株比3株Ⅰ型DHV多2个氨基酸(G和G)。小RNA病毒科的VP1蛋白中保守的RGD基序,在DHV中分别显示为SGD和QSD。结果表明,危害华南地区鸭场的DHV已经发生变异,且存在两种基因型毒株的流行。

2019年云南省昆明市柯萨奇病毒A组16型毒株的分离鉴定及其VP1基因遗传特征分析

目的对2019年云南省手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)患者粪便中分离获得的柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CVA16)毒株的全VP1基因遗传特征进行分析。方法使用人胚肺二倍体KMB-17细胞和非洲绿猴肾Vero细胞分离病毒,设计针对CVA16全VP1基因序列引物,采用RT-PCR扩增目的基因片段并测序;利用MEGA 7.0和Geneious 9.0.2等软件对全VP1序列进行分析。结果共分离获得26株CVA16毒株,其中有8株KMB-17分离株和18株Vero分离株。随机选取20株CVA16分离株进行分析,发现3株B1a和17株B1b基因亚型;其中17株CVA16 B1b分离株的核苷酸和氨基酸同源性分别为93.8%~100%和98.3%~100%,与国内其他分离株的核苷酸和氨基酸同源性为91.1%~99.2%和97.3%~99.0%;3株B1a分离株的核苷酸和氨基酸同源性为98.0%~98.1%和99.3%,与国内其他B1a分离株的核苷酸和氨基酸同源性为88.7%~98.7%和98.3%~99.7%;17株B1b分离株与其他3株B1a的核苷酸和氨基酸同源性为87.4%~88.4%和97.3%~98.7%。结论2019年昆明地区流行的CVA16属于B1a和B1b基因亚型,以B1b为主,且均为中国内地流行株。

咸阳市2018-2022年柯萨奇A组16型病毒序列分析

本研究旨在了解咸阳市2018-2022年手足口病(Hand, foot and mouth disease, HFMD)病原柯萨奇A组16型(Coxsackievirus A16, CV-A16)基因进化特征,为HFMD防控策略制定提供依据。首先分析2018-2022年咸阳市HFMD监测数据,再选取部分CV-A16阳性样本进行RT-PCR扩增VP1基因序列,测序后进行系统进化和序列相似性分析。2018-2022年咸阳市CV-A16阳性确诊病例共计402例,占实验室确诊病例总数的28.69%(402/1401)。VP1序列系统进化分析显示选取的54条CV-A16 VP1均为B1基因亚型,25条属B1a型,29条属B1b型。2018-2020年以B1b型为主,而2021-2022年主要为B1a型。氨基酸序列相似性分析表明,B1a型序列存在T164K(25/25)、I251V(25/25)和A22T(3/25)三处突变,而B1b型主要有N14S(9/29)和I235V(6/29)突变。CV-A16为咸阳市2018年、2019年、2021年和2022年HFMD主要致病原之一,2021年后优势毒株可能已由B1b型转化为B1a型,将来应加强CV-A16基因型动态监测。

引起深圳市一起疱疹性咽峡炎暴发的柯萨奇A4病毒的鉴定及其VP1区序列分析

目的鉴定引起2012年深圳市罗湖区一起疱疹性咽峡炎暴发的病原体,并对鉴定的柯萨奇A4病毒(coxsackie virus A4,CVA4)的VP1基因进行全长的序列测定和遗传进化特征分析。方法采集罗湖区某幼儿园疱疹性咽峡炎暴发期间患儿的4份咽拭子样本和1份粪便标本,采用荧光RT-PCR法鉴定CVA4病毒,对阳性样本采用RT-PCR方法扩增CVA4病毒VP1区全长序列,并进行核苷酸序列测定和系统进化分析。结果病原学检测结果显示,引起此次疱疹性咽峡炎暴发的病原体为CVA4病毒。同源性分析显示,引起深圳疱疹性咽峡炎的CVA4病毒SZ-SK12030005、SZ-SK12030007与山东省2010株(KF150144)进化关系最近,核苷酸和氨基酸同源性分别为96.4%和99.5%;与2006年吉林株(JQ715708)的同源性最低,核苷酸和氨基酸同源性分别为87.9%和96.6%。VP1区亲缘进化树显示CVA4-SZ-SK12030005和CVA4-SZ-SK12030007属于GⅠB亚型。结论 GⅠB型CVA4病毒是引起此次深圳市疱疹性咽峡炎疫情的病原体。

内蒙古地区2010年柯萨奇病毒A组16型VP1区序列测定及系统进化分析

分析测定2010年自内蒙古地区分离的柯萨奇病毒A组16型（CoxA16）毒株VP1区序列及其基因型，为研究内蒙古地区CoxA16的流行、进化、变异积累资料。

埃可病毒7型云南分离株VP1编码序列基因特征分析

目的对从云南省病毒性脑炎监测平台中分离到的3株埃可病毒7型(echovirus 7,E7)VP1编码序列进行扩增和测序,并与E7病毒原型株(Wallace)及以前云南省急性弛缓性麻痹(acute flaccid paralysis,AFP)病例、健康人群和环境污水中分离的E7病毒一起进行VP1编码序列基因特征分析。方法用RT-PCR方法扩增3株病毒VP1编码序列并进行序列测定。用MEGA 5.0软件构建3株病毒、E7病毒原型株及云南省以前分离的E7病毒的VP1编码序列进化树,进行基因特征和分子流行病学分析。结果 E7病毒原型株(Wallace)为基因型A,云南分离株为基因型B,基因型B又可分为两个亚型,即亚型1(subtype 1)和亚型2(subtype 2),每个亚型又可分为两个不同的进化分支(lineage)。3株病毒性脑炎分离株属于亚型1的进化分支2(lineage 2)。结论 E7是一个重要的病毒,在基因进化树中云南省脑炎监测平台分离的E7自成一簇,单独构成一个进化分支,加强E7病毒的研究具有重要意义。

基于VP1区基因序列测定的肠道病毒分型方法在手足口病病原鉴定中的应用

目的应用基于VP1区基因序列测定的分子分型方法鉴定手足口病相关肠道病毒病原型别。方法使用肠道病毒VP1区种属特异性,采用逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)方法扩增VP1区基因序列,对扩增产物进行序列测定,运用Chromas Pro1.7.6、MEGA 5.05等生物信息学软件进行序列核对及拼接,将序列提交肠道病毒分型网站(Enterovirus Genotyping Tool 0.5)鉴定型别。结果 40份其他肠道病毒(非EV-A71、非CVA16)核酸阳性的手足口病病例临床标本,先行采用商品化实时荧光RT-PCR试剂盒鉴定出31份柯萨奇病毒A组6型(CVA6)、2份柯萨奇病毒A组10型(CVA10);对其余待鉴定的7份样本,采用肠道病毒特异性引物进行VP1基因序列扩增和测序并分析,鉴定出柯萨奇病毒A组4型(CVA4)4株和A组9型(CVA9)、埃可病毒14(E-14)各1株,另1株为EV-A71。结论基于VP1区基因序列测定的肠道病毒分型方法具有较好的敏感性和简便、快速的特点,可用于手足口病及其他肠道病毒感染的实验室诊断和相关的研究。

昆明市病毒性脑炎病例中埃可病毒6型分离株的VP1编码序列基因特征分析

目的对2010-2014年昆明市病毒性脑炎病例中分离的4株埃可病毒6型(echovirus 6,E6)VP1编码序列特征进行分子流行病学分析。方法对昆明市2010-2014年传染病重大专项脑炎综合征实验室监测系统分离到的4株E6病毒的VP1区基因进行基因扩增和测序;按参考文献下载基因库中E6病毒VP1编码序列参考序列,用MEGA5.1软件计算不同毒株的核苷酸和氨基酸差异率,并构建系统进化树,进行VP1编码序列特征和分子流行病学分析。结果 2010-2014年云南省病毒性脑炎病例中分离到的103份肠道病毒中共检出E6病毒4株,占3.88%(4/103),E6病毒的阳性总检出率为0.29%(4/1 376)。VP1编码序列特征分析表明,云南4株E6毒株均为C2基因亚型(genotype C2)。结论除原型株为A基因型外,其他E6毒株可分为3个基因型(基因型B、C和D),C基因型又分为4个亚型,云南分离株分布在C2基因亚型,且2010年和2011年的云南分离株与部分山东地区的分离株较为接近,而2013年和2014年的云南分离株自成一簇,为云南省特有的亚型,该病毒可能在昆明地区存在小范围流行。

昆明市2018—2021年手足口病病例中柯萨奇病毒A组4型流行情况及VP1编码序列基因特征分析

目的 分析昆明市2018—2021年手足口病病原构成,研究柯萨奇病毒A组4型(coxsackievirus A4,CVA4)的流行特点及VP1编码序列系统进化与氨基酸变异情况。方法 采用实时荧光逆转录聚合酶链反应(real-time reverse transcript-polymerase chain reaction, real time RT-PCR)对2018—2021年昆明市疾病预防控制中心监测到的昆明市手足口病病例标本3 553份进行肠道病毒核酸检测,描述CVA4的流行情况,并进行VP1编码序列全长测序、氨基酸位点变异及系统进化分析。结果 共检出肠道病毒阳性标本2 531份,阳性率71.24%,其中CVA16、EV-A71及其他肠道病毒(非EV-A71、非CVA16)占阳性样本的构成比分别为38.05%(963/2 531)、4.11%(104/2 531)和57.84%(1 464/2 531)。CVA4阳性52份,其高发区域为昆明市区及东南部,涉及5个县区,阳性数占CVA4病例总数的73.08%(38/52),高发时间为8—12月,占CVA4病例总数的71.15%(37/52),高危人群为1~3岁儿童,占86.54%(45/52),男性多于女性,多引起轻症。CVA4共测序成功51份,核苷酸相似性为90.90%~100.00%,氨基酸相似性为97.30%~100.00%,均为C基因型C2亚型,分为3个传播链(cluster),clusterⅠ以2019年昆明市毒株为主,clusterⅡ以2020和2021年昆明市毒株为主,clusterⅠ、Ⅱ包含了98.04%(50/51)昆明市毒株。与原型株High Point(AF081295)VP1区氨基酸序列相比,有R18K、T23V、A34T、S102A、A200T、I262V、R274K和Y285H共8个高频氨基酸变异位点。结论 2018—2021年昆明市手足口病病原谱中其他肠道病毒(非EV-A71、非CVA16)占主导地位,CVA4作为其中的一个重要类型,属于C2亚型。应针对昆明市主城区及东南部区县、8—12月和1~3岁儿童等因素合理配置防控资源,做好CVA4防控工作。

2019年云南省昆明市柯萨奇病毒A组4型毒株分离鉴定及其VP1基因特性分析

目的对2019年云南省手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)患者粪便中分离获得的柯萨奇病毒A组4型(coxsackievirus A4,CV-A4)毒株的VP1基因遗传特征进行分析。方法利用人横纹肌肉瘤RD细胞、人胚肺二倍体KMB-17细胞和非洲绿猴肾Vero细胞分离病毒,以病毒RNA作为逆转录-聚合酶链反应(reverse transcriptionpolymerase chain reaction,RT-PCR)的模板,扩增病毒完整VP1基因,利用MEGA 6.06和Geneious 9.0.2等软件对VP1序列进行分析。结果选取8株CV-A4分离株进行分析,其完整VP1序列为915 bp,编码305个氨基酸。8株CV-A4云南分离株与CVA4/High Point/USA/1949/AF081295(简称原型株)的核苷酸一致性和氨基酸同源性分别为83.4%~84.6%和97.0%~98.0%;与其他国内CV-A4参考株相比,核苷酸一致性和氨基酸同源性分别为87.7%~97.0%和97.7%~99.3%。8株CV-A4云南分离株相互比对,核苷酸一致性和氨基酸同源性分别为91.0%~99.9%和97.7%~100.0%。CV-A4云南分离株与大部分中国分离株同属C2基因亚型。结论本研究中CV-A4分离株均是中国大陆地区优势流行株。

云南省重症手足口病EV-A71型病毒VP1基因遗传特征分析

目的分析云南省重症手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)患者肠道病毒71型(enterovirus A71,EV-A71)的VP1基因遗传特征。方法对收集的重症病例粪便样本进行荧光RT-PCR鉴定和病毒分离培养,并对鉴定为EV-A71型的毒株进行VP1区的核酸扩增和序列测定,与其他地区和国家的重症参考株构建遗传进化树,进行遗传特征分析。结果本研究共收集到了10份EV-A71型重症患者样本,10份EV-A71型分离株均属于C4a亚型,并在遗传进化树上与其他地区和国家的重症分离株明显聚集成簇,存在氨基酸突变位点。结论重症手足口病EV-A71病毒在进化树上聚集为2簇,10份云南分离株主要聚集在簇Ⅱ分支,其VP1区氨基酸突变位点与国内及国际其他肠道病毒71型的突变位点有相似性。

感染中枢神经系统肠道病毒的分子生物学分型

目的探讨小儿肠道病毒(EV)中枢神经系统感染病毒基因VP1序列的分子分型的临床意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,应用通用引物和VP1段分子分型引物检测77例临床诊断为无菌性脑膜炎病儿(其中急性期63例,恢复期14例)脑脊液(CSF)的EV RNA,并对VP1分型引物扩增阳性片段进行克隆、测序及分型研究。结果77例无菌性脑膜炎病儿CSF中,采用通用引物经两次PCR在急性期共获得阳性结果47例(占急性期的74.6%),恢复期3例(占恢复期的21.4%)。将EV RNA阳性的50例标本应用分型引物经两次PCR共获得阳性结果31例(占62.0%)。随机抽取27条阳性片段进行克隆测序,测序结果通过BLAST软件与GenBank EV标准毒株进行同源性对比分析,相关序列同源性均在97%以上。结论采用分型引物扩增VP1部分序列并测序,将EV的VP1部分序列与GenBank中的EV标准毒株进行对比,根据基因序列的同源性可以对EV进行型别鉴定,为EV的分型研究提供了新的方法和思路。

用于检测小鹅瘟抗体的Dot-ELISA建立

以小鹅瘟病毒(GPV)VP1-VP3非重叠序列重组原核表达多肽为检测抗原,建立了鉴别GPV全病毒抗体与VP3亚单位抗体的Dot-ELISA。该方法中检测抗原包被浓度为70ng/斑点,兔抗鹅IgG-HRP标记抗体的最适稀释度为1∶200,被检血清最佳稀释度为1∶400。特异性试验的结果中,检测抗GPV抗体的阳性率为100%,而抗GPV-VP3禽痘重组病毒抗体的阳性率为0,表明其有很好的特异性与灵敏度。

2015—2016年新疆EV71VP1区基因特征分析

目的分析并掌握2015—2016年新疆引起手足口病的EV71毒株的基因特征。方法收集2015年和2016年新疆各地(州)手足口病临床样本,从EV71阳性样本中随机抽取56份(2015年和2016年各28份),扩增VP1区基因并进行序列测定,用Chromas Pro 1.7.6,Bio Edit 7.1.9及MEGA 5.05等软件分析序列。结果共获得51株毒株的VP1区基因序列,新疆株之间核苷酸序列同源性为93.5%~100.0%,EV71新疆株与EV71 C4a基因亚型代表株同源性最高,为95.4%~97.9%,与EV71 C4b基因亚型代表株同源性为90.0%~93.2%,与EV71原型株之间同源性仅为81.9%~83.6%;多数2015年新疆株与2014年深圳株(SHZH2014JB141330327)及2015年福建株(FJQZ246/CHN/2015)亲缘关系较近,核苷酸同源性为97.6%~99.2%;多数2016年毒株与2016年北京株(BJ2016/5XCHFM-155)亲缘关系更近,核苷酸序列同源性为98.7%~99.5%。结论 2015年和2016年EV71新疆株均属于C4a基因亚型,相互之间同源性较高,与国内其他地区同时期毒株关系较近;2015年与2016年EV71新疆株在进化树上有分别归属两支的趋势。

一起暴发流行的无菌性脑炎的病原分析

目的对一起暴发流行的无菌性脑炎进行病原分析。方法用荧光PCR法对14份咽拭子标本进行核酸定性检测,细胞培养分离得到病毒后进行微量细胞中和试验,并对病毒VP1区3’段核酸测序以鉴定病毒。结果 14份咽拭子标本中,甲型/乙型流感病毒、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(Cox A16型)均为阴性,其中8份标本肠道病毒通用型为阳性。从该8份标本从中分离到3株疑似肠道病毒,经微量细胞中和试验及病毒VP1区3’段核酸测序鉴定,均为埃可病毒30(ECHO30)型肠道病毒。结论本次暴发的无菌性脑炎由ECHO30型肠道病毒引起。

2014年温州地区柯萨奇病毒A组6型手足口病的临床特征及分子流行病学特征分析

目的对柯萨奇病毒A组6型（CoxA6）手足口病进行临床特点及分子流行病学特征研究，以阐明此次疫情的特点。方法收集温州医科大学附属第二医院儿童感染科2014年7月至11月间临床确诊手足口病患者949例。所有患者均行肛拭子和（或）咽拭子检测，对病毒检测阳性的患者分为CoxA6组与非CoxA6组进行流行病学及临床特点分析，并于4周内进行门诊和（或）电话随访收集皮疹脱屑、指甲异常的情况。病毒检测CoxA6阳性者，通过反转录-PCR对CoxA6的VP1序列进行扩增、克隆和测序；通过Mega6．0软件对不同病毒株VP1序列进行系统发生分析。两组间计量资料比较采用t检验，计数资料比较采用x^2检验或Fisher精确概率法。结果最终实验室确诊560例，其中CoxA6446例（79．6％），人肠道病毒71型（EV71）44例（7．9％），CoxAl043例（7．7V00），CoxA1627例（4．8％）。CoxA6组体温〉39℃患儿比例显著高于非CoxA6组（71．3％比52．6％，x^2=14．42，P〈0．01），但持续时间短于非CoxA6组[（2．4±1．2）d比（3．1±1．4）d，t=-4．45，P〈0．01）；CoxA6组脑炎或脑膜炎神经系统受累方面显著低于CoxA6组，差异有统计学意义（O．7％比19．3％，x^2=81．53，P〈0．05）。CoxA6组口腔及口周皮疹（31．6％比13．2％，x^2=15．39）、小腿及前臂皮疹（32．3％比16．7％，x^2=10．74）、颈部及躯干皮疹（34．5％比8．8％，x^2=29．09）、皮疹溃疡及结痂（29．8％比18．4％，x^2=5．92），均显著高于非CoxA6组，且差异均有统计学意义（均P〈0．05）；而非CoxA6组皮疹主要局限于手掌及足底，与CoxA6组差异有统计学意义（93．9％比21．7％，x^2=1.94，P〈0．01）。CoxA6组疱疹（61．2％比28．9％，x^2=38．13）、大疱疹（23．3％比5．3％，x^2=18．75）比例均高于非CoxA6组（均P〈0．01）。出院4周内进行门诊和（或）电话随访，CoxA6组皮疹愈合后出现脱皮（30．0％比14．9％，x^2=10．56）、脱甲（20．4％比9．6％，x^2=7．05）比例显著高于非CoxA6组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。序列分析表明CoxA6株与来自我国部分流行株的同源性较高（94．2％～99．2％），且在同一个分支。结论CoxA6感染主要表现为皮肤、黏膜多处受累，较深的皮肤组织被破坏，并出现脱皮和指甲异常，无明显中枢神经系统受累，预后好。