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应用GPV VP3基因重组原核表达产物建立检测抗体的ELISA方法研究 被引量:16
1
作者 布日额 李宝臣 +2 位作者 马波 王君伟 Ulrich Neumann 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期199-203,共5页
利用鹅细小病毒(GPV)VP3基因的原核表达蛋白作为包被抗原建立了检测GPV抗体的间接ELISA及Dot-ELISA方法。经确定两种方法的抗原包被浓度为125μg/mL,其中间接-ELISA 100μL/孔、Dot-ELISA 5μL/点。间接-ELISA中HRP标记的兔抗鹅Ig... 利用鹅细小病毒(GPV)VP3基因的原核表达蛋白作为包被抗原建立了检测GPV抗体的间接ELISA及Dot-ELISA方法。经确定两种方法的抗原包被浓度为125μg/mL,其中间接-ELISA 100μL/孔、Dot-ELISA 5μL/点。间接-ELISA中HRP标记的兔抗鹅IgG的工作浓度是1:200,检测血清的最适稀释度是1:400,阳性判定标准为OD492≥0.20,且P/N≥2.0。用此方法检测弱毒疫苗免疫血清,其抗体滴度在1:400~1:51200。Dot-ELISA的结果与间接-ELISA的结果一致。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 vp3基因重组原核表达产物 间接-ELISA Dot—ELISA
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鸭肝炎病毒Ⅰ型VP3基因的克隆及原核表达 被引量:11
2
作者 刘家森 甘一迪 +5 位作者 姜骞 孟庆文 韩凌霞 司昌德 刘娣 曲连东 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期587-590,共4页
参照鸭肝炎病毒Ⅰ型(DHV-Ⅰ)的基因组序列设计并合成了1对引物。通过RT-PCR方法扩增获得了DHV-Ⅰ病毒161/79/V结构蛋白VP3基因,并将VP3基因片段插入pGEX-6p-1表达载体,转化E.coli Rosetta-gami(DE3)pLysS。SDS-PAGE分析表明,经用0.1mmol... 参照鸭肝炎病毒Ⅰ型(DHV-Ⅰ)的基因组序列设计并合成了1对引物。通过RT-PCR方法扩增获得了DHV-Ⅰ病毒161/79/V结构蛋白VP3基因,并将VP3基因片段插入pGEX-6p-1表达载体,转化E.coli Rosetta-gami(DE3)pLysS。SDS-PAGE分析表明,经用0.1mmol/LIPTG于16℃诱导表达后,菌体裂解产物有特异的、分子质量约52ku的目的蛋白条带。Western-blotting检测表明,表达产物与DHV-Ⅰ阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 鸭肝炎病毒Ⅰ型 vp3基因 克隆 原核表达
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鹅细小病毒野毒株VP3基因的原核表达及抗原性检测 被引量:7
3
作者 鞠环宇 卫娜 +4 位作者 尚绪增 荆志强 郭鹭 马波 王君伟 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期492-497,共6页
根据发表的鹅细小病毒(GPV)基因序列设计合成了2对检测GPV的特异性引物,用其对疑似小鹅瘟的病料进行PCR检测,经序列比对后确定为GPV感染;利用引物Gs/Ga扩增获得的GPV野毒株VP3基因,测序后将VP3基因连接到原核表达载体pET-30a上,获得重... 根据发表的鹅细小病毒(GPV)基因序列设计合成了2对检测GPV的特异性引物,用其对疑似小鹅瘟的病料进行PCR检测,经序列比对后确定为GPV感染;利用引物Gs/Ga扩增获得的GPV野毒株VP3基因,测序后将VP3基因连接到原核表达载体pET-30a上,获得重组质粒pET-30a-VP3,将其转化感受态菌Rosetta(DE3)pLysS中,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析。结果显示,重组菌可表达出分子质量约为66 000 u的重组融合蛋白,表达的蛋白以包涵体形式存在于菌体中。表达产物经Ni2+亲和层析柱纯化,获得了纯度较高的目的蛋白。Western-blot分析结果显示,纯化的蛋白能与GPV阳性血清发生特异性反应,证实表达的蛋白具有较好的抗原性。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 vp3基因 克隆 原核表达 纯化 抗原性
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传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP3基因的克隆与原核表达 被引量:4
4
作者 彭志伟 王笑梅 +4 位作者 高宏雷 付朝阳 张厚双 包晓玮 冉多良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期124-127,共4页
利用PCR技术扩增出IBDV的结构蛋白VP3基因,将其克隆到表达载体pPROEX-HTa中,获得重组质粒命名为VP3/PA,经PCR、酶切和序列分析鉴定表明,插入的位置、大小和读码框均正确。SDS-PAGE检测表明,经重组质粒VP3/PA转化、诱导的受体菌E.coliDH... 利用PCR技术扩增出IBDV的结构蛋白VP3基因,将其克隆到表达载体pPROEX-HTa中,获得重组质粒命名为VP3/PA,经PCR、酶切和序列分析鉴定表明,插入的位置、大小和读码框均正确。SDS-PAGE检测表明,经重组质粒VP3/PA转化、诱导的受体菌E.coliDH5α能表达结构蛋白VP3基因,约33Ku,表达量达到了菌体总蛋白的33.9%,经Westernblot等检测表明,诱导表达的抗原蛋白能与vvIBDV阳性血清发生特异性反应。这为IBDV血清学诊断方法的建立打下了基础。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 结构蛋白vp3基因 克隆与原核表达
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Ⅰ型鸭肝炎病毒VP3基因的克隆及原核表达 被引量:3
5
作者 李露 程英杰 +4 位作者 李传峰 陈宗艳 孟春春 何后军 刘光清 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第10期33-37,共5页
采用RT-PCR方法从Ⅰ型鸭肝炎病毒ZJ-Ⅴ株中扩增VP3基因,运用DNAStar软件对VP3序列与参考序列的同源性进行比对,并进行了遗传进化分析,然后将VP3基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),获得重组表达质粒pET-VP3,转化宿主菌E.coli Rosetta(DE... 采用RT-PCR方法从Ⅰ型鸭肝炎病毒ZJ-Ⅴ株中扩增VP3基因,运用DNAStar软件对VP3序列与参考序列的同源性进行比对,并进行了遗传进化分析,然后将VP3基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),获得重组表达质粒pET-VP3,转化宿主菌E.coli Rosetta(DE3),经1mmol/L IPTG诱导表达后用SDS-PAGE和Western blotting方法对表达产物进行检测。结果显示,成功克隆了DHV-ⅠVP3基因,片段大小为711bp。序列分析结果表明,ZJ-Ⅴ株VP3与其他A型DHV分离株的同源性较高,为95.1%~97.7%;而与C型DHV分离株的同源性较低,为71.3%~72.6%;与B型DHV分离株的VP3基因同源性最差,为70.3%~70.5%。SDS-PAGE和Western blotting检测结果显示,重组VP3基因在大肠杆菌细胞(DE3)中获得了良好表达,其分子质量约为47ku;与抗Ⅰ型鸭肝炎病毒ZJ-Ⅴ株阳性血清发生特异性免疫反应,表明重组VP3蛋白具有良好免疫原性。 展开更多
关键词 Ⅰ型鸭肝炎病毒 vp3基因 原核表达 序列分析
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小麦胚乳14-3-3基因的克隆及其重组蛋白的原核表达 被引量:2
6
作者 戴双 李豪圣 +4 位作者 程敦公 刘爱峰 曹新有 刘建军 宋健民 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期2076-2084,共9页
【目的】克隆小麦籽粒胚乳14-3-3基因,并进行体外表达,为进一步研究其对籽粒生长发育的调控作用奠定基础。【方法】根据已有同源基因保守序列,设计插入限制性酶切位点的特异性扩增引物,采用RT-PCR方法扩增发育的小麦胚乳14-3-3基因,克... 【目的】克隆小麦籽粒胚乳14-3-3基因,并进行体外表达,为进一步研究其对籽粒生长发育的调控作用奠定基础。【方法】根据已有同源基因保守序列,设计插入限制性酶切位点的特异性扩增引物,采用RT-PCR方法扩增发育的小麦胚乳14-3-3基因,克隆测序后转入表达载体,在大肠杆菌中进行表达,并进行纯化。【结果】从开花后灌浆13—15 d的小麦品种济麦22籽粒胚乳中克隆到1个14-3-3基因,序列分析表明为非ε型,含1个777 bp的开放阅读框,编码蛋白259 aa,分子量约29 kD。核苷酸序列分析表明与小麦、水稻、玉米、大麦、大豆等主要农作物和模式植物拟南芥的14-3-3基因有较高的同源性,最高达98%,编码蛋白氨基酸长度也一致(260aa左右);在大肠杆菌中高效表达的重组蛋白约为30 kD,分子量大小与根据核苷酸序列推导的编码蛋白一致。从基因序列的同源性、编码蛋白的氨基酸长度、表达蛋白的分子量大小分析都说明克隆到的基因为14-3-3基因,并准确插入表达载体,得到了高效正确表达。将克隆的基因插入pET29c载体,热激转化大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RP,得到了高效表达,但主要以包涵体形式(80%)存在。对重组蛋白进行了纯化,可溶性重组蛋白利用S-蛋白琼脂糖树脂得到纯化的蛋白,包涵体重组蛋白经变性溶解、复性后,也利用S-蛋白琼脂糖树脂得到了高度纯化的重组蛋白。【结论】利用RT-PCR技术从发育的小麦胚乳中克隆到1个14-3-3基因,并在大肠杆菌中得到了高效表达,重组蛋白经过纯化得到了纯度较高的活性蛋白。 展开更多
关键词 小麦 14-3-3蛋白 基因克隆 重组蛋白 原核表达
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柯萨奇病毒B组3型VP1基因真核表达重组质粒的构建及免疫效果 被引量:5
7
作者 倪志宇 王永祥 +1 位作者 金玉怀 金世香 《河北医科大学学报》 CAS 2002年第3期133-136,共4页
目的构建柯萨奇病毒B组 3型 (CoxsackievirusesgroupB3,CVB3)VP1基因的真核表达重组质粒pcDNA3/VP1,并观察它对小鼠的免疫保护作用。方法从CVB3感染细胞中扩增出VP1片段 ,构建真核表达重组质粒 pcDNA3/VP1,经大量扩增纯化后 ,肌内注射免... 目的构建柯萨奇病毒B组 3型 (CoxsackievirusesgroupB3,CVB3)VP1基因的真核表达重组质粒pcDNA3/VP1,并观察它对小鼠的免疫保护作用。方法从CVB3感染细胞中扩增出VP1片段 ,构建真核表达重组质粒 pcDNA3/VP1,经大量扩增纯化后 ,肌内注射免疫BALB/c小鼠 ,每次免疫后的第 6天 ,断尾取血检测CVB3中和抗体 ;3次免疫后用致死量 (10 0 0TCID50 )的CVB3感染小鼠 ,观察 pcDNA/VP1对小鼠的免疫保护作用。 结果pcDNA3/VP1重组质粒免疫小鼠后 ,能诱导机体产生中和抗体 ,各次免疫后抗体滴度分别为 <1∶5 ,1∶5 .7和1∶34.8;用致死量CVB3感染小鼠 ,pcDNA3/VP1重组质粒免疫组、pcDNA3质粒对照组及生理盐水对照组生存率分别为 30 %、2 0 %及 15 % ,3组小鼠生存率无明显差异 (P >0 .0 5 )。结论 pcDNA3/VP1重组质粒在小鼠体内能够表达并能诱导机体产生中和抗体 ,抗体滴度随免疫次数增加 。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒B组3 vp1基因 真核表达 重组质粒 构建 免疫效果
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鹅细小病毒主要免疫原性蛋白VP3基因遗传变异及其原核表达 被引量:2
8
作者 毕玉海 丁壮 +6 位作者 徐明 李志杰 常爽 黄海楠 宋子运 尹仁福 杜眉 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期172-175,共4页
根据鹅细小病毒(GPV)B株全基因序列,设计并合成了1对特异性引物,采用PCR技术对GPVGD-01株的VP3基因进行扩增,将目的基因克隆到pGEM○R-T后测序,分析了GPV GD-01株VP3基因的遗传变异情况,并进行原核表达。结果表明,GPV GD-01株VP3基因全... 根据鹅细小病毒(GPV)B株全基因序列,设计并合成了1对特异性引物,采用PCR技术对GPVGD-01株的VP3基因进行扩增,将目的基因克隆到pGEM○R-T后测序,分析了GPV GD-01株VP3基因的遗传变异情况,并进行原核表达。结果表明,GPV GD-01株VP3基因全长1605bp,编码534个氨基酸(DQ665790),与已发表的GPV、番鸭细小病毒(MDPV)的核苷酸、氨基酸同源性分别为96.15%、80.1%,97.78%、89.13%,说明GPV VP3基因具有较高的遗传稳定性。结合亲水性、表面极性、抗原位点分析比较GPV、MDPV VP3基因,为研究GPV和MDPV感染谱差异的分子机制提供了一定的理论基础。原核表达显示,VP3蛋白的最高表达量占整个菌体蛋白含量的29.9%,经表达条件优化可产生大量可溶性VP3表达蛋白。SDS-PAGE与Western-blot分析显示,表达的VP3蛋白的相对分子质量约60000,并能与鼠抗GPV阳性血清反应,证明具有一定的反应原性,为进一步研制基因工程疫苗及诊断制品奠定了基础。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 vp3基因 遗传变异 原核表达
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鸡传染性法氏囊病病毒VP3基因的克隆与原核表达 被引量:3
9
作者 宋铁彬 白江 +2 位作者 马博 王连江 陈福勇 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第11期29-30,共2页
关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 vp3基因 克隆与原核表达 RNA病毒 IBDV A节段 基因 vp2
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表达鹅细小病毒VP3基因重组腺病毒的构建与鉴定 被引量:3
10
作者 陈海迪 高旭 +4 位作者 张颖 许应天 张立媛 于清洋 鲁承 《安徽农业科学》 CAS 2014年第33期11751-11754,共4页
[目的]构建表达鹅细小病毒(GPV)VP3基因的重组腺病毒,为机体免疫试验和免疫效果评价奠定基础。[方法]以重组质粒pc DNA-VP3为模板,以GPV-VP3为目的基因,构建GPV-VP3重组腺病毒载体,通过转染获得能稳定表达GPV-VP3基因的重组腺病毒,通过... [目的]构建表达鹅细小病毒(GPV)VP3基因的重组腺病毒,为机体免疫试验和免疫效果评价奠定基础。[方法]以重组质粒pc DNA-VP3为模板,以GPV-VP3为目的基因,构建GPV-VP3重组腺病毒载体,通过转染获得能稳定表达GPV-VP3基因的重组腺病毒,通过IFA和Western-blot检测GPV-VP3基因的表达情况。[结果]扩增到的GPV-VP3基因全长为1 605 bp,线性化的重组腺病毒穿梭质粒p CR259-VP3能在QBI-HEK293细胞中瞬时表达GPV-VP3基因,表达蛋白的分子量约为60 Ku。[结论]该重组腺病毒的构建将为GPV新型疫苗研发和后期体内试验奠定基础。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 vp3基因 重组腺病毒 真核表达
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鸡传染性贫血病毒vp3基因的原核表达及其免疫学活性分析 被引量:1
11
作者 陆桂丽 王笑梅 +3 位作者 高玉龙 高宏雷 祁小乐 王晓燕 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期650-652,共3页
将鸡传染性贫血病毒(CIAV)Vp3基因克隆入表达载体pET-28a中,然后转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导,vp3基因以融合蛋白的形式高效表达。SDS-PAGE分析显示,表达的重组蛋白分子量约为18Ku。Westernblot分析表明,该蛋白可与CIAV阳性血清特异性... 将鸡传染性贫血病毒(CIAV)Vp3基因克隆入表达载体pET-28a中,然后转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导,vp3基因以融合蛋白的形式高效表达。SDS-PAGE分析显示,表达的重组蛋白分子量约为18Ku。Westernblot分析表明,该蛋白可与CIAV阳性血清特异性反应。 展开更多
关键词 鸡传染性贫血病毒 vp3基因 原核表达
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鹅细小病毒长春分离株主要结构蛋白(VP2-VP3)基因的原核表达 被引量:2
12
作者 李雪梅 章金刚 +3 位作者 向华 陈晓月 金宁一 费恩阁 《生物技术通讯》 CAS 2002年第5期331-333,共3页
根据国外已发表的鹅细小病毒(GPV)A株基因组核苷酸序列,设计并合成了一对用于GPV主要结构蛋白(VP2-VP3)基因表达的引物。利用合成的引物,扩增并鉴定了GPV中国长春株(GPVCC株)的VP2-VP3基因。将扩增的目的基因插入到原核表达载体pET28(a... 根据国外已发表的鹅细小病毒(GPV)A株基因组核苷酸序列,设计并合成了一对用于GPV主要结构蛋白(VP2-VP3)基因表达的引物。利用合成的引物,扩增并鉴定了GPV中国长春株(GPVCC株)的VP2-VP3基因。将扩增的目的基因插入到原核表达载体pET28(a)的多克隆位点,构建了表达GPVVP2-VP3基因的原核载体pEGVP1。重组表达载体质粒转化BL21宿主菌,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测到大小分别为75000和58000的表达蛋白带。Westernblot分析表明,表达产物具有很好的特异性。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 长春分离株 结构蛋白 (vp2-vp3) 原核表达 基因表达
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A型口蹄疫病毒VP3基因的克隆及原核表达 被引量:1
13
作者 刘航 杨晓燕 +3 位作者 刘明 赵海波 郭华花 田永强 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第6期33-35,共3页
从实验室冻存的含A型口蹄疫病毒的细胞中提取FMDV总RNA,通过RT-PCR获得cDNA。并根据FM-DV全基因组序列设计了1对针对VP3基因的引物,通过PCR扩增得到目的基因VP3并亚克隆入pMD 18-T载体。将鉴定出的阳性质粒和表达载体PET32a用BamHⅠ、H... 从实验室冻存的含A型口蹄疫病毒的细胞中提取FMDV总RNA,通过RT-PCR获得cDNA。并根据FM-DV全基因组序列设计了1对针对VP3基因的引物,通过PCR扩增得到目的基因VP3并亚克隆入pMD 18-T载体。将鉴定出的阳性质粒和表达载体PET32a用BamHⅠ、HindⅢ双酶切回收后连接,获得阳性重组质粒PET32-VP3。用IPTG诱导重组质粒表达目的蛋白VP3,并用SDS-PAGE进行检测,表达产物用镍亲和树脂进行纯化。结果证明口蹄疫病毒VP3蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达且表达产物得到了纯化,为实验室进一步研究提供了重要的材料。 展开更多
关键词 A型口蹄疫病毒 vp3基因 克隆 原核表达
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鸡贫血病毒VP3基因的原核克隆表达
14
作者 齐欣 杨兵 赵玉军 《饲料工业》 2006年第9期51-53,共3页
关键词 鸡贫血病毒 vp3基因 克隆表达 原核 鸡传染性贫血 virus 澳大利亚 黑龙江省 CAV 分离
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番鸭细小病毒VP3基因的原核表达及多克隆抗体的制备 被引量:1
15
作者 吴萌 成大荣 +3 位作者 朱善元 吴海涛 左伟勇 王安平 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第6期1383-1386,共4页
为获得针对番鸭细小病毒VP3蛋白的多克隆抗体,根据已发表的该病毒基因序列设计一对引物,利用PCR扩增出VP3基因,将其克隆到原核表达载体p ET-32a,转化感受态细胞BL21(DE3)。经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测重组蛋白。将重组蛋白切胶免疫BALB/... 为获得针对番鸭细小病毒VP3蛋白的多克隆抗体,根据已发表的该病毒基因序列设计一对引物,利用PCR扩增出VP3基因,将其克隆到原核表达载体p ET-32a,转化感受态细胞BL21(DE3)。经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测重组蛋白。将重组蛋白切胶免疫BALB/c小鼠,制备抗番鸭细小病毒部分结构蛋白的多克隆抗体。结果显示成功获得VP3基因,构建的原核表达重组质粒成功表达预期的重组蛋白,免疫小鼠获得的多克隆抗体能与番鸭细小病毒及VP3蛋白反应。表明制备的多克隆抗体可用于MDPV的检测,并为进一步研究MDPV奠定了基础。 展开更多
关键词 番鸭细小病毒 vp3基因 原核表达 多克隆抗体
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鸭1型甲肝病毒亚型VP3基因的克隆与原核表达
16
作者 黄剑梅 傅秋玲 +7 位作者 傅光华 万春和 陈翠腾 陈珍 程龙飞 施少华 陈红梅 黄瑜 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2015年第5期425-429,共5页
参照鸭1型甲肝病毒亚型(DHAV-1a)的基因组序列设计了1对VP3基因特异性扩增引物,通过RT-PCR方法扩增获得了DHAV-1a结构蛋白VP3基因,将纯化的VP3基因与pEASYTM-Blunt Zero Cloning Vector连接,构建DHAV-1aVP3基因克隆重组质粒,然后将VP3... 参照鸭1型甲肝病毒亚型(DHAV-1a)的基因组序列设计了1对VP3基因特异性扩增引物,通过RT-PCR方法扩增获得了DHAV-1a结构蛋白VP3基因,将纯化的VP3基因与pEASYTM-Blunt Zero Cloning Vector连接,构建DHAV-1aVP3基因克隆重组质粒,然后将VP3基因片段插入pET-32a(+)表达载体,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞。以1.0mmol·L-1 IPTG于37℃诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot分析表明VP3基因于大肠杆菌中成功表达,其分子量为47kDa,且表达的VP3蛋白能够与Anti-His Mouse mAb发生特异性反应,具有良好的生物活性,为进一步研究DHAV-1aVP3蛋白功能和以VP3蛋白为抗原研制DHAV-1a诊断试剂盒奠定基础。 展开更多
关键词 鸭1型甲肝病毒亚型 vp3基因 克隆 原核表达
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鸭肝炎病毒Ⅰ型VP35'端截短基因的原核表达
17
作者 张继玲 朱善元 +4 位作者 王安平 刘俊 王岑 左为勇 洪伟明 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第3期688-690,共3页
鸭病毒性肝炎( Duck viral hepatitit,DVH)是一种由鸭肝炎病毒( Duck hepatitis virus,DHV)感染导致的急性和高度致死性传染病,可引起21日龄以下的雏鸭发生急性肝炎,有的可能腹泻,病死率高达100%,是严重危害养鸭业的疫病之一。 DHV... 鸭病毒性肝炎( Duck viral hepatitit,DVH)是一种由鸭肝炎病毒( Duck hepatitis virus,DHV)感染导致的急性和高度致死性传染病,可引起21日龄以下的雏鸭发生急性肝炎,有的可能腹泻,病死率高达100%,是严重危害养鸭业的疫病之一。 DHV 主要包括3个血清型,即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型。3个血清型有明显的差异,无交叉免疫性。目前中国发生和流行的主要是Ⅰ型鸭肝炎病毒( DHV-Ⅰ)[1]。该病毒属于小 RNA病毒科,为无囊膜的单股正链RNA病毒[2-3],其基因组大小约为7690 nt,具有1个开放阅读框,编码2249个氨基酸的聚合蛋白质。该聚合蛋白质经蛋白酶水解可产生11种蛋白质,即 VP0、VP1、VP3、2A1、2A2、2B、2C、3A、3B、3C、3D[4];其中 VP3蛋白质位于衣壳表面,是 DHV 重要的结构蛋白质之一。DHV-1和人肠道病毒( Human parechovirus,HPeV)同属于小RNA病毒科,其中HPeV VP3蛋白质的N-末端约20个氨基酸的区域具有很强的免疫原性[5],有文献报道 DHV-ⅠVP3蛋白质在该区域有较高的表面可及性、亲水性值和抗原指数,同样具有较强的免疫原性[6]。 展开更多
关键词 Ⅰ型鸭肝炎病毒 vp3基因 截短 原核表达 DUCK HEPATITIS VIRUS typeⅠ
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传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白的原核表达及抗原性分析 被引量:7
18
作者 赵丽丽 刘敏 +5 位作者 哈卓 刘巍巍 赵永欣 葛俊伟 乔薪瑗 李一经 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期604-610,共7页
应用RT-PCR方法扩增了IPNV编码内衣壳VP3蛋白的基因615bp,将VP3基因克隆至原核表达载体pET30b,并在大肠杆菌BL21中得到了表达。通过SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到了预期大小约30ku的VP3蛋白,与理论值相符,经薄层扫描分析表明目的... 应用RT-PCR方法扩增了IPNV编码内衣壳VP3蛋白的基因615bp,将VP3基因克隆至原核表达载体pET30b,并在大肠杆菌BL21中得到了表达。通过SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到了预期大小约30ku的VP3蛋白,与理论值相符,经薄层扫描分析表明目的蛋白表达量可占菌体总蛋白的30%。用镍离子亲和层析柱纯化可溶性的VP3蛋白,并制备抗血清。Western-blotting结果显示,VP3蛋白可被兔抗IPNV阳性血清识别;间接ELISA结果显示,IPNV细胞培养物作为抗原,兔抗VP3蛋白高免血清稀释度为1∶25600时,P/N>2,抗血清可与IPNV全病毒发生反应,以上两项结果说明,表达的VP3蛋白与天然的IPNVVP3蛋白一样具有相同的抗原性。试验利用原核表达系统成功地高效表达了IPNVVP3蛋白,融合蛋白以可溶性形式存在,并制备了高效价的抗血清。 展开更多
关键词 传染性胰腺坏死病毒 vp3基因 原核表达 抗血清
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鹅细小病毒VP1与VP3非重叠序列的克隆与原核表达 被引量:9
19
作者 布日额 王君伟 +3 位作者 吴金花 李勐 马广鹏 Ulrich Neumann 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2003年第10期3-6,共4页
根据鹅细小病毒 GPV H1株基因组核苷酸序列设计了一对引物 ,对其结构蛋白 VP1与 VP3非重叠核苷酸序列进行 PCR扩增 ,并克隆到表达性载体 p GEX- 6 p- 1,经酶切鉴定筛选出阳性克隆 ,并转化到大肠杆菌 BL 2 1(ED3) plys S进行原核表达 ,并... 根据鹅细小病毒 GPV H1株基因组核苷酸序列设计了一对引物 ,对其结构蛋白 VP1与 VP3非重叠核苷酸序列进行 PCR扩增 ,并克隆到表达性载体 p GEX- 6 p- 1,经酶切鉴定筛选出阳性克隆 ,并转化到大肠杆菌 BL 2 1(ED3) plys S进行原核表达 ,并用 SDS- PAGE鉴定 ,结果表明融合蛋白在表达性细菌 BL2 1中重获得了高效表达。 展开更多
关键词 细小病毒 vp1 vp3 非重叠序列 克隆 原核表达 基因 核苷酸 结构蛋白 大肠杆菌
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鹅细小病毒SS/10株VP3蛋白的原核表达及鉴定 被引量:3
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作者 胡自立 刘海玲 +3 位作者 张光明 张凯 高瑞娟 罗开健 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第5期35-38,共4页
根据GenBank收录的鹅细小病毒(GPV)基因序列,设计并合成了一对VP3基因扩增引物。采用PCR技术对SS/10株的VP3基因进行扩增,将目的基因和原核表达载体PET-32a分别经HindⅢ和BamHⅠ双酶切后进行连接,获得重组质粒PET-32a-VP3,并将其转化表... 根据GenBank收录的鹅细小病毒(GPV)基因序列,设计并合成了一对VP3基因扩增引物。采用PCR技术对SS/10株的VP3基因进行扩增,将目的基因和原核表达载体PET-32a分别经HindⅢ和BamHⅠ双酶切后进行连接,获得重组质粒PET-32a-VP3,并将其转化表达菌BL21(DE3)pLysS。经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,结果获得了72ku左右的融合蛋白,大部分以包涵体的形式存在于菌体中。Wesern blot结果表明,该蛋白能与GPV阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 vp3基因 原核表达
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