蛋白激酶A通过磷酸化埃博拉病毒VP35调控病毒复制

埃博拉病毒病(Ebola virus disease,EVD)是由埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)感染所引起的急性出血性伴多脏器损害的烈性传染病。VP35蛋白是EBOV RNA合成必需的聚合酶辅助因子,并可通过阻断干扰素途径抑制机体先天性免疫,其磷酸化可以促进病毒复制。我们前期研究发现EBOV VP35与A激酶相互作用蛋白1(A⁃kinase interacting protein 1,AKIP1)相互作用并激活蛋白激酶A(Protein kinase A,PKA),但PKA是否可磷酸化VP35,从而调控EBOV复制尚不清楚。本研究发现,PKA激活剂Forskolin(FSK)及8⁃Bromo⁃cAMP促进VP35丝氨酸磷酸化,而PKA抑制剂H89及蛋白激酶抑制剂肽(Protein kinase inhibitor peptide,PKI)抑制VP35磷酸化。通过质谱分析鉴定出VP35存在多个磷酸化位点,VP35 S187A突变后,VP35磷酸化显著减弱,且PKA激活剂FSK和8⁃Bromo⁃cAMP不能促进VP35 S187A的磷酸化,提示S187是PKA介导VP35磷酸化的主要位点。接着,利用可模拟病毒生命周期的EBOV trVLP系统研究了VP35磷酸化对病毒复制的影响,发现携带VP35 S187A突变的EBOV trVLP在细胞中的复制降低17倍,而H89和PKI处理并不能进一步抑制EBOV trVLP的增殖。这些结果表明,PKA通过介导VP35 S187位的磷酸化,促进EBOV trVLP的复制。此外,VP35 S187不影响VP35拮抗干扰素β产生的功能。本研究发现PKA通过磷酸化VP35 S187调控EBOV的复制,提示PKA抑制剂可以用于拮抗EBOV的增殖,进而为EVD的治疗提供新思路。