Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒VP4、VP35蛋白多克隆抗体制备及其免疫原性分析

为建立针对Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV)的血清学检测方法,分别构建了GCRV JX02株外衣壳蛋白VP4、VP35的原核重组表达质粒PGEX-4T-3-S6、PGEX-4T-3-S11,用纯化的重组蛋白r VP4、r VP35分别免疫小鼠制得相应的多克隆抗体,用间接ELISA方法测定2种抗体的效价,用Western Blot鉴定抗体的特异性。SDS-PAGE分析细菌表达的r VP4、r VP35大小分别约为98ku和61ku,且都主要以包涵体的形式存在;间接ELISA方法测定制备的抗体效价分别约为1:4×105和1:106;Western Blot结果显示,制备的2种多克隆抗体都既能够识别原核表达的重组蛋白,又能够识别JX02毒株上的对应蛋白,并且发现感染JX02的草鱼血清中存在结合VP4、VP35的相应抗体。本研究制备的2种多克隆抗体都具有良好的生物学特性,并且这2种重组蛋白作为相应抗体捕获原可以用于通过检测抗病毒抗体来确诊草鱼是否感染Ⅱ型GCRV。本研究将为GCRV主要流行株血清学检测方法的建立以及VP4、VP35蛋白相关功能研究奠定基础。

囊泡分拣蛋白35(vps35)通过EMT影响结肠癌转移

目的研究vps35是否通过调节结肠癌上皮间质化影响结肠癌转移。方法使用GEO2R软件分析TCGA(The Cancer Genome atlas)数据库中275例结肠癌(COAD)样本和349例癌旁样本测序结果,选取经TNM分期系统确定为stageⅠ、stageⅡ、stageⅢ、stageⅣ期的组织标本(n=4)为研究对象,以4例正常结肠组织为对照,利用免疫组化技术分析vps35在结肠癌中样本中的表达情况以及与分期的关系;选取20对结肠癌和癌旁组织,提取总RNA,并利用PCR技术分析vps35在上述样本中的表达水平;使用细胞转染、免疫荧光技术分析HT29细胞中vps35与上皮间质化关键蛋白E-cadherin、vimentin的关系,利用RNA干涉、侵袭实验验证vps35对HT29细胞侵袭能力的影响。结果vps35在结肠癌组织中呈高表达并与病理分期呈正相关;沉默vps35可抑制结肠癌细胞EMT,敲减vps35可抑制HT29细胞的侵袭,敲减vps35后,细胞膜上的E-cadherin表达增多、vimentin表达下调。结论vps35是结肠癌转移的关键分子,或能成为结肠癌的治疗新靶点。