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利用噬菌体展示技术筛选草鱼呼肠孤病毒VP39蛋白相互作用多肽 被引量:1
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作者 龙晨 徐宁 +1 位作者 谢雅晴 吕利群 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期859-865,共7页
VP39是草鱼呼肠孤Ⅲ型病毒(GCRV GenotypeⅢ,GCRV-Ⅲ)S9基因编码的蛋白,为研究VP39蛋白在GCRV-Ⅲ感染草鱼细胞过程中行使的生物学功能,将克隆VP39基因序列并构建原核表达载体pET32a-VP39,通过原核表达得到VP39-HIS融合蛋白;利用VP39蛋... VP39是草鱼呼肠孤Ⅲ型病毒(GCRV GenotypeⅢ,GCRV-Ⅲ)S9基因编码的蛋白,为研究VP39蛋白在GCRV-Ⅲ感染草鱼细胞过程中行使的生物学功能,将克隆VP39基因序列并构建原核表达载体pET32a-VP39,通过原核表达得到VP39-HIS融合蛋白;利用VP39蛋白溶液免疫小鼠,制备鼠抗VP39多克隆抗体,通过Western Blot对抗体进行评估;利用制备的多克隆抗体探究GCRV-Ⅲ感染细胞过程中VP39蛋白表达动力学;利用噬菌体展示技术筛选与VP39蛋白特异性结合的多肽序列并进行分析。SDS-PAGE电泳结果显示,VP39-HIS融合蛋白可良好溶于PBS中,蛋白大小约为39 kD;Western Blot检测表明实验所制备的VP39多克隆抗体在1﹕10000稀释比例下,既能识别原核表达的VP39-HIS融合蛋白,也能识别GCRV-Ⅲ感染CIK细胞后表达的VP39蛋白,具有良好的效价与特异性;在病毒侵染过程中,VP39前期表达量较少,在中后期大量表达;噬菌体展示技术筛选出两条多肽与VP39蛋白有高度亲和性,经过在NCBI上比对后发现草鱼基因组中有7个基因与筛出的多肽具有同源性,表明其可能与VP39存在相互作用。研究制备了鼠抗VP39多克隆抗体,为GCRV-Ⅲ的免疫学检测方法提供了新的路径;结合多肽的筛选也为VP39在GCRV-Ⅲ侵染过程中参与的生物学功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 Ⅲ型草鱼呼肠孤病毒 vp39蛋白 多克隆抗体 噬菌体展示技术
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斜纹夜蛾核多角体病毒VP39-GST融合蛋白原核表达 被引量:2
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作者 李赛男 李朝飞 +2 位作者 潘丽晶 吴文碧 庞义 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期16-19,共4页
用PCR的方法扩增得到斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodopteralituramulticapsidnucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)vp39全长基因。将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1上,构建重组表达质粒pGEX-4T-vp39,转化Escherichia.coliBL21(DE3),在1mmol/L异... 用PCR的方法扩增得到斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodopteralituramulticapsidnucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)vp39全长基因。将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1上,构建重组表达质粒pGEX-4T-vp39,转化Escherichia.coliBL21(DE3),在1mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下超量表达了与理论预测值相符的一个约60kDa的VP39-GST融合蛋白。VP39-GST融合蛋白的成功表达为进一步研究VP39在病毒侵染过程中与宿主细胞成分或病毒粒子蛋白间的相互作用奠定了基础。 展开更多
关键词 斜纹夜蛾核多角体病毒 vp39 融合蛋白 原核表达
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甜菜夜蛾核型多角体病毒vp39基因重组真核表达质粒的构建及鉴定 被引量:1
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作者 段媛媛 杨成丽 +4 位作者 周建刚 范文韬 彭建新 江月 刘德立 《华中师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期345-347,352,共4页
利用DNA重组技术 ,将杆状病毒极早期基因ie1启动子基因克隆至重组质粒pGEM Se39中 ,成功地构建了重组真核表达质粒pGEM IE1 Se39.
关键词 甜菜夜蛾 核型多角体病毒 vp39 基因重组 真核表达质粒 iel启动子 核衣壳蛋白基因 基因克隆 pGEM-IE1-Se39
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核衣壳蛋白VP39结构分析与杆状病毒的进化研究 被引量:1
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作者 刘德立 江月 +2 位作者 范文韬 杨成丽 齐义鹏 《华中师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期376-381,共6页
在测定了BmNPV-Ch(中国株)和HaMNPVvp39基因序列的基础上,推导出相应的氨基酸顺序.并与AcMNPV、OpMNPV、LdMNPV、BmNPV-Ja(日本株)的VP39蛋白的氨基酸顺序进行了比较.分析结果表明:在已知的各种杆状病毒中,VP39蛋白是一个保守性较强的... 在测定了BmNPV-Ch(中国株)和HaMNPVvp39基因序列的基础上,推导出相应的氨基酸顺序.并与AcMNPV、OpMNPV、LdMNPV、BmNPV-Ja(日本株)的VP39蛋白的氨基酸顺序进行了比较.分析结果表明:在已知的各种杆状病毒中,VP39蛋白是一个保守性较强的蛋白质.Bm-NPV-ChVP39蛋白与AcMNPV、OpMNPV、LdMNPV、BmNPV-Ja和HaMNPVVP39蛋白的氨基酸同源性分别是93.7%、58.2%、39.9%、97.1%、92.8%.HaMNPVVP39蛋白与AcMNPV、OpMNPV、LdMNPV、BmNPV-Ja和BmNPV-ChVP39蛋白的氨基酸同源性分别为97.3%、59.0%、40.2%、93.1%、92.8%.通过氨基酸亲水性分析比较,探讨了VP39蛋白结构与杆状病毒进化间的关系. 展开更多
关键词 核衣壳蛋白vp39 结构分析 杆状病毒 分子进化
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酵母双杂交系统用于WSSV结构蛋白VP39相互作用的宿主蛋白基因的初步研究 被引量:2
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作者 王维新 黄健 高天翔 《海洋湖沼通报》 CSCD 北大核心 2010年第2期11-16,共6页
为研究WSSV的结构蛋白VP39相关蛋白的基因,应用酵母双杂交系统筛选中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)鳃细胞全长cDNA文库。将构建好的VP39基因的重组载体pGBKT7-VP39转化酵母Y187后,与含文库质粒的酵母株AH109融合,在营养缺陷培养... 为研究WSSV的结构蛋白VP39相关蛋白的基因,应用酵母双杂交系统筛选中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)鳃细胞全长cDNA文库。将构建好的VP39基因的重组载体pGBKT7-VP39转化酵母Y187后,与含文库质粒的酵母株AH109融合,在营养缺陷培养基上进行反复筛选,得到1个阳性克隆,测序并进行生物信息学分析。结果显示,此cDNA片段在数据库中是新序列,该蛋白在WSSV识别并结合宿主的过程中所起的作用还有待于进一步研究。本实验成功筛选了VP39相关蛋白的cDNA片段,为进一步研究WSSV的致病机理奠定了基础。 展开更多
关键词 酵母双杂交 WSSV vp39
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WSSV囊膜蛋白vp37和vp39基因酵母双杂交诱饵载体的构建及其激活作用检测 被引量:1
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作者 王维新 黄倢 高天翔 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期552-555,共4页
关键词 WSSV VP37 vp39 酵母双杂交 载体 激活作用
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杆状病毒AcMNPV vp39基因的克隆、表达与抗体制备 被引量:1
7
作者 李玲玲 李朝飞 +1 位作者 陈维春 庞义 《生物技术》 CAS CSCD 2007年第3期5-7,共3页
目的:构建苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica nucleopolyhedro virus,AcMNPV)VP39的原核表达载体,表达、纯化蛋白并制备多克隆抗体。方法:用PCR方法扩增vp39基因,并将其克隆至pET-21a(+)上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进... 目的:构建苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica nucleopolyhedro virus,AcMNPV)VP39的原核表达载体,表达、纯化蛋白并制备多克隆抗体。方法:用PCR方法扩增vp39基因,并将其克隆至pET-21a(+)上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,采用割胶回收的方法纯化融合蛋白,纯化的融合蛋白作为抗原,免疫新西兰大白兔,Western blot检测抗体活性。结果:构建了pET-VP39原核表达质粒,含有该质粒的大肠杆菌经IPTG诱导超量表达了一个与预期理论值相符的约为40kDa的融合蛋白。对制备的抗体进行免疫印迹分析表明该抗血清能与感染苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒的细胞蛋白样品发生特异性反应。结论:获得了兔抗AcMNPV-VP39多克隆抗体,为进一步深入研究VP39在病毒侵染过程中与宿主因子的相互作用提供了检测工具。 展开更多
关键词 苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 vp39基因 原核表达 抗体
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WSSV-VP39基因克隆与结构分析 被引量:1
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作者 刘庆慧 韩文君 +1 位作者 杨冰 黄倢 《海洋水产研究》 CSCD 北大核心 2007年第5期36-41,共6页
根据已公布的WSSV-VP39全基因序列(GenBank No.AAL89161)设计1对引物,经PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳分析,扩增出约898bp的特异条带,将其回收后克隆入pGAPZα-A载体中,并进行序列测定与分析。结果表明,扩增序列与Gene Bank登录序列(GenBank ... 根据已公布的WSSV-VP39全基因序列(GenBank No.AAL89161)设计1对引物,经PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳分析,扩增出约898bp的特异条带,将其回收后克隆入pGAPZα-A载体中,并进行序列测定与分析。结果表明,扩增序列与Gene Bank登录序列(GenBank No.AAl89161)核苷酸同源性100%。序列分析表明,WSSV-VP39基因编码蛋白无跨膜区域,有多个蛋白激酶C、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和酪氨酸硫酸化位点,1个糖基化位点。蛋白序列比对结果表明,WSSV-VP39与WSSV-VP37具有较高的同源性,其在WSSV侵染中的作用值得关注。 展开更多
关键词 WSSV-vp39 基因 克隆 序列分析
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甜菜夜蛾核多角体病毒VP39蛋白在苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒中的功能研究 被引量:1
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作者 李赛男 吕怡娜 +3 位作者 姜焕焕 黄麟淇 区炳明 刘文华 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1440-1449,共10页
【目的】构建表达甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua multiple nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)VP39蛋白的vp39假型苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica MNPV,AcMNPV),明确SeMNPV VP39是否能取代AcMNPV VP39在AcMNPV... 【目的】构建表达甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua multiple nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)VP39蛋白的vp39假型苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica MNPV,AcMNPV),明确SeMNPV VP39是否能取代AcMNPV VP39在AcMNPV中行使功能,为深入探究杆状病毒的核衣壳装配机理打下理论基础。【方法】利用Bac-to-Bac杆状病毒表达载体系统在AcMNPV vp39缺失型重组bacmid(bAcvp39KO)的基础上构建携带SeMNPV vp39基因、绿色荧光蛋白基因(Enhanced green fluorescence protein,egfp)和多角体蛋白基因(Polyhedrin,polh)的重组病毒(vAcSevp39:FLAG)。利用Western blotting检测分析SeMNPV vp39在vAcSevp39:FLAG转染的草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)IPLB-Sf21-AE clonal isolate 9(Sf9)细胞中的表达情况,通过荧光显微镜观察vAcSevp39:FLAG在Sf9中的感染和扩散情况,采用病毒滴度测定并绘制病毒生长曲线检测vAcSevp39:FLAG的感染性芽生型病毒粒子产量,并以电子显微镜观察vAcSevp39:FLAG转染的Sf9细胞中的形态发生情况。【结果】Western blotting检测结果表明,SeMNPV VP39能在vAcSevp39:FLAG转染的Sf9细胞中获得表达;荧光显微镜观察和病毒生长曲线测定结果表明,在vAcSevp39:FLAG转染的Sf9细胞中无感染性的芽生型病毒粒子产生,与AcMNPV vp39缺失型重组病毒(vAcvp39KO)的现象一致;电子显微镜观察发现,与vAcvp39KO不同的是,在vAcSevp39:FLAG转染的细胞中虽然未产生核衣壳,但在感染细胞的核中存在大量空的透明长管状衣壳结构,表明SeMNPV VP39能挽救vAcvp39KO的衣壳结构装配,但在AcMNPV中不具备装配核衣壳的能力。【结论】SeMNPV VP39在AcMNPV中虽能形成衣壳结构,但不能有效装配核衣壳,导致无芽生型病毒粒子和包埋型病毒粒子产生。 展开更多
关键词 苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 vp39 甜菜夜蛾核多角体病毒 芽生型病毒粒子 核衣壳装配
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家蚕细胞中过表达家蚕核型多角体病毒核衣壳蛋白VP39抑制BmNPV的增殖 被引量:2
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作者 胡楠 董战旗 +1 位作者 陈婷婷 潘敏慧 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1222-1228,共7页
【目的】家蚕Bombyx mori核型多角体病毒(Bm NPV)核衣壳蛋白VP39为病毒装配所必需。本研究旨在初探VP39在病毒侵染家蚕细胞过程中的功能及特征,以期为家蚕抗病毒研究提供研究基础。【方法】本研究通过构建原核表达载体,诱导原核表达得... 【目的】家蚕Bombyx mori核型多角体病毒(Bm NPV)核衣壳蛋白VP39为病毒装配所必需。本研究旨在初探VP39在病毒侵染家蚕细胞过程中的功能及特征,以期为家蚕抗病毒研究提供研究基础。【方法】本研究通过构建原核表达载体,诱导原核表达得到多克隆抗体,以Western blot验证VP39表达时相;构建真核表达载体,转染细胞后以免疫荧光手段观测VP39表达定位及影响病毒增殖现象。【结果】制备了VP39多克隆抗体。VP39在病毒感染后大量定位于家蚕细胞核,部分定位于胞质,而过表达的VP39定位于家蚕细胞胞质;过表达VP39后抑制Bm NPV感染家蚕细胞。【结论】在Bm N-SWU1细胞中过表达VP39会影响Bm NPV的扩散,导致Bm NPV感染细胞数目大量减少。该结果为VP39调控宿主与病毒的相互作用提供了新的思路。 展开更多
关键词 家蚕 核型多角体病毒 vp39 抗病毒 病毒增殖 亚细胞定位
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甜菜夜蛾多核壳型核型多角体病毒vp39基因的克隆与表达(英文) 被引量:1
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作者 段媛媛 杨成丽 +1 位作者 刘德立 范文韬 《华中师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期214-218,共5页
参照苜宿银纹夜蛾核型多角体病毒 ( Ac MNPV)衣壳蛋白基因 vp3 9的序列设计引物 ,采用PCR技术扩增了甜菜夜蛾核型多角体病毒的约 1 .3 kb片段。通过将该片段亚克隆至原核表达载体p ET-2 8构建出重组表达质粒 p ET-Se3 9.以 p ET-Se3 9转... 参照苜宿银纹夜蛾核型多角体病毒 ( Ac MNPV)衣壳蛋白基因 vp3 9的序列设计引物 ,采用PCR技术扩增了甜菜夜蛾核型多角体病毒的约 1 .3 kb片段。通过将该片段亚克隆至原核表达载体p ET-2 8构建出重组表达质粒 p ET-Se3 9.以 p ET-Se3 9转化 E.coli BL2 1 .经 IPTG诱导后 ,Se MNPVvp3 9基因高效表达 .SDS-PAGE分析显示表达产物的分子量为 3 9KD,并且表达量在 IPTG诱导 4 h达到最高水平 . 展开更多
关键词 核衣壳蛋白基因 基因克隆 基因表达 SeMNPV 甜菜夜蛾多核壳型核型多角体病毒 表质载体
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家蚕核型多角体病毒中国株和日本株vp39基因的比较研究 被引量:6
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作者 齐义鹏 刘德立 孙晓洁 《中国病毒学》 CSCD 2000年第1期52-58,共7页
以苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒 (AcNPV)的核衣壳蛋白基因vp39设计引物 ,用PCR技术扩增了家蚕核型多角体病毒中国株 (BmNPV Ch)~ 1.3kb片段 ,并测定了其全序列长 12 30bp。推导的氨基酸 351个 ,其与BmNPV日本株 (BmNPV Ja)vp39基因核苷... 以苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒 (AcNPV)的核衣壳蛋白基因vp39设计引物 ,用PCR技术扩增了家蚕核型多角体病毒中国株 (BmNPV Ch)~ 1.3kb片段 ,并测定了其全序列长 12 30bp。推导的氨基酸 351个 ,其与BmNPV日本株 (BmNPV Ja)vp39基因核苷酸序列同源性达 97.5% ,氨基酸同源性达 97.1%。该片段在E .coliBL2 1中诱导表达能产生分子量约为 38kD的特征性蛋白带 ,证明所扩增片段为BmNPV Ch的vp39基因。经与BmNPV Ja比较 ,其 6 2 5位有 3个核苷酸(CGA) ,985~ 910位有 6个核苷酸 (GTCGGC)的插入 ,未造成码组移动。有 17处点突变 ,但取代突变 (replacementmutation)仅 7处 ,对两株病毒VP39蛋白的亲疏水性和酸碱性质未产生显著影响。由于点突变带来氨基酸改变 ,使BmNPV Ch的vp39蛋白的α 螺旋由 13.2 %增加到 15.4 % ,无规卷曲由 7.2 %减少到 5.8% ,β 折叠和β 转角维持不变 ,约为 79.6 % ,仍保持以β 折叠为主要二级结构单元的片层状折叠结构。 展开更多
关键词 核衣壳蛋白基因 家蚕 核型多角体病毒 点突变
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Cloning and Expression of the vp39 Gene of Bombyx mori Nuclear Polyhedrosis Virus in E.coli 被引量:1
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作者 Liu Dell, Sun Xiaojie, Qi Yipeng, Zhu Ying, Jin Tianquan(Institute of Virology, Wuhan University,Wuhan 430072, China) 《Wuhan University Journal of Natural Sciences》 EI CAS 1998年第1期108-112,共5页
The nuclear capsid protein gene (vp39) ofBombyx mori nuclear polyhedrosis virus (BmNPV) was amplified successfully by PCR technique and inserted into pGEM 3zf(+). The 5′ and 3′ terminal area of the amplified vp39 ge... The nuclear capsid protein gene (vp39) ofBombyx mori nuclear polyhedrosis virus (BmNPV) was amplified successfully by PCR technique and inserted into pGEM 3zf(+). The 5′ and 3′ terminal area of the amplified vp39 gene were sequenced with silver-staining dideoxy method. Bmvp39 gene was sub-cloned into the expression vector pRSET-A, and transformed intoE. coli BL21. This gene was highly expressed by IPTG induction. SDS-PAGE analysis showed that the expressed protein is about 38 kd, and the expressed amount reached maxium in 4 h with IPTG induction. 展开更多
关键词 nuclear capsid protein gene (vp39) PCR amplification gene cloning expression BMNPV
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用酵母双杂交系统发现HaNPV衣壳蛋白与棉铃虫肌动蛋白间的相互作用 被引量:3
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作者 吕颂雅 齐义鹏 葛国琼 《武汉大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期725-731,共7页
成功的构建了棉铃虫细胞 (Hz- AM1)的 c DNA文库 (Ha- c DNA) ,然后以棉铃虫核型多角体病毒衣壳蛋白 VP39(Ha NPV- VP39)作为诱饵蛋白 ,通过酵母双杂交系统 (yeast two- hybrid system ) ,在棉铃虫细胞 c DNA文库中钓到了 VP39的相互作... 成功的构建了棉铃虫细胞 (Hz- AM1)的 c DNA文库 (Ha- c DNA) ,然后以棉铃虫核型多角体病毒衣壳蛋白 VP39(Ha NPV- VP39)作为诱饵蛋白 ,通过酵母双杂交系统 (yeast two- hybrid system ) ,在棉铃虫细胞 c DNA文库中钓到了 VP39的相互作用因子基因 .通过 DNA测序和氨基酸序列分析表明 ,该基因为棉铃虫的肌动蛋白(actin)基因 .本实验从一个侧面反映了 VP39蛋白与棉铃虫肌动蛋白间的相互作用 . 展开更多
关键词 HaNPV衣壳蛋白vp39 肌动蛋白 酵母双杂交系统 棉铃虫 cDNA文库 蛋白质相互作用
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不同来源家蚕核型多角体病毒的致病力及其vp 39基因的遗传进化分析
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作者 王霞 王平阳 +4 位作者 崔秋英 蒋满贵 张雨丽 黄旭华 宋宪军 《蚕学通讯》 2023年第1期36-40,共5页
家蚕核型多角体病毒(BmNPV)是养蚕生产中的主要病原微生物之一。收集广西壮族自治区9个蚕区的BmNPV分离株,纯化后分别给家蚕品种两广二号的2龄起蚕添食感染,调查9个BmNPV分离株对2龄起蚕的LC_(50)在1.55×10^(6)~4.19×10^(6)mL... 家蚕核型多角体病毒(BmNPV)是养蚕生产中的主要病原微生物之一。收集广西壮族自治区9个蚕区的BmNPV分离株,纯化后分别给家蚕品种两广二号的2龄起蚕添食感染,调查9个BmNPV分离株对2龄起蚕的LC_(50)在1.55×10^(6)~4.19×10^(6)mL^(-1)之间,各分离株间的致病力差异不显著。选择BmNPV的感染相关基因vp 39设计合成序列引物进行PCR,对各分离株的扩增产物测序并进行遗传进化分析,结果表明不同来源分离株的vp 39基因在进化树上归于一个分支上的几个层次分支,序列间的相似度大部分>98%,相互间的遗传距离也较小,部分<1.0,提示vp 39基因相对比较保守。研究结果为解析家蚕抗病毒机制提供了一些新的参考信息。 展开更多
关键词 家蚕核型多角体病毒 分离株 致病力 vp 39基因 序列同源性
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斜纹夜蛾核多角体病毒(SpltNPV)基因组EcoRI-G片段的序列分析
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作者 李镇 龙綮新 +3 位作者 袁美妗 贺雄雷 庞义 王王旬章 《中国病毒学》 CSCD 2002年第2期119-124,共6页
斜纹夜蛾核多角体病毒 (SpltNPV)基因组EcoRI G片段全长 745 0bp ,包括 7个开放读码框 :vp39、lef 4、cg30、p91、vp33、tlp2 0、AcMNPVORF81同源基因和一个同源区 (hr)。基因组排列比较分析发现 ,这些基因在基因组中的排列 。
关键词 斜纹夜蛾核多角体病毒 基因组EcoRI-G片段 序列分析
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