引起细胞病变的甲肝病毒BJ-1株结构蛋白VP4-VP2基因序列的测定

目的测定我室分离的甲型肝炎病毒(HAV)BJ-1株结构蛋白VP4-VP2基因区的核苷酸序列。方法从BJ-1感染的A549细胞中提取病毒RNA模板,通过RT-PCR扩增相应的cDNA片段,测定其核苷酸序列。结果BJ-1株与野型株MBB比较,VP4-VP2区有4个核苷酸变异,同源性为99.5％(731/735),推论的氨基酸序列有1个氨基酸变异,同源性为99.6％(244/245)。与HM-175比较,有30个核苷酸变异,同源性为95.9％(705/735),推论的氨基酸序列均相同,同源性为100％。结论核苷酸序列分析结果初步确定BJ-1株属甲型肝炎病毒。

2021年南京市手足口病流行特征及柯萨奇A组4型VP1区基因特征分析

目的了解南京市手足口病(HFMD)流行特征,分析柯萨奇病毒A组(CVA)4型基因特征。方法收集2021年来自南京市12个区的监测样本,使用实时荧光定量PCR方法检测肠道病毒并分型,对排除CVA6、16、10型和肠道病毒(EV)71型阳性的其他未分型肠道病毒,用反转录·聚合酶链反应(RT-PCR)的方法扩增VP4-VP2区,双向测序确定基因型,最后巢式扩增CVA4型的VP1区,确定其基因亚型。结果2021年南京市手足口病呈季节性流行,不同月份之间的肠道病毒阳性率差异有统计学意义(χ^(2)=80.06,P<0.05)。易感人群为3~<6岁儿童,该年龄段阳性数占总阳性数的57.05%(178/312)。不同年龄段之间的肠道病毒阳性率差异有统计学意义(χ^(2)=73.70,P<0.05)。地区分布中,肠道病毒阳性率占前三位的依次是玄武区94.74%(18/19)、浦口区94.00%(47/50)和江北新区83.33%(65/78),不同地区肠道病毒阳性率差异有统计学意义(χ^(2)=177.42,P<0.05)。550份标本中,荧光定量PCR法检测肠道病毒阳性312份,主要型别为CVA6型,占总阳性数的83.01%(259/312),其次依次为CVA16型(21份)和CVA10型(5份),未分型肠道病毒27份。经VP4-VP2区测序得到CVA4型6份,对其VP1区扩增测序后获得目的片段。结论南京市2021年手足口病主要型别以CVA6型为主,与其他毒株(CVA16型、CVA4型、CVA10型等)共同循环流行;其中CVA4型毒株均属于C2亚型,未发现新的亚型,需持续监测。

甲型肝炎病毒VP4-VP2在昆虫细胞膜表面的表达

目的:利用杆状病毒表面展示系统将甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)的衣壳蛋白VP4-VP2展示在昆虫细胞膜表面,为甲型肝炎病毒的免疫检测奠定基础。方法:将HAV VP4-VP2基因片段插入杆状病毒膜蛋白基因gp64信号肽序列和水疱口膜炎病毒G蛋白跨膜区基因片段之间得到重组质粒pBac-sp-VP0-VSVtm。利用Bac-to-Bac系统获得含有该融合基因的重组病毒Ac-VP0-VSV。重组病毒感染昆虫Sf9细胞,免疫荧光分析目的蛋白在昆虫细胞的表达。结果:免疫荧光结果显示HAV VP4-VP2蛋白可在Sf9细胞的膜表面大量表达。结论:昆虫细胞膜表面展示系统构建成功,利用该系统HAV VP4-VP2蛋白可在昆虫细胞内表达并被展示到了细胞膜表面。

2021年宁夏回族自治区银川市流感样病例人鼻病毒感染情况及基因分型研究

目的了解2021年宁夏回族自治区银川市流感样病例人鼻病毒(HRV)感染情况及基因型别,为呼吸道感染有关疾病防治及控制提供依据。方法选取2021年1—12月银川市2家国家流感监测哨点医院具有呼吸道感染症状的鼻咽拭子样本,通过实时荧光定量反转录聚合酶链式反应法检测,对筛选的HRV阳性样本VP4/VP2区基因扩增测序,使用Mafft软件进行序列比对,MEGA 11.0软件构建亲缘关系进化树,DNA Star软件分析核苷酸和氨基酸同源性。结果1100份样本中,HRV的总检出率为8.00%(88/1100),其中单一HRV感染阳性率为7.64%(84/1100),合并其他病毒感染阳性率为0.36%(4/1100)。对扩增的57例VP4/VP2基因序列分析,其中A种40例、B种4例、C种13例,涉及28个血清型,A16血清型感染病例最多。HRV-A序列之间的核苷酸(氨基酸)同源性为73.10%~100.00%(78.40%~100.00%),HRV-B为78.50%~98.30%(89.20%~100.00%),HRV-C为68.90%~100.00%(76.10%~100.00%)。结论HRV是引起2021年银川市急性上呼吸道感染患者主要的病毒性病原之一,感染率较高,呈现以HRV-A感染为主,HRV-C次之的多个血清型共流行特点。

柯萨奇病毒A组2型生物化学特性及免疫原性分析

柯萨奇病毒A组2型(Coxsackievirus A2,CV-A2)每年引起的手足口病病例数不断增加,甚至导致死亡病例[1]。因此,急需对CV-A2的生化特性及免疫原性进行分析,顺利研制出CV-A2的手足口病疫苗。通过细菌表达结构蛋白全长或部分片段的GST融合蛋白,纯化CV-A2病毒颗粒;将纯化的病毒颗粒免疫动物后制备兔抗CVA2 VP1-VP4抗体及CV-A2病毒抗血清,通过免疫印染法(Western Blot,WB)、SDS-PAGE电泳法对CsCl密度梯度纯化的CV-A2的空心颗粒(EP)与实心颗粒(FP)的蛋白组分、纯度、多聚蛋白酶剪切进行分析。WB和间接免疫荧光法证明了抗体具有良好的特异性。EP由VP0、VP1、VP3构成,而FP的VP0被剪切,故由VP1-VP4构成。EP和FP比例为33%和67%,密度分别为.29、1.32 g/cm3,纯度分别为94.7%和97.3%。中和试验结果显示,兔抗全病毒抗体具有中和作用,而兔抗CV-A2 VP1-VP4抗体不具有中和作用。本研究建立了CV-A2纯化病毒结构蛋白的分析方法,研究了重组病毒蛋白及病毒颗粒的免疫原性及持久性,对包括CV-A2的手足口病多价疫苗研究质量控制提供数据支持。