P[4]、P[6]和P[8]型轮状病毒VP8*核心区蛋白的表达和纯化

为进一步深入研究我国人群中轮状病毒主要流行的P[4]、P[6]和P[8]型毒株的受体结合特点及结构基础,本研究将P[4]、P[6]和P[8]型毒株VP8*核心区(VP8*core)基因分别构建到原核表达载体pGEX4T-1和pET30a中,利用大肠杆菌表达获得轮状病毒P[4]、P[6]和P[8]型毒株VP8*核心区蛋白,并通过亲和层析分别纯化得到VP8*core-GST融合蛋白和VP8*-his标签蛋白,SDS-PAGE显示蛋白大小分别为46kDa和20kDa。综上,本研究成功构建了pGEX4T-1-VP8*core和pET30a-VP8*core重组质粒,利用原核表达系统得到VP8*coreGST融合蛋白和VP8*core-his蛋白,为VP8*蛋白的功能和结构研究提供基础。

轮状病毒疫苗株VP8＊核心区蛋白的表达和纯化

目的为了研究轮状病毒疫苗株VP8t蛋白的功能和结构特征，利用原核表达系统纯化得到VP8}核心区蛋白（VP8＊core，64．223位氨基酸）。方法从口服疫苗中提取兰州疫苗株LLR病毒核酸，RT—PCR得到目的片段，克隆到pET30a载体中构建重组质粒。根据已合成的Rotateq和RotarixPf8]VP8$全长基因，PCR得到VP8{核心区片段，克隆到pET30a载体构建重组质粒。重组质粒转化大肠埃希菌BL21（DE3）进行蛋白表达。利用Histrap HP和superdex200纯化柱，通过亲和层析和分子筛层析纯化得到目的蛋白。结果VP8s核心区蛋白以可溶形式表达，并通过纯化得到较纯的VP8fcore蛋白，聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS—PAGE）显示相对分子质量约为20kDa。结论成功构建了pET30a—VP8＋core重组质粒，得到轮状病毒各疫苗株VP8score蛋白，为研究疫苗株受体结合特征以及疫苗评价提供了基础和参考。

轮状病毒P[6]基因型毒株LL4260株的VP8＊核心区蛋白的表达和纯化

目的为研究P[6]基因型轮状病毒受体结合特性，利用原核表达纯化得到P[6]基因型轮状病毒LL4260毒株的VP8＊核心区蛋白。方法将P[6]基因型毒株LL4 260株的质粒利用PCR扩增得到核心区基因片段，克隆到pET30a载体中构建重组质粒pET30a-LL4260VP8＊core，重组质粒转化到BL21（DE3）感受态细胞中进行蛋白表达，经亲和层析和分子筛层析纯化表达后得到目的蛋白。结果P[6]基因型轮状病毒LL4260毒株核心区pET30 a-LL4260VP8＊core蛋白为可溶表达，经纯化及电泳鉴定，得到相对分子质量为22×103的目的蛋白。结论本研究构建的P[6]基因型轮状病毒LL4260毒株pET30 a-LL4260VP8＊core重组质粒，表达纯化了相应核心区目的蛋白，为进一步分析蛋白的性能和结构提供基础。