噬菌体展示肽库筛选VPAC1高亲和力结合多肽

目的通过噬菌体展示肽库技术筛选VPAC1高亲和力结合十二肽配体,并进行特异性和亲和力鉴定。方法建立稳定表达VPAC1的真核细胞系;利用噬菌体肽库展示技术进行全细胞差减筛选,随机挑取40个噬菌体克隆进行测序,初步鉴定确定阳性克隆,明确外源十二肽序列,固相合成该十二肽;利用体外竞争结合ELISA及流式细胞分析,鉴定目标多肽与VPAC1受体结合的特异性及亲和力。结果成功构建稳定表达VPAC1细胞系;经过4轮差减筛选,回收噬菌体逐轮得到富集,随机挑取40个克隆测序,共得到15条序列不同的多肽,经ELISA鉴定有7个克隆与细胞有特异性高结合能力;阳性噬菌体克隆与细胞结合通过多肽VP1介导;VP1能特异高亲和地与VPAC1受体结合。结论通过噬菌体展示肽库技术成功筛选得到与VPAC1高亲和力特异结合十二肽。

RNA干扰沉默人乳腺癌细胞VPAC1受体抑制VIP跨位激活EGFR/HER2和VEGF的分泌在乳腺癌治疗中的意义

目的研究RNA干扰沉默人乳腺癌细胞VPAC1受体对VIP跨位激活EGFR/HER2和VEGF的分泌的影响。方法使用小干扰RNA(siRNA)探讨血管活性肠肽(VIP)对人乳腺癌细胞的作用机制。向雌激素依赖的(T47D)和雌激素非依赖的(MDA-MB-468)乳腺癌细胞转染VPAC1受体的siRNA完全消除VIP刺激分泌促进的血管生成因子(血管内皮生长因子,VEGF)的作用,以及跨位激活表皮生长因子受体(EGFR/HER2)。结果 VPAC1受体阻断导致T47D细胞增殖率下降至10%,MDA-MB-468细胞增殖下降至25%;采用ELISA试剂盒测定VPAC1受体沉默对乳腺癌细胞胞外血管内皮生长因子VEGF165分泌的影响,无论有无VIP诱导时,VEGF165分泌均被完全抑制(P<0.05);VIP可以导致HER2/EGFR的跨位激活造成磷酸化,沉默VPAC1受体后,其磷酸化消失(P<0.001);采用酪氨酸激酶抑制剂AG-825和AG-1478(10μmol/L)可以抑制VIP诱导的VEGF分泌活性,敲除VPAC1受体也完全阻断了VIP诱导的VEGF165分泌。结论实验结果阐明了人乳腺癌细胞中VIP-VPAC1受体信号通路机制,同时揭示了采用VPAC1受体拮抗剂联合靶向治疗乳腺癌的潜在用途及采用RNA干扰VPAC1受体分子疗法的潜在意义。

VPAC1激动剂的抗肥胖作用(英文)

VPAC1是垂体腺苷酸环化酶激活多肽(pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide,PACAP)和血管活性肠肽(vasoactive intestinal polypeptide,VIP)的共同受体。VPAC1介导PACAP和VIP抑制食欲和抗炎的生物学功能。本研究体外实验表明,VPAC1在分化成熟的3T3-L1脂肪细胞中表达增高,并且VPAC1激动剂(10～1000nmol/L每1×106cells)可诱导脂肪细胞脂解,因此我们预计VPAC1激动剂具有抗肥胖及肥胖综合征的作用。为研究VAPC1激动剂[Lys15,Arg16,Leu27]-VIP(1-7)GRF(8-27)对营养性肥胖及肥胖综合征的干预作用,本研究又设计了两组体内实验:(1)高脂喂养NIH雄性小鼠4周,同时腹腔注射VPAC1激动剂;以注射生理盐水作为对照;(2)高脂喂养NIH雄性小鼠5周,构建肥胖模型后,再腹腔注射VPAC1激动剂4周,同样以注射生理盐水作为对照。采集摄食、体重、体脂、血糖及血脂等指标。结果显示,VPAC1激动剂显著抑制摄食、抑制高脂饮食诱导的体重及体脂(附睾及背部)重量的增长,并有效改善高脂饮食诱导的高血糖及高血脂,提高机体的糖耐受。高剂量(每天50nmol/kg体重)VPAC1激动剂比低剂量(每天5nmol/kg体重)有更显著的抗肥胖作用,提示VPAC1激动剂的抗肥胖作用具有剂量依赖性。以上结果表明,VPAC1激动剂不仅能抑制高脂诱导的肥胖的发展,而且可有效改善肥胖相关疾病;其抗肥胖作用的机制是复杂整合的,值得进一步深入研究。

痛泻要方对腹泻型肠易激综合征模型大鼠结肠组织血管活性肠肽及受体1表达影响

目的:探讨痛泻要方治疗腹泻型肠易激综合征(D-IBS)模型大鼠的作用机制。方法:采用应激与束缚相结合的方法复制D-IBS模型后,应用免疫组化、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测结肠组织血管活性肠肽(VIP)与其受体1(VPAC1)蛋白和mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组结肠组织VIP与VPAC1蛋白、mRNA表达均上调(P<0.01);与模型组比较,痛泻要方组结肠组织VIP与VPAC1蛋白、mRNA的表达则下调(P<0.01)。结论:痛泻要方治疗D-IBS的作用机制与结肠组织VIP与VPAC1表达下调有关。