Ⅰ群禽腺病毒通用型二温式PCR和VPCR方法的建立及初步应用

为建立快速检测Ⅰ群禽腺病毒(FAdV-I)血清型通用PCR方法,根据FAdV-Ⅰ12个血清型基因保守区设计引物,建立了二温式PCR和VPCR方法。结果显示:本研究建立的FAdV-Ⅰ二温式PCR方法,在90℃~94℃变性3 s、70℃~74℃退火兼延伸8 s,循环35~40次时,最快可在15 min内完成扩增;对分属5个种的5个血清型毒株检测都呈阳性,对EDSV、NDV、沙门菌等12种禽常见病原核酸检测呈阴性;最低检测质粒拷贝数为13.9 copies/μL,最低检测病毒滴度为100.3 EID50/0.1 mL;对源于FAdV-4感染致死SPF鸡的心脏、肝脏、脾脏等14种样品核酸提取物检测均为阳性。建立的VPCR,在92℃变性0 s、70℃退火延伸0 s,40次循环时,可23 min完成,其最低检测质粒拷贝数亦为13.9 copies/μL;对150份采集自安徽省部分地区样品及送检病料的检测与分析显示,所建立的二温式PCR和VPCR总阳性检出均率为30.7%,其符合率为100%。本研究表明,所建立的通用型二温式PCR和VPCR方法,均可用于Ⅰ群FAdV的快速检测与鉴定。

基于超快速VPCR荧光可视化检测技术的小檗皮及其藏成药中原料药的真伪鉴别研究

目的建立藏药小檗皮BerberisCortex及藏成药中小檗皮特异性DNA的超快速荧光可视化检测方法,实现对小檗皮药材及藏成药中小檗皮的快速鉴别。方法将小檗皮及其混淆品的ITS2序列进行比对,筛选出小檗皮药材特异性DNA序列;针对该序列设计小檗皮特异性引物,建立小檗皮药材以及藏成药中小檗皮特异性DNA的超快速VPCR扩增体系;后将该扩增体系与SYBR Green I荧光染料相结合,实现对扩增产物的荧光可视化检测;同时对该体系的特异性、灵敏度以及在真实样本中的适用性进行考察。结果该体系可以在40min内完成对小檗皮以及藏成药中小檗皮特异性DNA的扩增及荧光可视化检测;检测限低至10pg/μL;对16个批次的小檗皮药材进行分析,其中15个批次的样本产生阳性信号鉴定为小檗皮,与测序结果100%一致,1个批次的样本产生阴性信号,该样本经通用引物测序鉴定为黄柏;对3种含有小檗皮的藏成药进行分析,3个样本均产生阳性信号。结论所建方法缩短了检测时间,并且特异性良好,灵敏度高,可以对小檗皮及其藏成药中小檗皮进行快速、准确的可视化鉴别。

Viability PCR在活性微生物检测领域的研究进展

Viability polymerase chain reaction(vPCR)能够有效区分活细胞和死细胞,正在不断地被深入研究,应用领域也不断扩大。然而,vPCR是基于细胞膜完整性开发的,由于细胞存在状态多样性和方法的不足,在准确检测活细胞方面仍有偏差。为提高vPCR检测的准确度,科技工作者进行了大量的研究。为更好地提高vPCR的检测效率和准确度,本文综述了近几年来vPCR在微生物学检测领域的研究进展。

变精度复合粗糙集模型及其应用

针对复合信息系统中的噪声数据以及复合粗糙集近似边界要求严格等问题,对复合粗糙集模型进行了扩展,提出变精度复合粗糙集模型。在该模型中,通过设置阈值参数β(0.5<β≤1),定义了基于矩阵方法的变精度复合粗糙集的β-上近似、β-下近似、β-正区域、β-负区域、β-边界区域、β-精确度和β-粗糙度等概念;同时,对变精度复合粗糙集的相关性质进行了研究。最后,通过实例说明了该模型在信息处理中的应用,进一步说明该模型具有一定的容错性,抗干扰能力增强,应用范围扩大。

终末肾病患者透析充分性的综合评价

目的 应用尿素动力学参数 :时间平均尿素浓度 (TACurea) ,整体尿素清除率 (KT/V) ,蛋白分解代谢率(PCR) ,对 44例终末肾衰患者透析充分性及营养状态进行综合评价。方法 对临床资料进行统计学处理。结果 透析不充分组TACurea、PCR明显低于透析充分组 ,KT/V值两组差异无显著性 ;透析充分时 ,KT/V对PCR影响不大 ,只是透析不充分时 ,KT/V对PCR有重要的影响。结论 发现TACurea和PCR是反映血液透析长期充分与否的重要标志 ,KT/V可直接反映单次透析效果 ,是调整透析方案的最佳指标。在透析不充分的情况下 。