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绵羊VPS26A基因克隆、生物信息学及表达谱分析
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作者 张双双 王丹 +4 位作者 贾琪 陈小辛 刘艺 戢爽 张立春 《中国畜牧杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期270-275,共6页
为获得绵羊液泡蛋白分选26A(Vacuolar Protein Sorting 26A,VPS26A)基因CDS序列,确定其生物学功能,明确其在不同品种不同组织的表达差异,以新吉细毛羊和小尾寒羊为试验动物,以小尾寒羊皮肤组织cDNA为模板通过TA(T's and A's Met... 为获得绵羊液泡蛋白分选26A(Vacuolar Protein Sorting 26A,VPS26A)基因CDS序列,确定其生物学功能,明确其在不同品种不同组织的表达差异,以新吉细毛羊和小尾寒羊为试验动物,以小尾寒羊皮肤组织cDNA为模板通过TA(T's and A's Method)克隆获得CDS区序列,并对序列进行生物信息学分析,预测其可能编码的蛋白质结构和功能;利用实时荧光定量PCR检测VPS26A基因在小尾寒羊和新吉细毛羊不同组织的表达差异。结果显示:VPS26A基因CDS序列全长为981 bp,编码327个氨基酸。绵羊VPS26A氨基酸序列与羚羊相似性最高,同源性为100%,与人的相似性最低,为99.4%;系统进化树结果显示,绵羊VPS26A与山羊和羚羊亲缘关系最近,与人和驴亲缘关系最远。VPS26A蛋白无跨膜结构域和信号肽,存在27个磷酸化位点和2个N-糖基化位点,主要分布在细胞质和核内体上。VPS26A蛋白二级结构预测结果显示,无规则卷曲、延伸链、α螺旋和β转角分别占45.87%、30.28%、18.35%和5.50%,与三级结构预测一致。实时荧光定量PCR结果显示,VPS26A基因在小尾寒羊肺脏中表达量最高,其次是皮肤,而在新吉细毛羊皮肤的表达量均最高,均显著高于其他组织。本研究为进一步阐述VPS26A基因功能奠定了基础。 展开更多
关键词 小尾寒羊 vps26A 生物信息学 表达分析 逆转运复合物
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VPS26基因通过Wnt/β-联蛋白通路促进高脂血症大鼠种植体骨结合的机制研究 被引量:1
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作者 慕宇青 袁孟绮 +3 位作者 袁欣 朱丽娜 郭美画 蓝菁 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期345-353,共9页
目的研究VPS26在高脂环境中对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)成骨、成脂分化作用的机制,探讨VPS26对高脂大鼠种植体骨结合和裸鼠异位成骨的影响。方法普通成骨诱导液(成骨组)和高脂成骨诱导液(高脂组)... 目的研究VPS26在高脂环境中对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)成骨、成脂分化作用的机制,探讨VPS26对高脂大鼠种植体骨结合和裸鼠异位成骨的影响。方法普通成骨诱导液(成骨组)和高脂成骨诱导液(高脂组)培养BMSC,高脂组促进或抑制VPS26的表达,检测成骨和成脂相关基因的表达。细胞诱导第7、14天后行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和油红O染色;成骨组细胞采用免疫荧光染色和免疫共沉淀方法检测VPS26与β-联蛋白(β-catenin)的结合,双荧光素酶报告实验检测萤火虫荧光值/海肾荧光值(以下简称TOP/FOP)比值。取18只雄性12周龄高脂血症Wista大鼠(体质量为160~200 g),于其双侧股骨干骺端植入种植体,分为3组,每组6只,分别注射VPS26过表达慢病毒(LV-VPS26组)、阴性对照慢病毒(LV-nc组)和生理盐水(空白对照组),种植体及周围骨组织行显微CT分析和HE、油红O染色评估种植体骨结合和股骨脂滴形成。20只雌性6周龄裸鼠(体质量为30~40 g)均分为5组,每组4只,于背部皮下分别植入不转染和转染了LV-VPS26、LV-nc、shVPS26、shscr慢病毒的成骨组BMSC,取样观察异位成骨。结果过表达VPS26后高脂组BMSC中ALP的mRNA表达水平(1.56±0.09)显著高于阴性对照(1.01±0.03)(t=10.09,P<0.001),过氧化物酶增殖物活化受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPAR-γ)和脂肪酸结合蛋白4(fatty acid-binding protein4,FABP4)的mRNA表达水平则显著低于阴性对照(t=6.44,P<0.001;t=10.01,P<0.001)。蛋白质印迹法结果显示过表达VPS26后高脂组BMSC中ALP、Runt相关转录因子2的蛋白表达较阴性对照增强,PPAR-γ、FABP4则减弱,高脂组骨髓间充质干细胞ALP活性在过表达VPS26后更强,脂滴的形成较阴性对照更弱,数量更少。免疫荧光染色、免疫共沉淀和双荧光素酶报告实验结果显示VPS26与β-catenin存在共定位和相互作用,且TOP/FOP比值显著上升43.10%(t=-3.17,P=0.034)。VPS26过表达后高脂大鼠种植体骨结合增强而脂滴数量下降,HE染色结果显示VPS26过表达后裸鼠皮下支架周围组织骨量增多。结论VPS26通过Wnt/β-catenin通路激活BMSC成骨分化且抑制成脂分化,具有促进高脂大鼠种植体骨结合和裸鼠异位成骨的作用。 展开更多
关键词 牙种植体 骨结合 高脂血症 vps26 Wnt/β-联蛋白通路
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人星状病毒1型衣壳蛋白原核表达、纯化及多克隆抗体制备的研究 被引量:1
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作者 吴立梦 翁康生 +3 位作者 陆晔 陈敏 吴凡 王文静 《生物医学工程与临床》 CAS 2012年第3期272-278,共7页
目的表达纯化人星状病毒1型(HAstV-1)衣壳蛋白VP26片段,制备多克隆抗体,初步建立夹心酶联免疫吸附分析(ELISA)检测病毒抗原方法,为进一步大量表达VP26片段、构建基因工程疫苗和临床检测奠定基础。方法利用原核表达系统在大肠杆菌中克隆... 目的表达纯化人星状病毒1型(HAstV-1)衣壳蛋白VP26片段,制备多克隆抗体,初步建立夹心酶联免疫吸附分析(ELISA)检测病毒抗原方法,为进一步大量表达VP26片段、构建基因工程疫苗和临床检测奠定基础。方法利用原核表达系统在大肠杆菌中克隆、表达重组VP26蛋白,并以Ni2+-NTA亲和层析法纯化重组蛋白,运用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、二噻啉甲酸法(BCA)实验、Western blot等方法对重组蛋白纯度、浓度、抗原性进行评价鉴定。以重组VP26蛋白作为抗原,免疫新西兰大耳兔获得多抗血清并对其效价、特异性用ELISA鉴定。结果原核表达载体pET30a(+)-VP26构建成功,重组VP26蛋白可在大肠杆菌Rosetta 2宿主菌中大量表达。免疫兔所得多抗血清效价达到1∶8 000,可以满足夹心法ELISA实验的需要。结论HAstV-1衣壳蛋白原核表达系统建立和多克隆抗体制备可以作为今后相关研究的基础,有助于对HAstV-1感染致病机制、免疫诊断和疫苗研制的更深入研究。 展开更多
关键词 人星状病毒1型 VP26片段 原核表达 多克隆抗体
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对虾白斑综合症病毒(WSSV)结构蛋白VP28与VP26的功能分析 被引量:7
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作者 刘非 寸树健 +3 位作者 杨凯 邓百煌 杨晓仪 吴文言 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期83-86,共4页
对虾白斑综合症病毒(W SSV)结构蛋白功能的研究数据还不多。怎样预测并验证那些新发现的蛋白功能,为实验研究提供理论参考,是功能基因及结构蛋白的研究重点之一。利用生物信息学技术对获得的W SSV相关数据进行分析和归纳。分析数据显示... 对虾白斑综合症病毒(W SSV)结构蛋白功能的研究数据还不多。怎样预测并验证那些新发现的蛋白功能,为实验研究提供理论参考,是功能基因及结构蛋白的研究重点之一。利用生物信息学技术对获得的W SSV相关数据进行分析和归纳。分析数据显示结构蛋白VP28与VP26在二级结构和跨膜结构域等方面具有很高的相似度;而且,这两个蛋白与任何已知的蛋白序列没有明显的同源性,但二者的氨基酸序列彼此间具45%的相似性,提示这两个蛋白可能执行相似的生理功能。一个特别设计的细胞吸附实验用于进一步研究W SSV侵染宿主细胞的过程中VP28和VP26所扮演的角色。实验结果显示,两个蛋白均可以与对虾鳃组织来源的细胞发生特异的体外吸附,表明VP28和VP26可能参与W SSV侵染宿主细胞的初始阶段。 展开更多
关键词 WSSV VP28 VP26 生物信息学 细胞吸附
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对虾白斑综合征病毒囊膜蛋白VP28和VP26的毕赤酵母组成型分泌表达 被引量:2
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作者 耿小雪 王小霞 +3 位作者 周怡 徐玮 张文兵 麦康森 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2016年第4期135-139,共5页
近年来,重组VP28和VP26蛋白作为蛋白亚单位疫苗,在增强对虾抗白斑综合征病毒(WSSV)感染的过程中具有重要作用。本研究根据Gen Bank中WSSV的基因序列设计引物,以WSSV粗提液为模板进行普通PCR扩增,得到VP28和VP26基因,再用引物悬挂法将Ec... 近年来,重组VP28和VP26蛋白作为蛋白亚单位疫苗,在增强对虾抗白斑综合征病毒(WSSV)感染的过程中具有重要作用。本研究根据Gen Bank中WSSV的基因序列设计引物,以WSSV粗提液为模板进行普通PCR扩增,得到VP28和VP26基因,再用引物悬挂法将Eco RⅠ和XbaⅠ酶切位点分别添加到VP28和VP26基因的5端和3端。目的基因经双酶切后插入到表达载体p GAPZαA,转化TOP10大肠杆菌,经博莱霉素(Zeocin)抗性筛选阳性重组酵母表达载体。AvrⅡ酶切线性化之后,电击转化X-33毕赤酵母感受态细胞,经Zeocin抗性筛选得到阳性重组酵母。SDS-PAGE电泳分析重组酵母表达上清液的目的蛋白,没有检测到VP28和VP26重组蛋白。随后,采用蛋白质银染法,结果显示,与空载p GAPZαA组相比,VP28和VP26表达上清液组有明显的条带,证明VP28和VP26在毕赤酵母中成功表达,蛋白分子量大小约为32 kDa。 展开更多
关键词 白斑综合征病毒 VP28 VP26 重组表达 毕赤酵母
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对虾白斑综合征病毒VP24和VP26原核表达及抗体制备 被引量:3
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作者 仇知光 张颖 +1 位作者 刘庆慧 黄倢 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第6期9-13,共5页
对虾白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)是一种对对虾养殖业造成巨大威胁的病毒,目前并没有有效治愈该病毒病的方法。论文将WSSV-VP24与WSSV-VP26的部分序列克隆至表达载体pBAD/gⅢA中,构建重组载体pBAD/gⅢA-VP24、pBAD/g... 对虾白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)是一种对对虾养殖业造成巨大威胁的病毒,目前并没有有效治愈该病毒病的方法。论文将WSSV-VP24与WSSV-VP26的部分序列克隆至表达载体pBAD/gⅢA中,构建重组载体pBAD/gⅢA-VP24、pBAD/gⅢA-VP26,并转化入大肠埃希菌Top10感受态细胞中。L-阿拉伯糖诱导重组体,Western blot分析表明VP24和VP26获得表达,采用Co2+亲和层析纯化目的蛋白并制备多克隆抗体。ELISA分析表明VP24和VP26多抗效价均为1∶800。 展开更多
关键词 对虾白斑综合征病毒 VP24 VP26 原核表达 多克隆抗体
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对虾白斑综合征病毒VP12的原核表达及其与VP24和VP26的相互作用 被引量:2
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作者 马方方 刘庆慧 黄倢 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第1期11-15,共5页
根据GenBank上对虾白斑综合征病毒(WSSV)囊膜蛋白基因VP12(wsv 432)的序列,设计并合成引物,PCR扩增得到VP12基因,构建重组表达载体pBAD/gⅢ–VP12并转化大肠埃希菌Top 10感受态细胞。基因工程菌株在37℃用L-阿拉伯糖诱导,表达产物经West... 根据GenBank上对虾白斑综合征病毒(WSSV)囊膜蛋白基因VP12(wsv 432)的序列,设计并合成引物,PCR扩增得到VP12基因,构建重组表达载体pBAD/gⅢ–VP12并转化大肠埃希菌Top 10感受态细胞。基因工程菌株在37℃用L-阿拉伯糖诱导,表达产物经Western blot和SDS-PAGE检测显示有与预期大小19ku相符合的目的蛋白。以Co2+亲和层析方法,获得纯化VP12蛋白。采用Far-Western blot结合ELISA方法,分析VP12与WSSV结构蛋白的作用。结果表明,VP12与囊膜蛋白VP24、VP26具有相互作用,该研究对于揭示WSSV分子组装机制,阐明其致病机理具有重要意义。 展开更多
关键词 对虾白斑综合征病毒 VP12 原核表达 VP24 VP26 相互作用
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鸭瘟病毒VP26基因克隆和分子特性分析 被引量:1
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作者 蔡铭升 程安春 +4 位作者 汪铭书 朱德康 罗启慧 招丽婵 陈孝跃 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期1112-1119,共8页
利用作者实验室已构建的DPV CHv株基因文库重组质粒的DNA测序信息,结合NCBI的ORF Finder和BLAST工具分析得到了编码该病毒VP26蛋白基因(UL35)的ORF,然后采用PCR扩增出了VP26基因并将其克隆到pMD18-T载体上,经PCR和酶切鉴定以及进一步的... 利用作者实验室已构建的DPV CHv株基因文库重组质粒的DNA测序信息,结合NCBI的ORF Finder和BLAST工具分析得到了编码该病毒VP26蛋白基因(UL35)的ORF,然后采用PCR扩增出了VP26基因并将其克隆到pMD18-T载体上,经PCR和酶切鉴定以及进一步的核酸斑点杂交试验证实该基因即为DPV的VP26基因。分子特性分析表明:该基因大小为354 bp,编码117 aa,包含1个保守结构域,为Herpes_UL35,与小衣壳蛋白家族相关并在Herpes_UL35基因编码蛋白之间高度保守,而且DPVVP26蛋白与GenBank上多种α疱疹病毒同源蛋白的核酸和氨基酸序列具有较高的同源性。系统进化树分析表明,DPV在分类地位上归属于Alphaherpesvir-us亚科,而且有可能属于新的属。另外,亚细胞定位分析表明,VP26主要定位于细胞核中。密码子偏爱性分析结果显示,编码VP26相同氨基酸的不同密码子使用频率有较大的差异,DPV VP26与大肠杆菌、酵母和人的密码子使用偏爱性差异分别有18、19和25个。上述研究结果为进一步研究DPV VP26蛋白的功能和作用机理提供分子生物学依据。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 VP26基因 克隆 分子特性
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白斑综合征病毒囊膜蛋白VP26和VP28的原核表达及多克隆抗体的制备
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作者 靳芳草 陈昊 +2 位作者 马晓燕 李鹏 周开亚 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第10期37-40,共4页
对虾白斑综合征病毒(WSSV)是一种能快速繁殖并且传播的致死病原体,在全球范围威胁虾蟹的生存。它感染的宿主范围很广,不仅侵染各种野生及养殖对虾,而且侵染其他水生甲壳类如蟹类、螯虾和龙虾等。VP28、VP26是WSSV病毒粒子的2个主要囊膜... 对虾白斑综合征病毒(WSSV)是一种能快速繁殖并且传播的致死病原体,在全球范围威胁虾蟹的生存。它感染的宿主范围很广,不仅侵染各种野生及养殖对虾,而且侵染其他水生甲壳类如蟹类、螯虾和龙虾等。VP28、VP26是WSSV病毒粒子的2个主要囊膜蛋白。本试验成功构建了其原核表达体系,制备了多克隆抗体,为进一步研究对虾白斑综合征病防治措施的免疫试验提供抗体和依据。 展开更多
关键词 WSSV VP28 VP26 原核表达 多克隆抗体
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Advances in the study of tegument protein VP26 in white spot syndrome virus
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作者 Shengyu Liao Chan Zhu +2 位作者 Dingji Shi Peimin He Rui Jia 《Aquaculture and Fisheries》 2021年第5期448-454,共7页
White spot syndrome virus(WSSV)has become one of the most widespread causes of mortality in commercial shrimp farming due to its broad host range,rapid spread and high lethality.The tegument protein VP26,which is loos... White spot syndrome virus(WSSV)has become one of the most widespread causes of mortality in commercial shrimp farming due to its broad host range,rapid spread and high lethality.The tegument protein VP26,which is loosely connected to nucleocapsid and envelope,is one of the major proteins of WSSV and has an important role in the initial stages of viral infection.Recent research has emphasized the vp26 gene,the structure of the VP26 protein,and VP26 binding proteins.Such knowledge is required to develop VP26 immune adjuvant to control WSSV.This paper reviews the related research of VP26 to provide reference for the prevention and treatment of WSSV. 展开更多
关键词 White spot syndrome virus(WSSV) VP26 Immune control
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