山萘酚调控VPS9D1-AS1/miR-377-3p对人宫颈癌细胞系SiHa增殖和凋亡的影响

目的探讨山萘酚调控长链非编码RNAVPS9D1反义RNA 1(VPS9D1-AS1)/miR-377-3p对人宫颈癌细胞系增殖和凋亡的影响。方法将人宫颈癌细胞系SiHa分为对照组、山萘酚低、中和高剂量组(5、10和20μmol/L山萘酚)、si-NC组(转染si-NC)、si-VPS9D1-AS1组(转染si-VPS9D1-AS1)、山萘酚+pcDNA-VPS9D1-AS1组(20 mg/L山萘酚+转染pcDNA-VPS9D1-AS1)、山萘酚+anti-miR-377-3p组(20 mg/L山萘酚+转染anti-miR-377-3p)。RT-qPCR、MTT法和集落形成实验分别测定VPS9D1-AS1、miR-377-3p表达、细胞活性和集落形成;流式细胞测量术、划痕试验、Transwell小室法和Western blot分别测定细胞凋亡、迁移、侵袭和Bax及Bcl-2表达;荧光素酶活性检测分析VPS9D1-AS1对miR-377-3p的靶向作用。结果与对照相比,低、中和高剂量山萘酚降低SiHa细胞中VPS9D1-AS1表达水平,集落形成数、细胞活性、Bcl-2蛋白表达水平、迁移距离和侵袭细胞数,且提高了miR-377-3p表达水平、凋亡率和Bax蛋白表达水平;作用均呈浓度依赖性(P<0.05)。SiHa细胞中沉默VPS9D1-AS1后,miR-377-3p表达水平、凋亡率和Bax蛋白表达水平高于si-NC组,且集落形成数、Bcl-2蛋白表达水平、细胞活性、迁移距离和侵袭细胞数低于si-NC组(P<0.05)。VPS9D1-AS1能靶向miR-377-3p。山萘酚处理的SiHa增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响能被过表达VPS9D1-AS1或抑制miR-377-3p所逆转。结论山萘酚通过靶向miR-377-3p下调VPS9D1-AS1,减轻宫颈癌细胞系增殖、迁移和侵袭,以及加速凋亡。

SLC9A3-AS1调控miR-148a-3p/ROCK1信号轴影响肾癌细胞生物学功能

目的检测lncRNA SLC9A3-AS1在肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)组织与肾癌细胞中的表达水平,探讨其促进肾癌细胞恶性生物学行为的机制。方法应用GEPIA2在线软件(http://gepia2.cancer-pku.cn/)分析TCGA数据库中SLC9A3-AS1在ccRCC组织中的表达水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SLC9A3-AS1在不同肾癌细胞系、24例ccRCC组织与癌旁正常肾脏组织中的表达水平;应用细胞增殖/毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和Transwell小室迁移实验检测敲低SLC9A3-AS1表达对肾癌细胞增殖与迁移的影响;应用蛋白质免疫印迹法检测增殖与迁移相关信号通路蛋白的表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证SLC9A3-AS1与miR-148a-3p/ROCK1轴的靶向调控关系。结果GEPIA2软件分析结果显示,相较正常肾脏组织,SLC9A3-AS1在肾透明细胞癌组织中表达显著上调(P<0.01)。qRT-PCR结果显示,相较癌旁正常肾脏组织,SLC9A3-AS1在24例ccRCC组织中表达显著上调(P<0.01);相较永生化肾小管上皮细胞,SLC9A3-AS1在4种肾癌细胞系中表达均显著上调,以786-O细胞最为显著(P<0.01)。干扰SLC9A3-AS1表达,可显著抑制786-O细胞的增殖与迁移能力,上调E-cadherin的蛋白表达水平,而下调N-cadherin、MMP2的蛋白表达水平(均P<0.05);过表达miR-148a-3p可显著抑制786-O细胞的增殖与迁移能力(P<0.01)。双荧光素酶报告基因检测结果表明,SLC9A3-AS1可特异性结合miR-148a-3p,后者进一步靶向结合ROCK1 mRNA的3′UTR区域;过表达miR-148a-3p可明显下调ROCK1 mRNA的表达水平,敲低miR-148a-3p表达则产生相反的效应;敲低SLC9A3-AS1表达可显著下调786-O细胞中ROCK1 mRNA与蛋白的表达水平(P<0.01);下调miR-148a-3p表达可部分逆转SLC9A3-AS1沉默对786-O细胞增殖与迁移的抑制作用(P<0.05)。结论SLC9A3-AS1在ccRCC中通过调控miR-148a-3p/ROCK1轴发挥促癌作用,有望成为ccRCC的一个新的分子标志物。

lncRNA SLC9A3-AS1在肝细胞癌中的临床意义及生物学功能分析

目的探讨lncRNA SLC9A3-AS1在肝细胞癌(HCC)中的表达意义和其参与HCC发生发展的潜在作用机制。方法收集37例HCC组织及其配对癌旁组织,以及HCC细胞RNA,利用qRT-PCR检测lncRNA SLC9A3-AS1在组织和细胞中的表达水平,并分析其与患者临床病理特征的关系。绘制lncRNA SLC9A3-AS1的受试者工作特征(ROC)曲线,分析其对HCC的诊断效能。通过生物信息学方法筛选与lncRNA SLC9A3-AS1结合的RNA结合蛋白,并绘制韦恩图,分析lncRNA SLC9A3-AS1与结合蛋白表达的相关性,以及蛋白表达与HCC病理分期和患者生存预后的关系。结果lncRNA SLC9A3-AS1在HCC组织和细胞中表达下调,其表达水平与患者血清甲胎蛋白(AFP)水平明显相关(P<0.05)。lncRNA SLC9A3-AS1的ROC曲线下面积(AUC)为0.849(95%CI:0.796~0.886)。韦恩图显示5个与lncRNA SLC9A3-AS1潜在结合的蛋白:hnRNPA1、YTHDC1、RBM4、NONO和RBMx,其表达与lncRNA SLC9A3-AS1表达呈明显正相关(P<0.05)。随着HCC分期的进展,不同分期的RNA结合蛋白表达量差异有统计学意义(P<0.05);RBM4、NONO和RBMx低表达患者总体生存期明显长于高表达患者(P<0.05)。结论lncRNA SLC9A3-AS1在HCC中下调,有望作为HCC诊断的生物标志物,并且可能通过与RNA结合蛋白互作调控HCC进展。

3D打印技术用于经鼻蝶窦入路垂体腺瘤切除术应用效果及对血清MMP-9和IGF-1水平的影响

目的:探究3D打印技术在经鼻蝶窦入路垂体腺瘤(PA)切除术的应用效果及对血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)水平的影响。方法:选取2020年5月至2022年5月秦皇岛市第一医院收治的84例PA患者,按照随机数表法将其分为观察组和对照组,每组42例。对照组行经鼻蝶窦入路垂体腺瘤切除术,观察组行经鼻蝶窦入路垂体腺瘤切除术联合应用3D打印技术,比较两组肿瘤切除效果、围术期指标、视力改善情况、MMP-9和IGF-1水平,以及鼻腔功能的鼻气道阻力(NAR)、T&T嗅觉测试评分及并发症。结果:观察组肿瘤切除效果优于对照组,差异有统计学意义(U=2.286,P<0.05);观察组手术时间、术中出血量及住院时间均少于对照组,差异有统计学意义(t=4.780、11.438、11.842,P<0.05);术后3 d、7 d时观察组血清MMP-9和IGF-1水平低于对照组,差异有统计学意义(F=7.526、4.985,P<0.05);术后1个月、3个月时观察组NAR及T&T嗅觉测试评分低于对照组,差异有统计学意义(F=6.359、8.436,P<0.05);两组视力视野改善情况及并发症发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:3D打印技术用于经鼻蝶窦入路垂体腺瘤切除术可提高肿瘤切除效果,优化手术操作,减少创伤,有利于减轻疼痛,改善嗅觉功能与视力视野,并能降低血清MMP-9、IGF-1水平,且安全性较高。

LncRNA FOXD3-AS1靶向miR-127-3p对AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)叉头盒转录基因D3反义RNA1(FOXD3-AS1)对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法采用0.001 mol/L的AngⅡ处理人主动脉VSMCs。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测FOXD3-AS1和miR-127-3p的表达水平。CCK-8、流式细胞术、Transwell、Western印迹检测细胞活力、凋亡、迁移、侵袭及磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平。双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR验证FOXD3-AS1和miR-127-3p的靶向调控关系。结果AngⅡ诱导后VSMCs细胞存活率、迁移和侵袭细胞数、FOXD3-AS1、p-PI3K和p-AKT表达显著升高,凋亡率、miR-127-3p表达显著降低(P<0.05)。抑制FOXD3-AS1表达或过表达miR-127-3p后,AngⅡ处理的VSMCs细胞存活率、迁移和侵袭细胞数、p-PI3K和p-AKT表达显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05)。FOXD3-AS1靶向负性调控miR-127-3p表达。抑制FOXD3-AS1能够逆转抑制miR-127-3p对AngⅡ处理的VSMCs细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及p-PI3K和p-AKT表达的影响(P<0.05)。结论抑制FOXD3-AS1能够降低AngⅡ诱导的VSMCs细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其机制可能与上调miR-127-3p和抑制PI3K/AKT信号通路有关。

长链非编码RNA SOX9-AS1在原发性肝细胞癌中的诊断价值

目的检测SOX9-AS1在原发性肝细胞癌(HCC)患者血清中的表达水平,并探讨其诊断价值。方法选择HCC患者、肝硬化(LC)患者、慢性乙型肝炎(CHB)患者,及同期体检健康者(HC)。采用qRT-PCR检测各组血清SOX9-AS1水平。采用ROC曲线评价血清SOX9-AS1在HCC中的诊断价值。结果HCC组、LC组、CHB组及HC组血清SOX9-AS1和AFP水平依次降低,HCC组SOX9-AS1和AFP水平最高(P<0.05)。SOX9-AS1联合AFP对HCC的诊断效能最高(P<0.05)。结论原发性肝细胞癌患者血清SOX9-AS1水平升高,血清SOX9-AS1可作为临床辅助诊断HCC的新指标。

表达鸡传染性贫血病毒VP1蛋白的新型重组血清4型禽腺病毒的构建

为研制新型鸡传染性贫血(CIA)高效疫苗以解决国内商品鸡群中普遍存在的鸡传染性贫血病毒(CIAV)感染问题,试验利用CRISPR-Cas9技术和Cre-LoxP系统,以血清4型禽腺病毒(FAdV-4)为载体,构建表达CIAV VP1蛋白的重组FAdV-4。通过间接免疫荧光试验和蛋白免疫印迹试验对重组病毒进行验证,通过体外病毒生长曲线来研究其复制效率。结果显示:该重组病毒构建成功,能有效表达CIAV VP1蛋白,命名为rFAdV-4-CIAV-VP1,且发现rFAdV-4-CIAV-VP1在LMH细胞中的复制效率远低于野生型FAdV-4。研究表明构建的重组病毒rFAdV-4-CIAV-VP1为CIAV和FAdV-4的联防联控提供了二联候选疫苗株。

乳腺癌组织中LncRNA ADAMTS9-AS1与miR-513a-5p的表达及临床意义

目的研究乳腺癌组织中长链非编码RNA(LncRNA)ADAMTS9-AS1、miR-513a-5p的表达,并分析二者的关系及临床意义。方法选取2015年8月—2017年8月诊治的乳腺癌患者83例为研究对象。应用实时定量PCR检测乳腺癌及癌旁组织中LncRNA ADAMTS9-AS1、miR-513a-5p的表达。Pearson相关分析二者的相关性,在线生物信息学软件分析二者的相互作用位点,Kaplan-Meier生存分析二者表达对乳腺癌患者预后的影响,多因素Cox回归分析影响患者预后的危险因素。结果与癌旁组织比较,乳腺癌组织中LncRNA ADAMTS9-AS1表达降低,miR-513a-5p表达升高(P<0.01)。乳腺癌组织中LncRNA ADAMTS9-AS1与miR-513a-5p表达呈明显负相关(P<0.01),且二者存在潜在的结合位点。乳腺癌组织中LncRNA ADAMTS9-AS1、miR-513a-5p表达与肿瘤分期及淋巴结转移有相关性(P<0.05,P<0.01)。Kaplan-Meier生存分析结果LncRNA ADAMTS9-AS1低表达及miR-513a-5p高表达乳腺癌患者的3年总体生存率较低(P<0.01)。乳腺癌组织中LncRNA ADAMTS9-AS1低表达、miR-513a-5p高表达、高肿瘤分期及伴有淋巴结转移是影响乳腺癌患者预后的独立危险因素(P<0.05,P<0.01)。结论乳腺癌组织中LncRNA ADAMTS9-AS1表达下调,而miR-513a-5p表达上调,二者表达与乳腺癌患者肿瘤分期及不良预后有关,可作为乳腺癌的肿瘤标志物。

长链非编码RNA ADAMTS9-AS1对胶质瘤细胞增殖和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA) ADAMTS9-AS1在胶质瘤组织中的表达与临床病理因素和预后之间的关系,及其对胶质瘤细胞生物学功能的影响及可能机制。方法采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测ADAMTS9-AS1在86例脑胶质瘤组织和36例正常脑组织中的表达水平。用KaplanMeier法评估胶质瘤患者累积生存率和无进展生存率。用RNA干扰方法(RNAi)研究ADAMTS9-AS1的生物学功能,分别用CCK8法、伤口愈合试验及Transwell侵袭实验研究ADAMTS9-AS1对胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果 lncRNA ADAMTS9-AS1在人脑胶质瘤组织与癌旁组织相比明显高表达(P <0. 05)。lncRNA ADAMTS9-AS1高表达与胶质瘤WHO分级和Karnofsky(KPS)评分显著相关(P <0. 05)。高表达的lncRNA ADAMTS9-AS1患者预后差(P <0. 05)。多变量分析显示,lncRNA ADAMTS9-AS1表达为脑胶质瘤患者总体生存率的一个独立预测因子(P <0. 05)。体外研究通过RNAi技术抑制ADAMTS9-AS1可显著抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P <0. 05)。结论 lncRNA ADAMTS9-AS1可作为治疗脑胶质瘤的靶基因和预测预后的标志物。

LncRNA ITGA9-AS1抑制乳腺癌细胞增殖并增强其对顺铂的敏感性

长链非编码RNAs(long non-coding RNAs,lncRNAs)是一类长度大于200 nt,无蛋白质编码功能的RNAs。近年来,lncRNAs在肿瘤发生发展中的作用备受关注。LncRNAs芯片分析结合后期实时荧光定量PCR验证发现,ITGA9-AS1在MCF-7细胞中的表达量显著高于耐药细胞MCF-7/5Fu,且其在乳腺癌细胞中的表达量显著低于正常乳腺上皮细胞。生物信息学预测,ITGA9-AS1无蛋白质编码功能。在乳腺癌细胞T47D中过表达ITGA9-AS1,可显著抑制该细胞的增殖和克隆形成能力,增加该细胞对化疗药物顺铂(cisplatin,cDDP)的敏感性。相反,在乳腺上皮细胞MCF-10A中敲低ITGA9-AS1的表达,能够明显增加该细胞的增殖能力和克隆形成能力,同时降低该细胞对cDDP的敏感性。总之,lncRNA ITGA9-AS1可抑制乳腺癌细胞增殖,增强乳腺癌细胞对化疗药物的敏感性。

LncRNA KIF9-AS1靶向miR-152-3p调控肺癌细胞的顺铂敏感性

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)驱动蛋白家族成员9反义RNA1(KIF9-AS1)对肺癌细胞的顺铂(DDP)敏感性的影响和作用机制。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质印记(western blot)检测检测A549、A549/DDP中KIF9-AS1、miR-152-3p和多药耐药相关蛋白1(MRP1)的表达水平。将KIF9-AS1小干扰RNA、miR-152-3p模拟物分别转染A549/DDP细胞,流式细胞术、Western blot分别检测下调KIF9-AS1或上调miR-152-3p对A549/DDP细胞凋亡和MRP1、细胞周期素D1(CyclinD1)和裂解的半胱氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase-3)蛋白表达的影响。细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力和A549/DDP细胞对顺铂的半数抑制浓度(IC50)值。双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR确定KIF9-AS1对miR-152-3p的靶向调控作用。结果与A549细胞比较,A549/DDP细胞中KIF9-AS1、MRP1蛋白表达显著升高,miR-152-3p表达显著降低(P<0.05)。下调KIF9-AS1表达或上调miR-152-3p表达后,A549/DDP细胞活力、CyclinD1蛋白表达显著降低,凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高,MRP1蛋白表达和IC50显著降低(P<0.05)。KIF9-AS1靶向负调控miR-152-3p表达。下调miR-152-3p表达可逆转下调KIF9-AS1对A549/DDP细胞活力、凋亡率、CyclinD1、Cleaved-caspase-3和MRP1蛋白表达以及IC50的影响(P<0.05)。结论下调KIF9-AS1表达可显著抑制A549/DDP细胞的增殖,促进细胞凋亡,增强A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,其机制与靶向调控miR-152-3p表达有关。

一种新型含能化合物2,3,5,6-四硝基-4H,9H-二吡唑并[1,5-a:5',1'-d][1,3,5]三嗪钾盐

以4-氨基-3,5-二硝基吡唑为原料,合成了一种新型含能化合物2,3,5,6-四硝基-4H,9H-二吡唑并[1,5-a:5',1'-d][1,3,5]三嗪的钾盐(KTNDPT),并采用红外、核磁、元素及X-单晶衍射对其化合物结构进行了表征;获得了KTNDPT的单晶并进行了晶体结构解析;采用DSC-TG研究了其热稳定能,采用高斯09程序及Trouton规则计算了KTNDPT的固相生成热,利用EXPLO5爆轰软件预估了AFTF的物化爆轰性能。结果表明:KTNDPT·H_(2)O为单斜晶系,P2_(1)/n空间群,晶包参数为a=8.330(15),b=9.869(17),c=16.61(3)Å,β=102.04(3)°,V=1335(4)Å^(3),Z=4,D_(c)=1.966 g/cm^(3),F(000)=792,μ=0.480 mm^(-1),S=1.040,R=0.1541wR(I>2σ(I))=0.3779;KTNDPT的分解点为241.6℃;KTNDPT的生成焓为331.6 kJ/mol,爆速为8647 m/s,爆压为32.0 GPa。表明KTNDPT是一种爆轰性能优良的含能离子盐,有望应用于高能推进剂中。

CCND1、MMP9在卵巢癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨卵巢癌组织中细胞周期蛋白D1(CCND1)、基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达情况及其临床意义。方法收集2019年10月—2021年12月在徐州医科大学附属医院妇产科手术的卵巢癌患者的癌组织58例,同时收集同期正常卵巢组织28例,采用免疫组化法检测组织中CCND1、MMP9的表达情况。同时收集所有患者的临床病理资料,分析CCND1、MMP9的表达与卵巢癌患者临床病理特征间的关系。采用Spearman等级相关分析评估CCND1、MMP9的相关性。结果卵巢癌组织中CCND1、MMP9阳性表达率高于正常卵巢组织(P<0.05)。CCND1的表达与卵巢癌患者的FIGO分期有关(P<0.05)。MMP9的表达与卵巢癌患者的组织学等级、FIGO分期有关(P<0.05)。Spearman等级相关分析结果显示,卵巢癌组织CCND1的表达与MMP9的表达呈正相关(r=0.372,P<0.05)。结论CCND1、MMP9在卵巢癌组织中表达升高,其表达水平与卵巢癌患者的FIGO分期、组织学等级有关,两者的表达呈正相关,可能存在相互作用,共同参与卵巢癌的进展。

褪黑素通过上调泛醌―细胞色素C还原酶核心蛋白1抑制MPP^(+)诱导的MN9D细胞凋亡和线粒体损伤

目的探讨褪黑素(melatonin,MT)在1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium ion,MPP^(+))诱导的帕金森病体外模型中的作用及分子机制。方法将MN9D细胞分为对照组、MPP^(+)组、MT组、治疗组。采用细胞计数试剂盒8检测MT和MPP^(+)对细胞活力的影响;采用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)评价线粒体功能;Hoechst/PI双染法检测细胞凋亡;通过免疫荧光蛋白质印迹法(Western blotting)检测凋亡相关蛋白[Cleaved-Caspase 3和细胞色素C(cytochrome C,CytC)]以及泛醌―细胞色素C还原酶核心蛋白1(ubiquinol-cytochrome C reductase core protein 1,UQCRC1)蛋白的表达;采用干扰RNA技术沉默MN9D细胞中UQCRC1的表达,然后采用Western blotting检测凋亡相关蛋白表达。结果MT可以减轻MPP^(+)诱导的细胞活力下降(P<0.05);恢复MPP^(+)造成的线粒体膜电位下降(P<0.05);减少MPP^(+)诱导的凋亡细胞数量(P<0.05);抑制凋亡蛋白(CytC和Cleaved-Caspase3)的表达(P<0.05);上调UQCRC1的表达(P<0.05)。沉默UQCRC1后,MT组和治疗组的UQCRC1表达均下降(P<0.05);MT对MPP^(+)诱导细胞凋亡的保护作用下降(P<0.05);凋亡蛋白(CytC和Cleaved-Caspase3)的表达增加(P<0.05)。结论MT对MPP^(+)诱导的多巴胺能神经元损伤具有保护作用,其机制可能是通过上调UQCRC1抑制神经元凋亡。

LncRNA ITGA9-AS1在卵巢癌中的表达及与顺铂化疗敏感性的关系

目的:观察长链非编码RNA(LncRNA)ITGA9-AS1在卵巢癌中的表达水平,探究其与顺铂化疗敏感性的关系。方法:选取2017年01月至2019年01月本院收治的64例卵巢癌患者,卵巢摘除手术中采集卵巢癌组织,另收集因卵巢囊肿需作手术切除但已证实无瘤细胞的正常卵巢组织标本,采用实时定量PCR(RT-qPCR)检测卵巢癌及正常卵巢组织、顺铂(DDP)耐药卵巢癌细胞SKOV3/DDP、卵巢癌细胞(OVCAR5、OVCAR8、SKOV3)及永生化卵巢上皮细胞(IOSE29、IOSE80)中LncRNA ITGA9-AS1表达水平。采用慢病毒介导LncRNA ITGA9-AS1转染并筛选稳定细胞株,MTT法检测过表达LncRNA ITGA9-AS1对SKOV3、SKOV3/DDP增殖的影响及对不同浓度(0、1、2、4、8、16 mg/L)DDP的敏感性。结果:与正常卵巢组织比较,卵巢癌组织中LncRNA ITGA9-AS1表达水平降低(P<0.05)。与IOSE29、IOSE80细胞比较,OVCAR5、OVCAR8、SKOV3及SKOV3/DDP细胞中LncRNA ITGA9-AS1表达水平显著降低(P<0.05);与SKOV3细胞比较,SKOV3/DDP细胞中LncRNA ITGA9-AS1表达水平显著降低(P<0.05)。与空白对照组及慢病毒对照组比较,慢病毒过表达组SKOV3、SKOV3/DDP细胞中LncRNA ITGA9-AS1表达水平升高(P<0.05),增殖率降低(P<0.05),细胞存活率呈DDP浓度依赖降低(P<0.05)。结论:LncRNA ITGA9-AS1在卵巢癌组织及癌细胞中低表达,过表达LncRNA ITGA9-AS1可增加卵巢癌SKOV3及卵巢癌顺铂耐药细胞SKOV3/DDP的顺铂化疗敏感性。

沉默lncRNA THAP9-AS1对乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响

目的:探讨沉默长链非编码RNA THAP9反义RNA1(lncRNA THAP9-AS1)对乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。方法:选取贵州省肿瘤医院2017年6月至2020年6月25例乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测lncRNA THAP9-AS1和miR-505-3p表达水平。将MDA-MB-231细胞随机分为s i-THAP9-AS1组、s i-NC组、miR-505-3p组、miR-NC组、s i-THAP9-AS1+ant i-miR-NC组、si-THAP9-AS1+miR-505-3p inhibitor组。采用四甲基偶氮唑盐比色(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞活性,平板克隆实验检测细胞集落形成数,流式细胞术实验检测细胞凋亡,划痕实验和Transwell检测细胞迁移及侵袭,双荧光素酶报告实验检测lncRNA THAP9-AS1和miR-505-3p的靶向关系。结果:与癌旁组织相比,乳腺癌组织中lncRNA THAP9-AS1的表达水平升高,miR-505-3p的表达水平降低(P<0.05)。沉默lncRNA THAP9-AS1或过表达miR-505-3p可降低细胞活性及迁移距离,减少集落形成数和侵袭细胞数,增加细胞凋亡率,增加E-cadherin蛋白表达水平升高,并降低N-cadherin蛋白表达水平(P<0.05)。LncRNA THAP9-AS1靶向调控miR-505-3p;抑制miR-505-3p逆转了沉默lncRNA THAP9-AS1对MDA-MB-231增殖、迁移及侵袭的影响。结论:沉默lncRNA THAP9-AS1可通过增加miR-505-3p抑制乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭,并抑制凋亡。

乳腺癌中lncRNA ITGA9-AS1表达与病理特征及新辅助化疗疗效的关系

目的研究乳腺癌中长链非编码RNA(lncRNA)ITGA9-AS1表达与病理特征及新辅助化疗疗效的关系。方法选择2015年5月至2019年5月期间在本院接受新辅助化疗的124例乳腺癌患者作为乳腺癌组,同期接受手术切除的42例乳腺良性肿瘤患者作为对照组,检测乳腺癌组织及乳腺良性肿瘤组织中lncRNA ITGA9-AS1的表达水平;根据术后病理评价乳腺癌新辅助化疗的病理完全缓解(pCR)情况,采用ROC分析lncRNA ITGA9-AS1与pCR的预测价值。结果乳腺癌组织中lncRNA ITGA9-AS1的表达水平明显低于乳腺良性肿瘤组织(P<0.05)且不同肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期、Ki-67表达的乳腺癌比较,lncRNA ITGA9-AS1的表达水平有统计学差异(P<0.05);非pCR乳腺癌组织中lncRNA ITGA9-AS1的表达水平低于pCR乳腺癌组织(P<0.05)且lncRNA ITGA9-AS1对pCR具有预测价值,最佳截断值为0.704 5。结论乳腺癌中lncRNA ITGA9-AS1低表达且与病理特征、新辅助化疗疗效有关。

非小细胞肺癌组织中AKT2、CyclinD1、MMP-9表达及其与临床病理因素的关系

背景与目的:AKT2是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,已被确定为癌基因,在多种肿瘤组织中都存在AKT2的异常表达和活化,AKT2与肿瘤的增殖和侵袭转移密切相关。本研究旨在探讨AKT2、CyclinD1、MMP-9在非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)中的表达及与临床病理因素的关系。方法:应用免疫组化的方法检测68例NSCLC组织、38例相应的癌旁组织和14例非肿瘤性肺组织标本中AKT2蛋白、CyclinD1、MMP-9的表达,采用!2检验分析临床病理因素与上述指标的相关性。结果:AKT2、CyclinD1、MMP-9在NSCLC组织中阳性率分别为91.2%、76.5%、72.1%,显著高于癌旁及非肿瘤性肺组织中阳性率(3.8%、0%、13.5%)(P<0.05)。AKT2的表达与患者年龄、性别、肿瘤类型及分化程度、TNM分期无关(P>0.05),与淋巴结转移有关(P<0.05)。CyclinD1、MMP-9表达与淋巴结转移、鳞癌的分化程度有关(P<0.05),MMP-9还与TNM分期有关(P<0.05)。AKT2的表达与CyclinD1、MMP-9呈正相关。结论:AKT2、CyclinD1、MMP-9均与肺癌的发展有关,CyclinD1、MMP-9的高表达可能与AKT2的调节有关。

NP9基因的克隆及对细胞周期素D1转录活性的影响

背景与目的:NP9基因是我们在鼻咽癌中克隆到的一个新的表达下调的基因(GenBank登录号:BF718797),为了进一步研究该基因的功能,我们构建了人NP9基因编码区序列的真核表达质粒,并研究其表达对细胞周期素D1(cyclinD1)的影响。方法:通过核苷酸同源序列比较(BlastN)得到NP9EST的同源cDNA,RT-PCR扩增其编码区序列并构建真核表达重组质粒pRc/CMV2-NP9,脂质体转染后G418筛选出稳定、高效转录NP9基因的细胞克隆;再通过脂质体转染cyclinD1promoterLuc和NF-κB-Luc质粒到稳定表达NP9基因的细胞克隆,测定荧光素酶的活性以确定NP9基因对cyclinD1和NF-κB转录活性的影响;同时亚克隆NP9基因编码序列到载体pEGFP-C1中,脂质体转染细胞以确定NP9蛋白在细胞中的定位。结果:融合的绿色荧光蛋白出现于细胞核。G418抗性克隆中,RT-PCR扩增证实部分克隆表达NP9基因,且强弱不同。表达NP9基因的细胞克隆在瞬间转染cyclinD1promoterLuc和NF-κB-Luc48h后,荧光素酶的活性较其对照组分别下降46%和63%。结论:NP9蛋白在细胞核内表达;NP9基因通过抑制核转录因子NF-κB的转录活性下调cyclinD1的表达。

I型鸭肝炎病毒VP1、3D基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

根据GenBank中的I型鸭肝炎病毒全基因序列设计了扩增I型鸭肝炎病毒VP1、3D基因的引物,用该特异性表达引物从I型鸭肝炎病毒cDNA模板中扩增得到目的基因VP1、3D,用相同的限制性内切酶酶切目的基因和表达载体pET32a后构建重组表达载体,转化宿主BL21(DE3),用不同浓度的IPTG诱导VP1、3D基因的表达,收集菌液进行SDS-PAGE电泳,Western-blotting分析蛋白免疫原性。结果表明,VP1、3D在大肠杆菌中表达量较高,表达产物的分子量约为48kD、68kD,并能被兔抗DHV-1血清所识别。I型鸭肝炎病毒VP1、3D蛋白在大肠杆菌中表达产物具有免疫原性。