心脏VPm RNA阳性神经细胞的研究——原位杂交法

以原位杂交方法研究中华蟾蜍心内神经细胞递质的性质 ,在四只实验动物发现血管加压素 m RNA阳性神经细胞1 2 8个 ,散在分布于心内神经节。细胞呈椭园或园形 ,以小型及中型为主 ,本文在基因水平上证实部分心内神经节细胞能合成血管加压素。并对其存在的意义进行了讨论。

成人基底前脑巢蛋白免疫阳性神经细胞的细胞化学观察

目的 探讨巢蛋白 (nestin)免疫阳性细胞在人基底前脑内的分布规律及化学特性。 方法 采用nestin 331B、10C2、Rat4 0 1抗体显示人基底前脑的nestin免疫阳性细胞 ,并应用NSE、p75NGFR、ChAT、GFAP抗体分别对nestin免疫阳性细胞进行了双标免疫细胞化学研究 ,同时还应用NADPH d进行组织化学染色。 结果 在成人基底前脑有一个连续的nestin免疫阳性细胞带 ,胞体较大 ,呈卵圆形或梭形 ,有 1～ 3个突起 ,分布于隔核、斜角带核、Meynert核、无名质及杏仁核群。双标染色显示 ,nestin阳性细胞被NSE抗体标记 ,并与ChAT、NGFR、NOS阳性神经元间杂分布 ,多数不呈交叉反应。约 2 8%nestin免疫阳性细胞为ChAT阳性神经元 ,15 %为NGFR阳性神经元 ,6 %为NOS阳性神经元。此外 ,透明隔及隔区靠近软膜处有少量nestin免疫阳性细胞 ,其形态与星形胶质细胞相似 ,不与GFAP有交叉免疫阳性反应。 结论 成人基底前脑存在一个有别于ChAT、NGFR、NOS神经元的nestin免疫阳性神经元簇 。

在大鼠生长发育中翼腭神经节一氧化氮合酶阳性神经细胞的变化

目的:观察在大鼠生长发育中翼腭神经节一氧化氮合酶(NOS)阳性神经细胞的变化。方法:用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸脱氢酶-黄递酶(NADPH-d)组织化学法及图像分析,对不同年龄组翼腭神经节NOS阳性神经细胞进行观察。结果:NOS阳性神经细胞在翼腭神经节中呈不均匀散在分布,密度自出生后呈逐渐下降趋势,到成年降至最低,并恒定直到老年。NOS阳性神经细胞胞体大小逐渐增加,至成年时最大,直至老年无明显改变。结论:翼腭神经节NOS阳性神经细胞自大鼠出生后继续发育直到成年,其变化有其自身的特点。

骨髓中CXCR4阳性细胞可表达肌细胞、肝细胞和神经细胞mRNA

已有研究证实骨髓造血干细胞转分化为组织特异性干细胞（即所谓的干细胞可塑性现象），但是对于定向组织特异性干细胞预先存在于骨髓的可能性却一直没有给予足够的重视。

大鼠创伤性脑损伤后不同时间神经细胞凋亡的变化(英文)

背景:创伤性脑损伤神经细胞存在着细胞凋亡。有研究证实Bcl-2基因参与人脑挫裂伤后神经细胞的凋亡。聚二磷酸腺苷核糖多聚酶(polyadeno-sinediphosphateribosepolymerase,PARP)是细胞凋亡的一个重要标志。目的:通过对大鼠创伤性脑损伤后PARP降解与DNA片段化的时序关系的研究,了解大鼠创伤性脑损伤后神经细胞凋亡的变化进程。设计:随机对照的实验研究。单位:白求恩军医学院和白求恩国际和平医院。材料:选择Wister大鼠30只,随机分为假手术组5只和脑损伤组25只。方法:采用Feeney等的落体撞击法造成左顶叶局限性脑挫裂伤,落体致伤冲击力为500g·cm(50g,10cm),分别于损伤后2,6,12,24,48h处死取样。分别采用末端标记法测定DNA片段化,免疫组化法检测PARP降解。光镜下观察阳性细胞所在部位及形态,苏木精-伊红染色作对照观察。主要观察指标:损伤后脑皮质PARP降解与DNA片段化阳性细胞数。结果:脑损伤后2h开始出现PARP降解,主要集中于损伤灶边缘部位。6h开始出现DNA片段化,最高密度均集中于损伤灶边缘部位,随时间推移,损伤灶深部区可见散在单个阳性细胞。其中PARP降解高峰出现在12～24h(48～46个阳性细胞/切片,t=-34.434,-41.196,P<0.001),DNA片段化出现高峰在24～48h(60～56个阳性细胞/切片,t=-39.430,-61.933。

人脐血单个核细胞向神经细胞分化

目的 :观察培养前后人脐血单个核细胞 (MNCs)的形态学及免疫反应性变化 ,探讨其能否向神经细胞的分化及机制。方法 :密度梯度离心脐血中单个核细胞 ,接种并用EGF和bFGF刺激细胞生长 ,倒置显微镜下观察培养前后细胞形态变化 ,并行免疫细胞化学鉴定。结果 :培养前脐血MNCs胞体小呈圆形 ,nestin阳性细胞、MAP2阳性细胞散在分布 (阳性率为 1 .5 %和 3 .4% )无GFAP阳性细胞着色。培养 1 4d后 ,细胞群中相邻细胞突起连成网状 ;MAP2、GFAP染色阳性细胞成片状分布 (阳性率 3 3 .5 %和 2 4.6% ) ,未见nestin阳性细胞。结论 :脐血细胞中可能有多能干细胞 。

一氧化氮合酶1、神经细胞PAS域蛋白4和外中心粒物质1基因型与偏执型精神分裂症表型的关联性

目的探讨一氧化氮合酶1(NOS1)、神经细胞PAS域蛋白4(NPAS4)和外中心粒物质1(PCM1)基因单核甘酸多态性(SNP)与精神分裂症的关联性。方法选择来自豫北地区在河南省精神病医院住院的偏执型精神分裂症患者516例(病例组)和同地区健康正常人516例(对照组),采用荧光定量聚合酶链反应对NOS1、NPAS4和PCM1基因的5个功能SNP位点进行基因分型,分析SNP与疾病的关联性。进一步分析阳性和阴性症状量表(PANSS)因子分与NOS1、NPAS4和PCM1基因多态性的关联。结果 NOS1(rs3782219、rs3782221)、NPAS4(rs7947391)及PCM1(rs445422、rs370429)5个SNP位点基因型和等位基因频率在病例组和对照组中的分布差异均无统计学意义(P>0.05)。病例组与对照组NOS1基因的2个SNP位点(rs3782219、rs3782221)组成3种单体型(A-A、G-A、G-G)及PCM1基因2个SNP位点(rs445422、rs370429)组成3种单体型(A-A、G-A、G-G)频率的差异均无统计学意义(P>0.50)。NOS1基因的rs3782219基因型与兴奋/敌对因子,rs3782221基因型与抑郁/焦虑因子、兴奋/敌对因子的差异有统计学意义(P<0.05);NPAS4基因的rs7947391与阳性因子分的差异有统计学意义(P<0.05);PCM1基因的rs445422与PANSS总分、阴性因子分、认知因子分的差异有统计学意义(P<0.05),rs370429与PANSS总分、阴性因子、认知因子分的差异有统计学意义(P<0.05)。结论 NOS1基因的rs3782219和rs3782221位点、NPAS4基因的rs7947391位点以及PCM1基因的rs445422和rs370429位点可能不是精神分裂症的易感位点,但这些基因SNP位点基因型可能参与了精神分裂症表型特征。

人参皂甙对大鼠慢性颈髓损伤中神经细胞凋亡的影响

【目的】探讨大鼠慢性颈髓损伤后人参皂甙对神经细胞凋亡的影响。【方法】4月龄SD大鼠随机分为3组：A组（对照组），切开颈椎后方皮肤后即缝合；B组（模型组），破坏大鼠颈椎后柱稳定性建立慢性颈髓损伤模型，造模后立即腹腔注射生理盐水2μg／kg，以后每周注射一次；C组（人参皂甙干预组），建立模型后立即腹腔注射人参皂甙100mg／kg，以后每周注射一次；在此基础上另设D组（人参皂甙＋IL-10干预组），建立模型后立即腹腔注射人参皂甙100mg／kg和IL-10 5μg／kg，以后每周注射一次。腹腔麻醉取C4～C6脊髓行组织学切片，苏木素伊红（HE）染色观察形态学变化，TUNEL免疫荧光法测定颈脊髓神经细胞凋亡情况，免疫组化法测定颈脊髓IL-10的表达。【结果】成功建立大鼠慢性颈髓损伤模型，光镜下C、D组较B组病理改变明显改善，3个月及5个月时，相同时间点B、C组IL-10的表达与A组比较均明显增高，C组高于B组有显著统计学差异（P〈0．01）；且A、B、C各组内比较5个月的表达高于3个月时的表达，有显著统计学差异（P〈0．01）。5个月时，A组大鼠脊髓组织TUNEL阳性细胞极少，B组有大量的阳性细胞，C、D组有少量的阳性细胞，D组最少，但均多于A组。【结论】人参皂甙都能抑制慢性颈脊髓损伤中神经细胞的凋亡，促进脊髓神经功能恢复，其作用可能与增高IL-10表达相关，联合运用IL-10可显著提高其疗效。

大鼠脑缺血预处理对额叶神经细胞凋亡和P^(53)蛋白表达的影响

目的 探讨大鼠短暂性全脑缺血预处理对再次脑缺血额叶神经细胞凋亡和P53蛋白表达的影响。方法 采用改良的 Pulsinelli 4血管阻断(4VO)方法,建立SD大鼠急性全脑缺血及预处理模型。雄性SD大鼠随机分为三组:预处理对照组,给予 3min全脑缺血;预处理缺血组,先给予3min全脑缺血,48h后在给予全脑缺血15min;缺血组,仅给予全脑缺血15min。采用 TUNEL方法观察额叶神经细胞凋亡,SP免疫组化方法检测P53蛋白的表达。结果 预处理对照组未见TUNEL阳性细胞,仅见个别 P53蛋白阳性细胞。预处理缺血组与缺血组相比,再灌注后48h、72h及7d额叶TUNEL阳性细胞数显著减少(P<0.01)。预处理缺 血组与缺血组相比,再灌注后48h、72h及7d额叶P53阳性细胞数显著减少(P<0.01)。结论 全脑缺血15min后额叶神经细胞 凋亡和P53蛋白表达增多。全脑缺血预处理能减少额叶缺血再灌注后神经细胞凋亡和P53蛋白的表达。

人骨髓基质细胞分化为神经元样细胞的研究

目的:探讨人骨髓源性神经干细胞分化为神经细胞的可行性,为中枢神经组织损伤修复寻找种子细胞的理想来源。方法:无菌取成人髂骨骨髓,密度梯度离心分离后获得骨髓基质细胞(bonemarrowstroualcells,BMSCs);在神经干细胞培养液及细胞因子等条件下诱导为神经元样细胞,通过免疫细胞化学方法对诱导后细胞进行鉴定;通过高效液相色谱法(HPLC)检测诱导后细胞合成分泌神经递质去甲肾上腺素(NE)的能力。结果:分离得到的成人BMSCs培养10～14d后,细胞呈半贴壁状,胞体饱满,Nestin抗原染色阳性。培养20d后,在诱导因子作用下进一步分化为神经元样细胞(NLCs),具有细长双极或多极突起,神经核蛋白(NeuN)抗原表达阳性。HPLC检测BMSCs、空白神经干细胞培养液未测到NE,经体外诱导培养8,11d的神经干细胞、体外诱导分化20d的NLCs均可检测到NE,神经干细胞(8,11d)的NE含量为(10.4146±1.0425),(28.3359±3.8371)μg/L小于NLCs(20d)组(52.1342±3.9136)μg/L,差异有非常显著性意义(F=126.64,P=0.0000)。而且随着BMSCs培养天数的增加,其所含的NE浓度也渐增加(P<0.05)。结论:在适宜培养条件及诱导因子联合作用下,人BMSCs可被成功诱导为神经细胞,并具有合成分泌神经递质成分的能力。

丁咯地尔对大鼠坐骨神经损伤后背根神经元凋亡及Caspase-3、Bcl-2表达的影响

目的:研究丁咯地尔对大鼠坐骨神经损伤后背根神经元凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Bcl-2表达的影响。方法:将48只成年健康SD大鼠随机分为正常组、模型组、丁咯地尔组,预处理14 d后制作坐骨神经损伤动物模型,分别在模型制备后12,24,72 h与7 d各组提取L1～5背根神经节,用原位末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸标记法(TUNEL法)检测神经细胞的凋亡水平和用免疫组化方法计数Caspase-3、Bcl-2阳性细胞表达数,并加以组间比较。结果:正常组大鼠背根神经细胞凋亡和Caspase-3阳性细胞较少;而模型组在坐骨神经损伤后12 h,神经细胞凋亡及Caspase-3阳性表达数明显增多,72 h达高峰,7 d表达减弱;丁咯地尔组在坐骨神经损伤后12 h,神经细胞凋亡及Caspase-3阳性表达数也增多,但较模型组减少(P<0.05),24 h至7 d均较同期模型组明显减少(P<0.01);丁咯地尔组于模型制备后12 h Bcl-2即有明显表达,72 h达高峰,7 d时与模型组比较仍有明显差异(P<0.05)。结论:坐骨神经损伤后背根神经元存在广泛的细胞凋亡现象,丁咯地尔通过抑制Caspase-3蛋白表达,上调Bcl-2表达,从而抑制细胞凋亡来发挥其神经保护作用。

赡蜍心生长抑素能神经结构研究原位杂交／免疫组化技术

赡蜍心生长抑素能神经结构研究原位杂交／免疫组化技术李光千，范玉华同济医科大学解剖学教研室武汉４３００３０）生长抑素（ＳＳ）有明显抗去甲肾上腺素作用，既减弱心肌收缩力，又减缓心率，具临床运用前景。但心内ＳＳ－阳性神经结构有显著种属差异。本文选用赔额心脏...

烫伤大鼠小肠肌间神经丛bax/bcl-2表达的变化及银杏叶提取物的保护作用

目的:观察烫伤大鼠小肠肌间神经丛Bax/Bcl-2蛋白的表达特征,了解银杏叶提取物(EGb)干预的作用机制。方法:动物分烫伤组和治疗组,各组于不同时间点处死、取材,制成肠肌间神经丛铺片。采用免疫组织化学方法,进行Bax/Bcl-2检测。结果:Bax/Bcl-2的表达是以烫伤后24h阳性最强,以后随着时间延长而逐渐下降;治疗组较对应时间点的烫伤组Bax阳性信号明显减弱,Bcl-2阳性信号明显增强。结果:细胞凋亡是大鼠严重烫伤后小肠肌间神经丛神经元丢失的重要原因,而Bax/Bcl-2是参与神经细胞凋亡的重要凋亡调控基因。并推测EGb具有显著的保护作用,其机制可能与影响Bax/Bcl2基因表达,而起到保护烫伤后迟发性神经细胞死亡的作用有关。

大鼠急性脊髓损伤后白细胞介素-1β表达及其与神经细胞凋亡的关系

目的探讨脊髓损伤(SCI)后白细胞介素(IL)1β表达的变化及其与神经细胞凋亡的关系。方法采用Allen’s法建立大鼠急性SCI模型,用实时定量聚合酶链反应(PCR)和免疫组织化学染色检测SCI后IL1β表达,用原位末端标记法(TUNEL)检测SCI后神经细胞凋亡。结果对照组IL1βmRNA为4.87±0.49,SCI后早期IL1βmRNA明显升高,于伤后6h达高峰为6.95±0.95,两组间差异有统计学意义(P<0.01);免疫组织化学染色也显示伤后6hIL1β染色强度明显增加。TUNEL染色显示,对照组大鼠脊髓组织TUNEL阳性细胞极少(1.82±0.64),伤后6h有少许凋亡细胞出现,24hTUNEL阳性细胞增多最明显(32.38±4.75)。IL1β表达升高与TUNEL阳性细胞增多有明显的关系。结论SCI后IL1β表达升高,它可能参与了诱导神经细胞凋亡。

人脐带间充质干细胞向神经细胞分化的研究

目的研究人脐带分离的间充质干细胞向神经细胞分化的可能性.方法将剔除动静脉的新鲜人脐带组织切成小块培养,得到贴壁细胞;经传代培养、细胞周期分析、流式细胞检测后,再以不同方案诱导向其神经细胞分化,并以免疫荧光和RT-PCR方法进行鉴定.结果培养5-7d后,有细胞从组织块中游出.细胞传代培养达23代后无明显的形态和增殖能力改变.细胞周期分析表明80%以上的细胞都处于G0～G1期.流式细胞检测表明这些细胞表达CD13、CD29、CD44、CD90、CD105和CD166等MSCs标志物.经神经分化诱导后,部分细胞呈现出与神经元或神经胶质细胞类似的形态;免疫荧光检测表明,第二神经分化诱导方案优于第一方案,其NSE和MBP阳性细胞分别达80.8%±3.9%、4.2%±1.3%,但未能见到GFAP阳性细胞.RT-PCR进一步证实了这些神经标志物的表达.结论人脐带间充质干细胞具有向神经细胞分化的潜能,可作为神经系统疾病细胞移植治疗的备选来源.

起源于卵巢成熟性畸胎瘤的神经细胞瘤一例

中枢/脑室外神经细胞瘤是WHOⅡ级伴神经元分化的中枢神经系统肿瘤。中枢神经细胞瘤发生于脑室内,脑室外神经细胞瘤可发生于整个中枢神经系统。中枢神经系统外神经细胞瘤非常罕见。该文报道1例27岁女性起源于卵巢成熟性畸胎瘤的神经细胞瘤。镜下肿瘤由一致的小圆细胞构成,位于纤丝背景内,并与衬覆室管膜样细胞的囊肿相邻。免疫表型:突触素、神经元特异性烯醇化酶阳性,神经元核抗原及神经胶原酸性蛋白阴性,Ki-67阳性指数1%。细胞遗传学分析未发现染色体1p及19q共缺失。中枢神经系统外神经细胞瘤非常罕见,大多起源于畸胎瘤,相较发生于中枢神经系统内的肿瘤,两者免疫表型存在轻度差异。

自发性急性犬瘟热的原发性脱髓性脑病(英文)

为了进一步观察犬瘟热病毒引起的原发性脑损伤和包涵体形成的特点,调查脑组织的损伤与神经症状的关系,对10只急性犬瘟热病犬的脑组织进行了详细的病理学研究。为了仔细地观察病变,本试验按照解剖学关系将脑组织分成3个大部分和11个切面,即大脑(4个切面),脑干(5个切面)和小脑(2个切面)。组织切片经HE、LFB和免疫组织化学染色后进行检查,结果表明在大脑,脱髓呈弥漫性发生,程度较轻;脑干的周围或靠近第三脑室的白质脱髓较重;小脑在轻度或中度脱髓的基础上常出现严重的多发性脱髓灶。脱髓部呈空泡或海绵状,有少量胶质细胞存在,但无炎性反应。脱髓性病损是非对称性发生,对神经束没有特殊的亲和力。在脑室的室管膜细胞内发现有较多的嗜酸性胞浆或核内包涵体。用抗犬瘟热病毒抗体染色,带有包涵体的室管膜细胞呈现强阳性反应。部分锥体细胞,神经核细胞和浦氏细胞变性、溶解或胞浆深染,胞核浓缩。这种变化以小锥体神经细胞表现得最为明显。根据此研究结果,作者认为由犬瘟热病毒引起的原发性脑组织损伤是一种脱髓性脑病,而不是脑炎变化;位于室管膜细胞内的包涵体对于脑组织犬瘟热的确诊具有重要的作用;由于犬瘟热病毒引起神经细胞的损伤是非特异性的,对脑组织的侵害是非对称性的,对神经束的作用无特殊的亲和力,所?

腺苷预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的脑保护作用

目的观察腺苷预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的改善作用及脑保护机制。方法线栓法建立大鼠局灶性脑缺血2 h后再灌注损伤模型;SD大鼠60只,随机分为假手术组(F组),缺血再灌注组(IR组),腺苷预处理组(AP组),每组20只;通过HE染色在光镜下观察神经细胞损伤变化,免疫组化法检测Bax蛋白的阳性表达。结果光镜下,假手术组(F组)神经细胞结构正常,腺苷预处理组(AP组)和缺血再灌注组(IR组)均有不同程度的缺血再灌注损伤,腺苷预处理组较缺血再灌注组损伤轻;假手术组Bax蛋白表达极弱,缺血再灌注组和腺苷预处理组在脑缺血再灌注后2 h接近缺血核心区出现Bax蛋白阳性表达,6 h后表达增多,24 h达到高峰,72 h开始减少。与假手术组相比,腺苷预处理组和缺血再灌注组Bax蛋白阳性细胞数显著增多(P<0.05);与缺血再灌注组相比,腺苷预处理组Bax蛋白阳性细胞数显著减少(P<0.05)。结论腺苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用,腺苷可通过下调Bax蛋白的表达发挥脑保护作用。

氨基胍对大鼠创伤性脑损伤的保护作用

目的探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂氨基胍(AG)对大鼠创伤性脑损伤(TBI)的神经保护作用。方法采用改进的Feeney法大鼠脑损伤模型,对生理盐水(NS)组和AG组SD大鼠于伤后6 h分别腹腔注射NS或AG,每隔24 h注射1次,连续注射3次。分别于致伤后24h、72 h1、68 h取样,采用iNOS免疫组化技术,研究大鼠TBI后iNOS的表达及其细胞定位,采用凋亡细胞原位缺口末端标记法(TUNEL),观察大鼠TBI后不同时点的神经细胞凋亡情况。结果大鼠TBI后24 h,大脑损伤区周围皮质和伤侧海马iNOS阳性表达,TUNEL阳性细胞均明显增多,伤后72 h表达最明显,伤后168 h仍有表达;注射AG后,大脑损伤区周围皮质和伤侧海马的iNOS阳性细胞和TUNEL阳性细胞均明显减少(P<0.01)。结论TBI后损伤区周围皮质和伤侧海马可出现iNOS阳性细胞高表达和神经细胞凋亡,且呈相关性变化,推测iNOS的过度表达可能参与了TBI后继发性神经细胞凋亡,使用AG能明显减少iNOS阳性细胞的表达和神经细胞的凋亡。