血清型特异性水泡性口炎病毒同步检测和鉴别方法的建立

为准确地鉴别诊断新泽西型水泡性口炎病毒(VSV-NJ)和印第安纳型水泡性口炎病毒(VSV-IND),本研究建立了可以同时检测和鉴别诊断VSV-NJ和VSV-IND的双重荧光RT-PCR方法,并对方法性能进行了测试和初步应用。结果显示,建立的双重荧光RT-PCR特异性为100%,最低检测限1~10个拷贝/μL,扩增效率E值均在99%左右,R2值分别为0.999和0.998。VSV-NJ和VSV-IND单荧光RT-PCR与双重荧光RT-PCR的相关性系数分别为0.9997和0.9994,与单荧光RT-PCR相比,该引物和探针的双重体系混合对特异性和敏感性均未产生明显干扰。用已知VSV-NJ及VSV-IND阳性核酸验证,发现符合率为100%,对50份临床样品的检测均为阴性,与单荧光RT-PCR结果一致。本研究建立的双重荧光RT-PCR方法实现了VSV-NJ和VSV-IND的同步检测和鉴别,为水泡性口炎的防控提供了技术储备。

多重荧光RT-PCR同步检测及鉴别诊断口蹄疫和水泡性口炎

本研究建立了可以同时检测和鉴别通用型口蹄疫病毒(FMDV)、新泽西型水泡性口炎病毒(VSVNJ)和印第安纳型水泡性口炎病毒(VSV-IND)的多重荧光RT-PCR方法,并进行了验证和应用。结果显示,建立的多重和单一荧光RT-PCR扩增效率E值约100%,R2>0.999,扩增效果良好,最低检测限可达到约10 copies/μL,方法特异性为100%。FMDV、VSV-NJ和VSV-IND单一荧光RT-PCR与多重荧光RT-PCR之间的相关性系数分别为0.9995、0.9998和0.9994,与单一荧光RT-PCR相比,多重混合对特异性和敏感性均未产生明显干扰。用已知的FMDV和VSV-NJ及VSV-IND阳性核酸19份验证,符合率为100%。经国家口蹄疫参考实验室分别对62份阳性、50份阴性FMDV样品进行验证,结果一致。从100份临床样品中筛查到10份FMDV阳性,未见混合感染,与单一荧光RT-PCR结果相符。本研究建立的多重荧光RT-PCR方法实现了一次检测同时鉴别多重病毒的目的,适用于混合感染水泡性疫病的临床快速筛查。